播种期对夏天无(Corydalis decumbens)块茎生长及主要药效成分的影响

研究不同播种期对夏天无块茎生长及主药效成分的影响,旨在为改良夏天无栽培技术提供理论依据。结果表明:(1)随着夏天无播种期的推迟,其出苗和新块茎形成时间相应推迟,但播种期对其地上部枯萎时间无影响;另外,播种早的材料能够开花,而播种晚的材料不能开花。(2)在3月下旬,不同播种期夏天无块茎生长均呈迅速上升的趋势,而从4月5日起,10月23日和11月4日2个时期播种的块茎其生长量呈现下降趋势,11月14日和11月25日两播种期播种的块茎生长呈现继续缓慢上升趋势;另外,开花前块茎生长迅速,开花后则块茎生长量下降,在花期对夏天无进行摘花处理可显著增加块茎产量。(3)不同播种时间对夏天无主药效成分原阿片碱和延胡索乙素含量的影响差异不显著。试验表明,夏天无在10月下旬至11月上旬播种为宜。

夏天无生物碱的高速逆流色谱分离纯化

采用pH-区带精制逆流色谱与常规高速逆流色谱相结合的方法快速分离纯化夏天无总生物碱。利用pH-区带精制逆流色谱对夏天无总生物碱进行分离,以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5∶5∶2∶8,V/V,上相加5mmol/L三乙胺,下相加5mmol/LHCl)为溶剂系统,上样量3.0g,分离得到1个混合物和3个高纯度的生物碱单体:原阿片碱(375mg)、苏元胡碱甲(362mg)和比枯枯灵(246mg),其纯度分别为97.5%,95.6%和97.1%。所得混合物850mg经常规高速逆流色谱二次分离,以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶0.8∶1.1∶1,V/V)为溶剂系统,得到比枯枯灵(105mg)和四氢巴马亭(470mg)单体,纯度分别为99.1%和99.7%。从该药材分得苏元胡碱甲,两种制备分离模式相结合,提高了夏天无生物碱的分离效率。

夏天无对坐骨神经损伤小鼠损伤区微环境的影响

目的研究夏天无Corydalis decumbens(Thunb.)Pers.对坐骨神经损伤小鼠损伤区微环境的影响。方法 30只小鼠随机均分为模型组、夏天无组、假手术组,Masson染色检测损伤区胶原纤维、炎性细胞、神经纤维分布,免疫荧光染色检测层黏连蛋白(LN)、施万细胞标记物S-100、小G蛋白Rac1表达及轴突再生情况,HE染色检测神经功能恢复情况。结果与模型组比较,夏天无组胶原纤维、炎性细胞减少,神经纤维有序,LN、Rac1、S-100表达,再生轴突数量,腓肠肌纤维横截面积和腓肠肌质量显著增加(P<0.05)。结论夏天无可通过减少胶原纤维生成和炎症细胞浸润,增加LN、Rac1、S-100表达,改善坐骨神经损伤小鼠损伤区微环境来促进轴突再生和神经功能恢复。

HPLC测定夏天无中原阿片碱和延胡索乙素含量

目的 :建立夏天无中原阿片碱和延胡索乙素的含量测定方法 ,为夏天无质量标准的研究提供科学依据。方法 :采用高效液相色谱法分离并测定了中药夏天无中原阿片碱和延胡索乙素的含量。色谱条件 :SupelcosilLC 18 DB柱 ,以甲醇 乙酸钠 /冰乙酸缓冲溶液 (75∶2 5 ,pH5 .0 )为流动相 ;检测波长 2 85nm。 4 86型紫外检测器检测。 结果 :此方法线性良好 ,平均加样回收率分别为 98.0 4 % ,99.6 3%。结论 :本方法精密度高 ,分离度良好 。

不同激素和浓度对夏天无愈伤组织诱导的影响

以夏天无块茎、芽及叶柄作为外植体,采用不同激素浓度配比对夏天无进行愈伤组织诱导的研究,摸索夏天无组培快繁的条件。结果表明:(1)对夏天无块茎愈伤组织诱导效果较好的激素种类及浓度配比是1/2 MS+6-BA(2 mg/L)+NAA(1 mg/L);平均诱导率达59.38%,形成愈伤组织的时间约20 d,但后期愈伤组织未分化出芽。(2)对夏天无的芽进行愈伤组织诱导研究表明,效果较好的激素种类及浓度配比是1/2 MS+6-BA(3.5 mg/L)+NAA(0.1 mg/L);平均诱导率为100%,愈伤组织7 d左右形成,且后期大多分化出芽。(3)对夏天无叶柄愈伤组织诱导效果较好的激素种类及浓度配比是1/2 MS+6-BA(3 mg/L)+2,4-D(2 mg/L);平均诱导率仅为13.89%,且后期愈伤组织未能分化成芽。

夏天无总生物碱阳离子树脂复合物的体外释放特性

目的制备夏天无总生物碱树脂复合物并对其指标性成分进行体外释药动力学考察。方法静态交换法制备夏天无总生物碱树脂复合物,以原阿片碱、延胡索乙素为指标性成分,对夏天无总生物碱树脂复合物在不同温度(37、45℃)、不同离子强度释放介质(去离子水、0.15 mol.L-1NaCl、0.6 mo.lL-1NaCl)、不同反离子溶液(0.15 mo.lL-1NaCl、0.15 mol.L-1KCl、0.15 mol.L-1盐酸)中的释药动力学进行了考察。结果体外释药动力学表明,夏天无总生物碱树脂复合物中原阿片碱和延胡索乙素的释药速率随温度的升高而加快,随溶出介质中的离子强度的增大而增大,且释药速率随反离子离子半径增大而减慢(K+<Na+<H+)。结论夏天无总生物碱树脂复合物中的原阿片碱和延胡索乙素释药速率与释放介质的离子强度、反离子种类、介质温度有关。

刻叶紫堇的生物碱成分分析

Thirteen alkaloid compounds isolated from whole plant of Corydalis incisa(Thunb.)Pers.were identified.These compounds are(+)-14-epicorynoline(Ⅰ),N-trans-feruloyltyramine(Ⅱ),corynoline(Ⅲ),acetylcorynoline(Ⅳ),corynoloxine(Ⅴ),protopine(Ⅵ),corycavine(Ⅶ),(+)-corytuberine(Ⅷ),corydamine(Ⅸ),corysamine(Ⅹ),coptisine(Ⅺ),dehydrocheilanthifoline(Ⅻ) and 12-hydroxycorynoline(ⅩⅢ).CompoundⅡ,Ⅷ and Ⅻ are obtained from C.incisa for the first time.

高效液相色谱-串联质谱法同时测定夏天无中的4种生物碱

建立了高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱同时测定夏天无中4种生物碱的分析方法。夏天无样品用甲醇超声提取,提取溶液过滤并用甲醇稀释后分析。色谱分离采用C18反相色谱柱(150 mm×2.1 mm,3.5μm),流动相为0.2%乙酸水溶液和乙腈,梯度洗脱。电喷雾串联质谱在多反应监测(MRM)模式下检测目标分析物,以保留时间和特征离子对(母离子和两个碎片离子)信息比较进行定性分析和定量分析。4种生物碱的检出限(LOD)为0.02～0.2μg/L,定量限(LOQ)为0.07～0.66μg/L,加标回收率为93.6%～103.5%,相对标准偏差小于3.8%。该方法简便、准确、灵敏,可用于夏天无中药材的质量控制。

5种中药注射液对脂质过氧化及活性氧自由基作用的影响

本文用比色法和化学发光分析法测定丹皮酚、柴胡、当归、天麻、夏天无注射液对大鼠肝匀浆过氧化脂质（LPO）影响及对H2O2-鲁米诺发光体系中H2O2的清除作用。体外实验结果表明：5种中药注射液均可抑制大鼠肝匀浆在37℃振荡温浴条件下引起的丙二醛升高，与对照组相比有显著性差异（P＜0．01）；对H2O2有不同程度的清除作用。说明5种注射液有抗氧化作用，其抗炎作用可能与抗氧化作用有关。

夏天无愈伤组织诱导的初步研究

以传统中药夏天无为试材,研究了不同消毒方法、不同外植体和不同激素配比对其愈伤组织诱导的影响。结果表明:叶片消毒以0.1%氯化汞浸泡10min较好,块茎、叶柄以消毒8min为好;叶柄作为外植体比块茎、叶片更适合;叶片诱导愈伤组织的最佳激素配比为0.5mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA,诱导率为43.3%,而叶柄诱导愈伤组织的最佳激素配比为1.0mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA,诱导率高达80%。

高速逆流色谱法分离小花黄堇中延胡索乙素和原阿片碱

目的高速逆流色谱法分离纯化小花黄堇中延胡索乙素和原阿片碱。方法采用高速逆流色谱法进行分离,以正已烷-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶8∶12∶8,V/V)为溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,转速:800r.min-1,流速:2mL.min-1,检测波长:280nm。结果从小花黄堇总生物碱提取物中分离得到延胡索乙素和原阿片碱,纯度分别可达99.2%和99.6%。结论利用高速逆流色谱法可高效分离和纯化小花黄堇中延胡索乙素和原阿片碱。

基于Critic⁃G1法结合响应面法优选夏天无醋炙工艺

目的:采用Box⁃Behnken设计⁃响应面法(BBD⁃RSM)优选夏天无的最佳醋炙工艺。方法:通过单因素试验确定炮制过程中的关键影响因素以及范围,结合响应面试验设计法对醋用量、浸润时间、炒制温度、炒制时间4个因素进行考察,以水分、灰分、浸出物、生物碱(原阿片碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素、比枯枯灵碱)含量为衡量指标,以Critic法结合G1法计算权重系数,通过综合评分优选夏天无醋炙工艺;结果:夏天无醋炙的最佳炮制工艺为加30%醋浸润1 h,于170~190℃炒制5 min,OD值为95.33,3次验证性试验得到的OD值分别为95.05、96.51、95.36,RSD为0.80%,说明BBD⁃RSM优化得到夏天无醋炙工艺回归模型的预测值与实测值接近,重复性良好,模型预测效果较好,具有合理性和可行性。结论:该研究可为规范夏天无的炮制工艺提供参考;且建立的同时测定夏天无中4种生物碱类成分含量的方法快速可靠,可用于夏天无药材的质量控制。

HPLC法同时测定夏天无注射液中3个有效成分的含量

目的:建立高效液相色谱法测定夏天无注射液中原阿片碱、延胡索乙素、巴马汀3个有效成分的含量。方法:DiamonsilC_(18)色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相 A:乙腈,流动相 B:醋酸-三乙胺溶液(每1000 mL 水中加入冰醋酸30 mL,三乙胺8 mL),进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长280 nm,柱温:25℃。结果:原阿片碱、延胡索乙素、巴马汀的线性范围分别为8.56～171.2μg·mL^(-1)(r=0.9998),7.12～142.4μg·mL^(-1)(r=0.9997),6.72～134.4μg·mL^(-1)(r=0.9996);回收率(n=3)分别为99.3%～100.4%(RSD≤1.1%),99.8%～100.0%(RSD≤1.5%),99.4%～99.9%(RSD≤0.9%)。结论:所建立的 HPLC 方法准确、快速,可用于夏天无注射液中原阿片碱、延胡索乙素、巴马汀的含量测定。

不同等级夏天无指纹图谱建立及6种成分测定

目的建立不同等级夏天无Corydalis decumbens(Thunb.)Pers.HPLC指纹图谱,并测定原阿片碱、盐酸巴马汀、比枯枯灵碱、延胡索乙素、四氢药根碱、紫堇碱的含有量。方法夏天无50%甲醇提取物的分析采用e2695型Waters-C18 (4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.5%三乙胺溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长289 nm;柱温25℃。结果 42批样品指纹图谱中有12个共有峰,相似度均大于0.940。原阿片碱、盐酸巴马汀、比枯枯灵碱、延胡索乙素、四氢药根碱、紫堇碱在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率97.31%~98.23%,RSD 0.76%~1.93%。结论该方法稳定可靠,可用于夏天无的质量控制。

夏天无生物碱电喷雾质谱分析

目的:用液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS),对夏天无生物碱(四氢巴马亭、盐酸巴马亭、原阿片碱、比枯枯灵)在电喷雾质谱下的裂解途径进行探讨。方法:正离子模式下进行检测。液相色谱条件:色谱柱为Waters X BridgeTM C18反相柱(2.1 mm×150 mm,3.5μm),流动相为0.2%乙酸-乙腈,梯度洗脱,流速为0.25 mL.min-1。结果:在正离子模式下,夏天无生物碱化合物较容易失去甲醛和一氧化碳,也能够失去苯环,呈现出一定的裂解规律。结论:本文为夏天无生物碱的快速检测提供了一种有效的质谱方法。

夏天无染色体加倍技术研究

以夏天无块茎为试材,采用不同浓度秋水仙素(0.00%、0.05%、0.10%、0.20%)添加2%二甲基亚砜(DMSO)分别浸泡24、48、72h的方法,研究了不同浓度秋水仙素和不同处理时间对染色体加倍的影响。结果表明:以0.20%秋水仙素处理24h较优,成活率为31.4%,加倍率为50.0%,其次为0.10%秋水仙素处理24、48h和0.20%秋水仙素处理48h。其中,未加倍的植株染色体数为2n=28,加倍后的植株为2n=56。