染料木黄酮、拟雌内酯及槲皮素对孕烷X受体介导的CYP3A4转录的调节作用

目的 研究植物雌激素中的染料木黄酮(GST)、拟雌内酯 (COM)及槲皮素 (QU)能否通过活化人孕烷X受体 (PXR)诱导CYP3A4的转录表达。方法用PXR依赖的瞬时转染报告基因试验检测 3种植物雌激素的诱导作用。结果 GST ,COM和QU均能通过活化PXR诱导HepG2 细胞CYP3A4基因的转录表达 ,最大诱导倍数 (相对于用浓度为 0 .1%的DMSO处理的细胞 )在本实验中分别为 11.97(P <0 .0 1) ,2 .98(P <0 .0 1)和 3.2 8(P <0 .0 1)。结论 GST ,COM和QU均能诱导CYP3A4的转录表达 ,其作用机制通过活化PXR。GST ,COM和QU的摄入可能影响其他CYP3A4底物尤其是药物在体内的代谢。

香豆雌酚对膝骨关节炎患者软骨细胞OPG/RANKL及MMP-1、MMP-3表达的影响

目的:研究香豆雌酚(coumestrol)对膝骨关节炎患者软骨细胞OPG/RANKL及MMP-1、MMP-3表达的影响,初步探讨其对骨关节炎的治疗机制。方法:分离、培养因膝骨关节炎行膝关节置换患者的膝关节软骨细胞,运用Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定。用不同浓度(10-9、10-8、10-7mol·L-1)香豆雌酚干预第3代细胞,并设0浓度为空白对照组,分别于培养后3、7 d用real-time PCR法测定细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)和基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)mRNA的表达。结果:干预3 d,10-8mol·L-1组OPG及RANKL mRNA表达均增加,其OPG/RANKL相对表达是空白对照组的2.59倍(P<0.05);干预7 d,10-9和10-8mol·L-1组OPG mRNA表达均增加,10-7mol·L-1组RANKL mRNA表达增加,10-8mol·L-1组OPG/RANKL相对表达是空白对照组的3.85倍(P<0.05)。干预3 d,10-8mol·L-1组MMP-1 mRNA表达减少(P<0.05);干预7 d,10-8mol·L-1组MMP-1和MMP-3 mRNA表达均减少(P<0.05)。结论:香豆雌酚能增加膝骨关节炎患者关节软骨细胞OPG表达及OPG/RANKL值,减少其MMP-1、MMP-3表达,具有一定的软骨保护作用。

香豆雌酚对去卵巢大鼠成骨细胞MT1-MMP和TIMP-1基因表达的影响

目的通过观察香豆雌酚（Coumestrol）对去卵巢骨质疏松模型大鼠成骨细胞膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）及其抑制因子TIMP-1（tissue inhibitors of matrix metalloproteinase-1）基因表达的作用,探讨香豆雌酚治疗绝经后骨质疏松的可能的分子机制。方法利用去卵巢大鼠骨质疏松（OVX）模型,观察香豆雌酚对骨密度和骨组织形态计量学参数的影响;行原位杂交检测OVX大鼠胫骨近端成骨细胞中MT1-MMP、TIMP-1mRNA表达,免疫组化检测骨组织MT1-MMP、TIMP-1蛋白表达。结果COU组大鼠（经coumestrol处理）第3~5腰椎骨密度（0.165±0.015）较OVX组（0.143±0.014）明显增加,骨小梁体积比（32.7±7.9）厚度（43.3±6.7）和数目（5.5±0.9）分别较OVX组（9.7±3.3）、（35.7±8.1）、（2.5±0.6）明显升高,COU组骨小梁间隔（165.4±27.1）较OVX组（591.1±113.8）明显减小;COU组成骨细胞MT1-MMP mRNA与蛋白质表达上调,而TIMP-1基因表达无差异。结论MT1-MMP低表达是发生绝经后骨质疏松的分子机制之一,香豆雌酚可使成骨细胞MT1-MMP基因表达上调,对TIMP-1表达无明显影响。

香豆雌酚对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,它的发病与体内激素水平有关。植物雌激素是从植物中获取的结构与雌激素相似,并具有雌激素效能的天然化合物[1],它可以与雌激素受体（estrogen receptor,ER）结合,不同种类和不同浓度的植物雌激素与ER结合显示出不同的作用效能。

香豆雌酚对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响

目的研究香豆雌酚对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响,探讨香豆雌酚对绝经后骨质疏松的防治作用。方法 36只6月龄雌性SD大鼠,随机分为去卵巢模型组,香豆雌酚组,17β-雌二醇组和假手术组,手术后14d,各组开始进行干预治疗。17β-雌二醇组按300μg/kg皮下注射,每周两次;香豆雌酚组按60 mg/kg皮下注射,1次/d;去卵巢模型组与假手术组每日皮下注射与17β-雌二醇组和香豆雌酚组同等体积的生理盐水。在干预治疗开始的第1～10周,每周测1次大鼠质量。第11周时测定尿钙、尿磷、尿肌酐和尿脱氧吡啶啉;计算大鼠子宫系数;测血钙、血磷、血碱性磷酸酶、血雌二醇浓度;测量大鼠右侧股骨密度。结果与去卵巢模型组相比,香豆雌酚组大鼠骨密度(g/cm2)明显升高(0.141±0.002和0.126±0.003,P<0.05),血碱性磷酸酶(1.26±0.15和2.42±0.70)、尿钙/尿肌酐(0.207±0.059和0.217±0.047)、尿脱氧吡啶啉/尿肌酐(6.056±1.715和0.572±3.140)(P均<0.05)下降,差异有显著性意义,血雌二醇(7.13±4.11和3.41±1.98)升高;与17β-雌二醇组相比,香豆雌酚组子宫系数(g/kg)明显降低(1.056±0.715和4.133±1.121,P<0.01),差异有显著性意义。结论香豆雌酚具有减少骨吸收,促进骨形成,增加骨密度的作用,而其对子宫组织的副作用弱于雌激素。

香豆雌酚对大鼠骨髓基质干细胞增殖和成骨分化的调控研究

目的观察香豆雌酚（coumestrol）对大鼠骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells BMSCs）增殖和成骨分化的影响，探讨香豆雌酚对骨髓基质干细胞的调节及其对骨骼系统的影响。方法用不同浓度（0，10^-10～10^-5mol·L^-1）香豆雌酚干预6—8周雌性SD大鼠的骨髓基质干细胞，并设17β-E2（17β雌二醇，10^-8mol·L^-1）为阳性对照，在干预不同时间分别用MTT法测细胞增殖率、Von kossa染色鉴定钙化结节形成、全自动生化仪测碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）活性、酶消化法测羟脯氨酸（Hydroxyproline，Hyp）含量、放免法测骨钙素（Osteocalcin，OC）含量。并用Western-Blot法测干预7天时骨保护素（Osteoprotegerin，OPG）蛋白的表达，用Reahime-PCR法测干预7天、14天时OPG、RANKL（receptor activator of nuclear factor-κB ligand，核因子κB受体活化因子配基）基因的表达。结果①细胞增殖：干预24、48、72h，10^-8、10^-7mol·L^-1香豆雌酚均能显著促进大鼠骨髓基质干细胞的增殖。而10^-5mol·L^-1香豆雌酚在干预24、72h抑制细胞增殖。②成骨分化：10^-8mol·L^-1香豆雌酚干预25天后开始出现钙化结节；10^-8、10^-7mol·L^-1香豆雌酚干预组ALP在14、21天时显著增加、Hyp在28天时显著增加，10^-8mol·L^-1香豆雌酚干预组OC表达在28天时显著增加，高浓度（10^-5mol·L^-1）则呈现抑制作用。③OPG／RANKL表达：干预7、14天，10^-7mol·L^-1香豆雌酚能增加骨髓基质干细胞OPGmRNA及其蛋白的表达，提高OPG／RANKL基因的相对表达。结论香豆雌酚能促进大鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化，并能通过影响OPG／RANKL的表达来发挥骨骼系统的保护作用。

香豆雌酚对新生大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的:观察香豆雌酚对大鼠成骨细胞(OBs)增殖分化的影响,初步探讨香豆雌酚对OBs的作用机制。方法:用不同浓度香豆雌酚干预OBs,根据不同时间分别用酶消化法测碱性磷酸酶活性和羟脯氨酸含量、放免法测骨钙素含量及半定量RT-PCR法检测OBs内OPG/RANKL基因的表达。结果:香豆雌酚呈浓度和时间依赖性促进大鼠OBs增殖及碱性磷酸酶表达;干预12 h,各浓度组羟脯氨酸含量呈浓度依赖性增高,其中10-8mo.lL-1作用最大(P=0.022);培养12 h,OBs表达骨钙素呈浓度依赖性,24 h达高峰,其中10-8mol.L-1有显著性差异(P=0.012),48 h有所下降;不同浓度、时间组香豆雌酚均能促使OBs增加表达OPG mRNA,同时有抑制RANKL mRNA表达的作用,其在24 h 10-8mol.L-1浓度作用强度最大(P=0.038),10-5mol.L-1则呈现抑制作用。结论:香豆雌酚能促进OBs的增殖分化,其作用呈浓度和时间依赖性,且至少部分有OPG/RANKL途径的参与。

香豆雌酚对成骨细胞分化过程中骨指标表达的影响(英文)

目的观察植物雌激素香豆雌酚对成骨细胞增殖分化的作用并探讨其作用机制。方法从小鼠颅盖骨获得成骨细胞并用0,10-9～10-5M香豆雌酚孵育48 h,以17β雌二醇为阳性对照,用酶消化法测定碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,放免法测定骨钙素含量,RT-PCR法测定OPG及RANKL mRNA表达情况,Western Blot测定OPG蛋白含量。结果干预48 h,不同浓度香豆雌酚呈剂量依赖性增加碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,10-6M时达到最大效应（P〈0.05）,但10-5M效应有所降低,香豆雌酚轻度增加成骨细胞骨钙素含量,各组间无统计学差异。香豆雌酚呈剂量依赖性增加OPG基因及蛋白的表达（P〈0.05）,轻度降低RANKL基因的表达。结论香豆雌酚能增加成骨细胞增殖及分化,可能其部分通过OPG/RANKL发挥作用。

大豆品种香豆雌酚含量的分析

香豆雌酚是大豆生长过程中自然产生的化学物质，被认为可以治疗和预防一些人类依赖激素的疾病。为分析大豆品种中香豆雌酚含量，笔者利用高效液相色谱技术对来自中国、美国和日本的46个大豆品种香豆雌酚的含量进行测定分析。结果表明，不同品种中香豆雌酚的含量存在着较大差异，平均含量为0．587μg／g，其变幅在0．123～1．290μg／g之间。香豆雌酚含量的品种差异，为高含量资源的筛选及品种的选育提供依据。

RP-HPLC法测定紫花苜蓿中考迈斯托醇的含量

目的建立紫花苜蓿中考迈斯托醇的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法,使用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-体积分数为0.04%磷酸溶液(体积比为60∶40),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为345 nm,柱温为25℃。结果考迈斯托醇质量浓度在0.75～22.50mg.L-1内呈良好的线性关系(r=0.999 6,n=5),平均回收率为98.45%,RSD为2.2%(n=6)。结论RP-HPLC法适用于紫花苜蓿中考迈斯托醇含量的测定。

氮杂香豆雌酚衍生物的合成及其抗肿瘤活性

以间苯二甲醚为原料,经碘代、偶联、胺解、分子内环化及脱甲醚环化共5步反应,合成9个氮杂香豆雌酚衍生物(6a^6i),其结构经~1H NMR,13C NMR和APCI-MS表征。采用MTT法研究了6对Hela、SKOV3、BEL-7404、Hep G2及A-549等癌细胞的体外生长抑制活性。结果表明:6h对SKOV3细胞的生长抑制活性最高,其IC50值为81.58μmol·L-1。

响应曲面法优化紫花苜蓿中香豆雌酚的提取工艺

采用响应曲面法对紫花苜蓿中香豆雌酚的提取工艺进行优化。在单因素试验基础上,建立影响香豆雌酚粗提取物得率的3个主要因素即液料比、提取温度和提取时间与提取率之间的数学模型。利用SASV8.0软件分析表明:在液料比27.28:1(mL/g)、提取温度67.7℃和提取时间13.77h时,香豆雌酚粗提取物得率较高,最佳提取率为2.64‰,与预测值基本相符。

基于转录组学和代谢组学分析粗毛纤孔菌L-1中香豆雌酚和补骨脂素的合成途径及潜在调控因子

香豆雌酚和补骨脂素作为香豆素的重要衍生物,主要存在于植物中,在抗癌和抗炎方面发挥着重要作用,但在真菌中却少有报道。我们成功分离并培养了一株含有大量多糖和黄酮类化合物的粗毛纤孔菌L-1 Inonotus hispidus L-1。通过代谢组学分析,我们发现在粗毛纤孔菌L-1子实体中香豆雌酚和补骨脂素作为主要成分,其含量明显高于菌丝体和原基。基于转录组学和代谢组学联合分析,阐明了香豆雌酚和补骨脂素在粗毛纤孔菌L-1中的合成途径及其调控基因。研究发现粗毛纤孔菌L-1中香豆雌酚和补骨脂素在合成过程中有一个共同的前体L-苯丙氨酸,而L-苯丙氨酸的合成受糖酵解/葡萄糖生成途径和苯丙氨酸途径的共同调控,其含量在原基和子实体中显著升高。而且以L-苯丙氨酸为前体的P-香豆酸合成途径的两条下游合成途径中的代谢物显著升高,分别为异黄酮类生物合成途径中的2,7,4’-三羟基异黄酮和香豆雌酚,以及香豆素类生物合成途径中的7-羟基香豆素和补骨脂素。而香豆雌酚和补骨脂素的下游代谢物未检测到。通过转录组学进一步证实香豆雌酚和补骨脂素在合成过程中受到APL、APL1和ECM4这3个基因的调控。这项研究结果证实了粗毛纤孔菌L-1作为一种有价值的香豆雌酚和补骨脂素来源在营养保健品开发和应用方面的潜力。

基于UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS技术的酸枣仁化学成分分析及其抗阿尔茨海默病机制的网络药理学研究

目的通过超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-Focus-MS/MS)分析酸枣仁中的化学成分,依据解析的化学成分及中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、本草组鉴数据库(HERB)获取的酸枣仁主要成分结合网络药理学和分子对接技术初步预测其抗阿尔茨海默病(AD)的药效物质基础,筛选出潜在功效成分,预测作用机制。方法采用UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS对酸枣仁进行化学成分分析,分别在正、负离子模式下扫描,结合对照品、文献中的碎片离子信息、保留时间进行匹配,确认化学成分。利用TCMSP、HERB数据库获取酸枣仁的主要成分及其对应作用靶点信息;通过Gene Cards、OMIM数据库获得AD相关疾病靶点;将酸枣仁主要成分对应靶点与AD靶点取交集,借助String 11.5平台和Cytoscape 3.7.2软件绘制交集基因蛋白质相互作用(PPI)网络;利用DAVID 6.8对核心靶点进行基因本体(GO)功能与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,通过微生信云平台对富集结果可视化;借助Auto Dock Tools软件对核心成分及关键靶点基因进行分子对接。结果酸枣仁定性分析中共鉴定出40个化合物,主要包括3个有机酸类、28个黄酮类、8个生物碱类、1个皂苷类;筛选出发挥改善AD作用的核心成分5个,包括拟雌内酯、油酸、山柰酚、乌药碱、酸李碱;酸枣仁改善AD的核心靶点有JUN、AKT1、STAT3、MAPK14、ESR1、IL16等;KEGG通路分析共得到157条通路,其中PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、HIF-1信号通路排名靠前;GO富集分析得到生物过程(BP)条目336个、细胞组分(CC)条目45个、分子功能(MF)42个。分子对接结果显示,酸枣仁的4个核心成分与关键靶点间存在分子结合位点且结合能较强,均小于-20.93 kJ·mol^(-1)。结论通过UPLC-Q-Exactive-Focus-MS/MS解析的化学成分结合网络药理学、分子对接预测了酸枣仁是通过多成分、多靶点、多途径来发挥抗AD作用的。

几种植物雌激素对细胞间隙连接通讯的影响

目的了解植物雌激素对细胞的细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响.方法用荧光漂白后恢复技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察典型的植物雌激素(槲皮素、染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)对正常人皮肤角质形成细胞株(HaCaT细胞)GJIC的影响.结果不同种类的植物雌激素在不同浓度下对GJIC的影响不完全相同.槲皮素在0.1～10.0 μmol/L浓度下对HaCaT细胞的GJIC功能无明显影响.染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂在0.1～10.0 μmol/L浓度下,能不同程度地抑制GJIC功能,荧光恢复率为31.77%～37.06%,显著低于溶剂对照组(44.74%).结论除黄酮类槲皮素外,常见的植物雌激素(染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)在人体可能达到的血清浓度下,对HaCaT细胞的GJIC功能都有不同程度的抑制,提示在一定条件下可能有促癌作用.因此,将其用作药品或保健食品时应该慎重.

基于斑马鱼模型和分子对接技术的心可舒片促血管生成活性成分研究

目的基于斑马鱼模型和分子对接技术研究心可舒片的促血管生成活性成分。方法以人脐静脉内皮细胞HUVECs为模型,采用CCK-8与EdU-488细胞增殖检测试剂盒检测细胞活性与增殖能力,采用划痕实验与Transwell实验评价细胞迁移能力,采用成管实验检测各组细胞成管腔能力,评价心可舒片对HUVECs的促血管生成活性。以斑马鱼为模型,采用血管内皮细胞生长因子受体抑制剂PTK787建立斑马鱼节间血管损伤模型,根据各组节间血管长度,评价心可舒片对斑马鱼的促血管生成活性。心可舒片29个成分与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管内皮生长因子受体1(vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR1)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和VEGFR2的7个晶体结构进行分子对接,通过打分值与对接能筛选潜在活性成分,采用斑马鱼模型评价潜在活性成分的促血管生成活性。结果心可舒片可显著提高细胞增殖能力(P<0.001),提高细胞迁移能力及成管能力(P<0.05、0.001),恢复PTK787造成的斑马鱼节间血管损伤(P<0.01、0.001);通过分子对接共得到12个心可舒片潜在活性成分,斑马鱼验证结果表明丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸D、葛根素、3′-甲氧基葛根素、3′-羟基葛根素、大豆苷、紫草酸、迷迭香酸和考迈斯托醇可显著恢复PTK787诱导的斑马鱼节间血管损伤(P<0.05、0.01、0.001)。结论采用分子对接技术与斑马鱼模型从心可舒片中筛选得到10个具有促血管生成作用的活性成分。

异戊烯基香豆素类化合物抑制A549细胞增殖作用及其构效关系

目的探讨异戊烯基香豆素类化合物对A549肺癌细胞增殖的影响,并对其构效关系及作用机制进行初步探讨。方法将人肺癌细胞A549进行体外培养,采用不同浓度异戊烯基香豆素类化合物甘草香豆素(GCM)、甘草酚(GC)、补骨脂定(PSO)、香豆雌酚(COM)、7-去甲基软木花椒素(DE)、7,2',4'-trihydroxy-5-methxy-3-penylcoumarin(TMP)和蛇床子素(OST)分别处理肺癌A549细胞36、72 h后,通过结晶紫染色法检测细胞增殖活性;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中TOPK、C-PARP、Bcl-2、Bax、p62、LC3B蛋白表达水平。结果受试化合物对A549细胞增殖的抑制作用存在浓度和时间相关性;10μmol/L的GCM、GC、PSO、COM、DE、TMP组Bcl-2表达均下降(P<0.05);A549细胞经10μmol/L GCM、GC、PSO处理后,TOPK的表达显著降低,C-PARP、LC3Ⅱ、p62的表达显著升高(P<0.05)。结论异戊烯基香豆素类化合物GCM、GC、PSO可显著抑制A549细胞的增殖活性,且其抗增殖活性可能与香豆素母核苯环上的异戊烯基结构取代和母核C-3位上苯环的取代及其环上游离的羟基有关;其抗A549细胞增殖的作用机制可能与促进细胞凋亡,诱导细胞发生不完全自噬并抑制自噬流有关。