嗜乙酰乙酸棒杆菌Corynebacterium acetoacidophilum-Δldh缺氧条件下代谢葡萄糖途径的变化

缺氧条件下嗜乙酰乙酸棒杆菌Corynebacterium acetoacidophilum ATCC13870生长停滞,却能够代谢葡萄糖产生以乳酸和琥珀酸为主的有机酸。采用以sacB基因为反向筛选标记的同源重组染色体基因敲除系统,敲除嗜乙酰乙酸棒杆菌的乳酸脱氢酶基因,得到的Δldh菌株CCTCC NO.M20122041在缺氧条件下不产乳酸,葡萄糖消耗速率降低了29.3%,产琥珀酸和乙酸浓度分别提高45.6%和182%;NADH/NAD+值小于1(约0.7);磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和乙酸激酶的比酶活分别提高84%和12倍。说明嗜乙酰乙酸棒杆菌中乳酸合成途径的阻断驱使了琥珀酸和乙酸代谢途径加强,推测加强NADH供给和阻断乙酸产生支路可能是提高C.acetoacidophilum菌株产琥珀酸产量的有效途径。

L-谷氨酰胺产生菌的选育和代谢流量分析

目的:建立并完善嗜乙酰乙酸棒杆菌YL012及其突变株LCHA0082合成L-谷氨酰胺的中心代谢网络。方法:分别测定了它们在特定培养时段(48h^50h)L-谷氨酰胺等代谢物的胞外浓度,由此计算这一时段这些代谢物在发酵液中积累(或消耗)的速率,分别作出这两株菌在拟稳态下的代谢流量分布图,进而研究诱变育种过程中不同诱变标记对代谢网络中L-谷氨酰胺合成流量分布的影响。结果:育种操作使流量分配朝着有利于L-谷氨酰胺合成的方向改变,流入谷氨酸节点的流量由29.198mmol/L.h上升到44.854mmol/L.h,提高到原来的1.5倍左右,合成L-谷氨酰胺的流量由18.138mmol/L.h上升至31.065mmol/L.h,效果明显。结论:从代谢流量分析角度上,证明诱变育种对代谢流量的改变起到明显的作用,代谢流量分析也为新的设计育种提供了思路。

影响L-脯氨酸生物合成因素的研究

L-脯氨酸在医药、农业、化工及食品等方面有着广泛的用途。L-脯氨酸的生产方法,以生物合成法为好,但国内由于产酸水平不高,至今尚未形成一定的生产规模。本文以嗜乙酰乙酸棒杆菌TS31为出发菌株。