NEW COUMARINS FROM PEUCEDANUM PRAERUPTORUM

Four new coumarins named qianhucoumarins A, B, C, D have been isolated from traditional Chinese medicine-the root of Peucedanum praeruptorum. Their structures were elucidated by chemical evidences and spectral analysis.

Prenylated Coumarins from Heracleum stenopterum,Peucedanum praeruptorum,Clausena lansium,and Murraya paniculata

Four hitherto unknown prenylated coumarins,namely 600-O-b-D-apiofuranosylapterin(1),40-O-isobutyroylpeguangxienin(2),6-(3-methyl-2-oxobutyroyl)-7-methoxycoumarin(3),and 6-hydroxycoumurrayin(4),were isolated from the ethanol extract of Heracleum stenopterum,Peucedanum praeruptorum,Clausena lansium,and Murraya paniculata,respectively.Their chemical structures were established on the basis of extensive spectroscopic analysis.Compound 2 exhibited in vitro cytotoxic activity against five human cancer cell lines(HL-60,A-549,SMMC-7721,MCF-7,and SW-480)with IC50 values ranging from 15.9 to 23.2μM.

不同栽培条件下白花前胡质量特征分析

为测定不同产地、不同种植条件下的白花前胡(Peucedanum praeruptorum Dunn.)药材中白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量,分析影响白花前胡药材品质的原因。使用高效液相色谱法,采用C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(体积比为75∶25),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为321 nm。白花前胡甲素、白花前胡乙素含量分别为5.0~400.0 μg/L和2.5~200.0 μg/L时线性关系良好;白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面积的相对标准偏差分别为0.04%和0.05%。研究表明,在海拔100~800 m时,白花前胡中白花前胡甲素含量随海拔变化没有明显变化,但均达《中华人民共和国药典(2020年版)》要求;白花前胡乙素含量随着海拔升高整体呈上升趋势,海拔升高,昼夜温差变大,有利于白花前胡乙素富集;相较于施用氮磷钾复合肥,动物粪便发酵有机肥能提升2种香豆素类化合物含量;在氮磷钾复合肥基础上施用微量元素肥有利于白花前胡乙素富集。

前胡药材产地干燥加工方法研究

目的比较产地不同干燥加工方法对前胡药材质量的影响,筛选其最佳产地干燥加工方法。方法分别采用传统晒干、自然阴干和电热恒温鼓风干燥、真空干燥、红外干燥和真空冷冻干燥等干燥加工方法对前胡药材进行处理,以折干率、含水量、浸出物含量、颜色色度值以及4种香豆素类成分含量为指标,采用逼近理想解排序法进行综合质量评价。结果不同干燥加工方法下,12份前胡药材样品的折干率为31.56%~40.10%,含水量为6.96%~8.58%,浸出物含量为27.56%~43.10%,红绿度值为1.80~7.50,黄蓝度值为19.90~30.20,明度值为46.90~59.90;伞形花内酯、白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡E素的含量分别为≤0.05、3.70~14.05、0.72~2.37、0.81~3.90 mg/g,总含量为5.47~19.65 mg/g;40℃电热恒温鼓风干燥下的前胡药材综合得分最高。结论40℃电热恒温鼓风干燥是前胡药材最佳的产地干燥加工方法。

5种不同的植物激素对白花前胡种子萌发的影响

目的 研究生长素(IAA)、细胞分裂素(6-BA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)和乙烯(ET)5种植物激素对白花前胡种子萌发的影响。方法 以宁国产并在室温放置12个月的白花前胡种子为材料,把5种不同的植物激素均配制成4个梯度浓度(1×10^(-1)、1×10^(-2)、1×10^(-3)、1×10^(-4)mg·mL^(-1)),对白花前胡种子进行浸种处理。通过培养皿萌发试验,分析种子的发芽率、根长和鲜重的变化情况。结果 在4个梯度范围内,6-BA对白花前胡种子的生长状态整体起抑制作用。把1×10^(-1)mg·mL^(-1)和1×10^(-2)mg·mL^(-1)设置为高浓度,1×10^(-3)mg·mL^(-1)和1×10^(-4)mg·mL^(-1)设置为低浓度。其中6-BA无论是高浓度还是低浓度均对白花前胡种子的生长状态整体起抑制作用。而GA3和ET在高浓度(1×10^(-1)mg·mL^(-1)和 1×10^(-2)mg·mL^(-1))及ABA和IAA在低浓度(1×10^(-3)mg·mL^(-1)和1×10^(-4)mg·mL^(-1))下均对白花前胡种子的萌发率、根长和鲜重都表达出明显的促进作用。结论 植物激素对白花前胡种子的生长发育均有不同程度的影响,其中ET在1×10^(-2)mg·mL^(-1)时,对白花前胡种子的生长发育影响最为显著,白花前胡种子的萌发率,最大根长和最大鲜重均高于其他组。

接种根际促生菌对白花前胡根际土壤微生态环境的影响

【目的】研究接种不同根际促生菌(PGPR)对白花前胡根际土壤微生态环境及生长状况的影响,为微生物菌肥资源的开发及白花前胡的品质培优提供参考。【方法】采用室温盆栽方式,设9个接种PGPR处理:S1处理接种苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis),S2处理接种解淀粉芽孢杆菌(Paenibacillus amylolyticus),S3处理接种多粘芽孢杆菌(B. polymyxa),S4处理接种阿氏芽孢杆菌(B. aryabhattai)(筛选地四川),S5处理接种阿氏芽孢杆菌(B. aryabhattai)(筛选地云南),S6处理接种蜡状芽孢杆菌(B. cereus),S7处理接种运动芽孢杆菌(B. mycoides),S8处理接种蛋白水解芽孢杆菌(B. proteolyticu),S9处理接种维德曼芽孢杆菌(B. wiedmannii)。以栽培基质灭菌不接种为对照(CK)。对比分析接种不同PGPR后白花前胡根际土壤微生物数量、理化性状、酶活性及植株生长指标的差异,并进行土壤理化性质、微生物数量与生长指标的相关分析。【结果】接种不同PGPR对白花前胡根际土壤微生物数量均有一定影响,其中,细菌数量、真菌数量、放线菌数量、解无机磷菌数量、解有机磷菌数量和解钾菌数量最高值分别较CK增长295.63%、134.32%、48.17%、81.42%、251.70%和81.20%。接种PGPR后,各处理的根际土壤p H均高于CK,根际土壤碱解氮、速效磷、速效钾(S7处理除外)和有机质含量也有不同程度的提升,整体以S6处理的土壤性状指标表现较优。接种PGPR提高了白花前胡根际土壤的蛋白酶、磷酸酶和蔗糖酶活性,整体以S8处理的酶活性指标表现较优。从生长指标来看,与CK相比,接种PGPR后白花前胡的株高和茎粗增加,叶片变长,叶面积增大,多数处理的叶宽和叶柄长度有所增加。相关分析结果表明,根际土壤pH与叶宽呈显著正相关(P<0.05,下同),速效磷含量与茎粗呈极显著正相关(P<0.01,下同),速效钾含量与叶柄长度呈显著正相关,有机质含量与叶长、叶面积呈极显著正相关,与叶宽、叶柄长度呈显著正相关,细菌数量与株高呈显著正相关,解有机磷菌数量与茎粗呈显著正相关。【结论】接种PGPR可改变白花前胡根际土壤微生物菌群结构,有效提高根际土壤酶活性及养分含量,改善白花前胡生长状况,提升土壤肥力。其中以接种蛋白水解芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌效果较优。

壳寡糖对干旱胁迫下信前胡生长及叶片生理特性的影响

以信前胡盆栽幼苗作为研究材料,通过测定信前胡的株高、叶面积、生物量、含水量、根冠比和叶片抗旱相关的生理指标,研究了5、10、15 mg·L^(-1)和2 mg·L^(-1)的壳寡糖(Chitooligosaccharide,COS)溶液处理对干旱胁迫下信前胡生长和叶片生理特性的影响。结果表明,不同浓度壳寡糖对干旱胁迫下信前胡生长均有不同程度的促进作用,且随壳寡糖浓度的增加,各生长指标均表现出先增后降的趋势,均有一定的最适浓度。与单纯干旱处理相比,5、10、15 mg·L^(-1)和20 mg·L^(-1)壳寡糖处理信前胡的单株叶片数分别提高了32.5%、50.8%、29.3%和6.3%,均达到了显著水平(P<0.05);10 mg·L^(-1)和15 mg·L^(-1)壳寡糖处理信前胡的单株平均叶面积分别提高了27.3%和20.8%,均达到了显著水平(P<0.05);5、10、15 mg·L^(-1)壳寡糖处理信前胡的株高分别显著提高了17.4%、31.7%和19.6%。10 mg·L^(-1)壳寡糖处理信前胡叶片的脯氨酸含量较单纯干旱处理显著提高了11.8%,10 mg·L^(-1)壳寡糖处理信前胡叶片的H 2 O 2含量和MDA含量均较单纯干旱处理显著降低(降幅分别为46.9%和14.4%)。因此,10 mg·L^(-1)壳寡糖处理可显著缓解信前胡苗期的干旱胁迫(P<0.05)。

基于指纹图谱结合化学模式识别的前胡和紫花前胡分类模型的建立

目的基于前胡和紫花前胡指纹图谱结合化学模式识别技术,建立前胡和紫花前胡的分类识别模型。方法采用高效液相色谱法,以Venusil C_(18) Plus(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱;以乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱;检测波长334 nm;流速1.0 mL·min^(-1);柱温30℃;进样量10μL。采用聚类分析、主成分分析、样本判别分析等化学模式识别方法对数据进行分析。结果结合化学模式识别方法对同步建立的前胡和紫花前胡的HPLC指纹图谱数据分析表明,收集到的18批样本基本分为三类:前胡、紫花前胡以及其他。结论所建立的指纹图谱结合化学模式识别的方法可靠、简单易行,建立的分类识别模型可有效区分前胡和紫花前胡,并为两者各自的质量控制提供依据和参考。

氮磷钾肥配施对前胡产量和品质的动态影响

研究氮、磷、钾肥配施对前胡产量和指标成分积累规律的影响,为前胡高效施肥和提产提质提供理论依据。以白花前胡为材料,采用三因素三水平正交试验设计开展田间小区试验,研究氮(N用量分别为0、36.8、73.6 kg/hm~2)、磷(P_(2)O_(5)用量分别为0、24、48 kg/hm~2)、钾(K_(2)O用量分别为0、41.6、83.2 kg/hm~2)配施对前胡产量、白花前胡甲素、白花前胡乙素、浸出物、土壤有效养分含量及根部养分积累量的影响。结果表明:与不施肥相比,合理配施可提升根际土壤有效养分含量,增加根部氮、磷、钾积累量,促进产量增加,提高白花前胡甲素、白花前胡乙素、浸出物含量。配施后,前胡品质在12月下旬最佳。此时,前胡在T5处理(N 36.8 kg/hm~2,P_(2)O_(5)48 kg/hm~2,K_(2)O 0 kg/hm~2)下3种指标成分均符合《中华人民共和国药典》(2020年版)相关要求,且生物量达到32.54 g/株,与不施肥相比增加了49.95%。前胡的适宜配施方式为少施氮肥、适量增施磷肥,适宜收获时期为12月下旬,适宜氮磷配施用量为施氮量36.8 kg/hm~2,施磷量48 kg/hm~2。

白花前胡CAL基因的克隆和原核表达分析

目的:克隆得到白花前胡花发育关键基因CAULIFLOWER(CAL)并对其进行原核表达和基因表达分析。方法:根据白花前胡转录组数据中的基因序列信息,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从白花前胡中克隆CAL基因,命名为PpCAL1和PpCAL2。构建原核表达载体pET-32a-PpCAL1和pET-32a-PpCAL2,并转化至大肠埃希菌Transetta(DE3)进行诱导表达。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析抽薹开花前后白花前胡不同组织的基因相对表达量。结果:PpCAL1和PpCAL2的开放阅读框(ORF)长度分别为645、738 bp,分别编码214、245个氨基酸。结构功能域分析表明,PpCAL1和PpCAL2蛋白都具有MADS_MEF2_like和K-box保守结构域。原核表达结果显示,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷可成功诱导目的蛋白表达。系统进化树分析显示,白花前胡PpCAL1与胡萝卜DcCAL聚为一支,白花前胡PpCAL2与橡胶树HbCAL聚为一支。基因表达结果显示,PpCAL1和PpCAL2在不同组织中均在开花后表达量上调。结论:克隆并分析白花前胡PpCAL1和PpCAL2基因,为进一步研究白花前胡开花基因提供参考。

基于网络药理学对前胡“降气化痰”功效的解释

目的:基于网络药理学研究方法初步阐述前胡“降气化痰”功效的科学内涵。方法:通过检索中药系统药理学数据库(TCMSP)对前胡潜在的活性成分和靶点进行初步预测;检索相关疾病数据库获得“咳、痰、喘”等疾病的靶点;将上述二者通过STRING网站获得的蛋白互作网络图进行分析;利用Metascape在线平台进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:前胡与“咳、痰、喘”等相关疾病的相交靶点63个,富集分析得到了包含血液循环、对外源性化合物刺激的反应、对激素反应、对无机物的反应、细胞对氮化合物的反应等生物学进程20个,其中涉及了TP53、JUN、AKT1、MAPK14、FOS等靶点;KEGG通路富集筛选得到了包含cAMP信号通路、VEGF信号通路、Fox O信号通路以及癌症等18条关键信号通路。结论:前胡通过多靶点、多通路发挥“降气化痰”功效,从而为前胡的新药研发以及临床合理用药提供了参考,也为相关疾病的治疗提供生物信息学基础。

白花前胡植物不同部位显微鉴别研究

目的:研究白花前胡茎、叶(叶表面、叶柄)、根(主根和侧根)的显微组织构造,为白花前胡的鉴别提供参考依据。方法:应用奥林巴斯BX43生物显微镜进行观察,并描述显微特征。结果:茎的油室在皮层、韧皮部、髓部均可见,维管束28~38个,叶柄维管束9~15个。叶表面有橙皮苷结晶,气孔多为不定式或不等式。根韧皮部油室较多,主根木质部大导管与小导管相间排列,侧根木质部导管径向紧密排列。结论:该研究阐明了白花前胡不同部位的组织构造特征,可作为白花前胡的鉴定依据。

中药材前胡质量影响因素研究进展

前胡为中医临床组方中常用中药材,市场需求量大。目前,市场上的前胡主要为人工栽培品,而人工栽培前胡的品质差异较大,符合药典标准的比例小,因此,系统阐述前胡质量变化的影响因素对保证前胡药材产量及质量极为重要。通过对近二十年来前胡的种质、产地、栽培方式、采收加工等方面的研究成果进行综述,进一步探讨前胡科学种植方式,以期为控制前胡药材质量提供依据。

前胡总香豆素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨前胡总香豆素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:高糖诱导创建HUVECs损伤模型,将HUVECs随机分成正常对照组、高糖模型组、前胡总香豆素低剂量组(10μg/mL)、前胡总香豆素中剂量组(20μg/mL)、前胡总香豆素高剂量组(40μg/mL)。采用CCK-8法测HUVECs活性,倒置显微镜下观察HUVECs形态;采用试剂盒检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;采用Hoechst染色检测HUVECs凋亡情况;ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α和IL-1β水平;Western blotting测Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3蛋白相对表达量。结果:前胡总香豆素低、中、高剂量组细胞存活率明显高于高糖模型组(P<0.05或P<0.01);与高糖模型组比较,前胡总香豆素低、中、高剂量组HUVECs形态显著改善;前胡总香豆素低、中、高剂量组HUVECs的MDA、LDH含量及细胞凋亡率明显低于高糖模型组,GSH-Px、SOD和NO水平高于高糖模型组(P<0.05或P<0.01),TNF-α和IL-1β水平明显低于高糖模型组(P<0.05或P<0.01);前胡总香豆素低、中、高剂量组Bcl-2蛋白相对表达量高于高糖模型组,Bax、cleaved Caspase-3蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2显著低于高糖模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:前胡总香豆素能保护高糖诱导的HUVECs损伤,其机制可能为调节氧化应激,抑制Bax、cleaved Caspase-3表达,改善Bcl-2表达,降低Bax/Bcl-2水平。

白花前胡及前胡甲素对心肌缺血再灌注大鼠IL-6水平及Fas、bax、bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究中药白花前胡及其有效成分对缺血再灌注心肌IL-6水平及凋亡相关蛋白表达的影响。方法:开胸麻醉大鼠左冠状动脉前降枝经30 min缺血及120 min再灌注;放射免疫法测定血清IL-6水平;免疫组化法和计算机图像分析系统检测心肌Fas,bax及bcl-2蛋白表达;苏木精-依红染色法于光镜下观察嗜中性白细胞浸润。结果:白花前胡粗提物及前胡甲素(Pd-Ia)在降压和不影响心率的情况下,减少IL-6水平及Fas,bax,bcl-2蛋白的表达,增加bcl-2/bax的比率。IL-6水平与Fas,bax,bcl-2蛋白表达之间呈密切的线性正相关,而嗜中性白细胞只有轻微浸润。结论:白花前胡及Pd-Ia在防治缺血后心肌细胞死亡上显现新靶位,原因可能与心肌缺血再灌注期间机体自身调控即早基因IL-6,Fas,bax,bcl-2的表达有关。

白花前胡总香豆素解热镇痛抗炎作用的实验研究

目的 观察白花前胡总香豆素组分(TCP)的解热镇痛抗炎作用。方法 采用大鼠酵母致热法、小鼠扭体法和热板法、小鼠耳廓肿胀法和大鼠蛋清足跖肿胀法。结果 TCP对酵母引起的大鼠发热有显著解热作用;对热板所致的小鼠疼痛和醋酸所致的小鼠扭体反应均有显著抑制作用;并能对抗二甲苯所致的小鼠耳肿胀和蛋清所致的大鼠足肿胀。结论 TCP具有较好的解热镇痛抗炎作用。

白花前胡中总香豆素组分对小鼠肝药酶活性的影响

目的 :观察白花前胡中总香豆素组分 (TCP)对小鼠肝药酶活性的影响。方法 :将小鼠随机分组 ,以氯霉素(2 5mg·kg 1 ,ig)为阳性对照 ,观察TCP(5 0 ,10 0 ,2 0 0mg·kg 1 ,ig)分别对戊巴比妥钠 (3 6mg·kg 1 ,ip)和巴比妥钠 (180mg·kg 1 ,ip)催眠作用的影响 ;并用分光光度法测定肝微粒体苯胺羟化酶 (ANH)和氨基比林N 脱甲基酶 (ADM)活性。结果 :TCP呈剂量依赖性地延长戊巴比妥钠的催眠时间 ,但对巴比妥钠的催眠时间无明显影响 ;且TCP能显著降低ANH和ADM活性。结论 :TCP能抑制小鼠肝药酶活性。

前胡及其混伪品的DNA条形码鉴定研究

目的:利用DNA条形码技术准确、快速地鉴别中药材前胡及其混伪品。方法:提取前胡药材及其易混品的总DNA,对ITS2序列进行PCR扩增和双向测序,应用CodonCode Aligner V3.0对测序峰图进行校对拼接获得ITS2序列。利用MEGA 4.0软件计算物种种内种间的Kimura 2-parameter(K2P)遗传距离。采用最近距离法、相似性搜索法、构建NJ系统聚类树等方法进行鉴定并分析各物种ITS2序列的二级结构差异。结果:构建的系统聚类树显示前胡不同样本聚在一起,能很好的与其混伪品进行区分;ITS2二级结构显示前胡与其混伪品具有明显的差异。结论:ITS2条形码序列能够有效的区别中药材前胡与其混伪品,为快速、准确地鉴定前胡提供了科学依据和新方法。

白花前胡甲素对豚鼠单一心室肌细胞钙电流的频率依赖性阻断作用

本文利用全细胞膜片钳制技术，观察了白花前胡有效成分Ｐｒａ－Ａ对豚鼠单一心室肌细胞钙电流的影响．结果表明：１，１０，１００μｍｏｌ·Ｌ－１Ｐｒａ－Ａ可使钙电流峰值变小，随浓度增加，作用加强；１０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｐｒａ－Ａ对钙电流的抑制具使用依赖性和频率依赖性．结果提示Ｐｒａ－Ａ对钙电流的阻断作用可能是白花前胡抗心律失常作用的机理之一；Ｐｒａ－Ａ可能对快速型心律失常有防治作用．

白花前胡提取物对腹主动脉缩窄大鼠心室重构及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 :研究白花前胡提取物 (PdE)对腹主动脉缩窄术后大鼠心室重构及心肌组织凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax表达的影响。方法 :部分缩窄大鼠腹主动脉术制作心肌肥厚模型。称重法检测左室心肌重量 ,计算心系数 ;观察细胞组织结构改变 ,测量左心室内径 ;免疫组织化学法检测凋亡相关基因及Bcl 2、Bax蛋白表达。结果 :腹主动脉缩窄术后 ,大鼠左室重量及心系数明显增加 ;4 0 0 %PdE可明显减轻大鼠腹主动脉术所致左室重量增加 (用药组 0 .4 9±0 .0 7g ,模型组 0 .5 7± 0 .16g ,P <0 .0 5 )及心系数的升高 (用药组 2 .4 4% ,模型组 2 .82 % ,P <0 .0 5 ) ;2 0 0 %PdE亦可明显降低大鼠腹主动脉术后心系数的升高 (用药组 2 .5 1% ,模型组 2 .82 % ,P <0 .0 5 ) ;腹主动脉缩窄术后大鼠心肌细胞明显肥大 ,胞核呈浓染、增大 ,细胞间距增大 ,组织横断面心肌纤维增多 ;4 0 0 %PdE及 2 0 0 %PdE可有效改善因腹主动脉缩窄所致心肌组织结构变化 ;腹主动脉缩窄术后 ,大鼠左室腔内径明显缩小 ,而 4 0 0 %PdE及2 0 0 %PdE可显著改善大鼠腹主动脉术后左室腔内径缩小 (P <0 .0 5 ) ;模型组Bcl 2与Bax蛋白表达率与伪手术组、各浓度PdE组比较均有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,但伪手术组 ,4 0 0 %及 2 0 0 %PdE组Bcl 2