一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析

利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结合蛋白。进化树分析表明该基因与SP1L5家族基因的亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-GhSP1L5,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,获得分子质量约为12 kD的重组蛋白。QRTPCR结果分析表明GhSP1L5基因在开花后15和20 dpa的纤维组织中表达量较高,在棉纤维发育的其他时期及根、茎、叶组织中表达量较低。

棉花GhSP1L基因克隆与表达分析

【目的】棉花Spiral1-LIKE(SP1L)基因(Gh SP1L)的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】通过RT-PCR从棉纤维中克隆Gh SP1L基因,进行Gh SP1L蛋白的功能结构域分析,构建原核表达载体p ET28a-GhSP1L,进行蛋白体外诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况;RT-PCR检测Gh SP1L基因的表达特征。【结果】从陆地棉纤维组织中克隆得到Gh SP1L基因的全长c DNA,其开放读码框为318 bp,编码106个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为11.76 k Da。对氨基酸序列进行生物信息学分析,其N端和C端较为保守,含有SCOP结构域,属于SP1L家族蛋白,能够在其他微管蛋白协助下与微管结合,SPR1的定位可能与其结合的微管结合蛋白相关。构建了p ET28a-Gh SP1L原核表达载体,并通过体外诱导表达后获得分子质量约为12 k Da左右的重组蛋白Gh SP1L;半定量RT-PCR结果表明,Gh SP1L基因开花后3 d的纤维组织中表达量较高。【结论】Gh SP1L基因的克隆、序列分析和表达,重组蛋白的诱导表达,为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础。