尖孢镰刀菌cox1基因的克隆与生物信息学分析

尖孢镰刀菌可引起豆科、葫芦科、茄科等100多种植物发生根腐病、茎腐病、茎基腐病等病变,本试验对尖孢镰刀菌cox1基因进行克隆,并对其编码的蛋白质进行生物信息学分析,为进行感染尖孢镰刀菌的鉴定提供理论基础。结果表明,尖孢镰刀菌cox1基因大小为1590 bp,编码530个氨基酸序列,理论等电点为8.46,具有疏水性,存在12个跨膜区域,不存在信号肽,二级结构中α-螺旋含量占比较高,为55.66%,三级结构预测结果与二级结构预测占比一致,进化上与轮枝镰刀菌位于一个分支,同源性较高。该结果为植物真菌病害的鉴定与防治提供了新线索。

尖孢镰刀菌cox1基因的生物信息学鉴定及克隆

尖孢镰刀菌可引起豆科、葫芦科、茄科等100多种植物发生根腐病、茎腐病、茎基腐病等病变,试验对尖孢镰刀菌cox1基因进行克隆,并对其编码的蛋白质进行生物信息学分析,为进行感染尖孢镰刀菌的鉴定提供理论基础。结果表明,尖孢镰刀菌cox1基因大小为1593bp,编码530个氨基酸序列,理论等电点为8.46,具有疏水性,存在12个跨膜区域,不存在信号肽,二级结构中α-螺旋含量占比较高为55.66%,三级结构预测结果与二级结构预测占比一致,进化上与轮枝镰刀菌位于一个分支,同源性较高,该结果为植物真菌病害的鉴定与防治提供了新线索。

基于核糖体DNA ITS区和COX1基因鉴别华支睾吸虫囊蚴

目的基于核糖体DNA ITS区和COX1基因,PCR鉴别鱼体内华支睾吸虫囊蚴。方法于2013年5月底采集广西横县某水库的麦穗鱼,用消化法从鱼肉组织中分离单个华支睾吸虫囊蚴及其他吸虫囊蚴;PCR检测华支睾吸虫核糖体DNA ITS区和COX1基因,并分析检测的灵敏性和特异性。结果分离到不同发育阶段的华支睾吸虫囊蚴并经PCR检测证实。用针对核糖体DNA ITS区和COX1基因的PCR均能检测到单个华支睾吸虫囊蚴DNA,其特异性扩增条带大小分别为437/549、156/249和195/166 bp。用核糖体DNA ITS1和ITS2区的通用引物和特异性引物扩增华支睾吸虫囊蚴DNA的阳性数之比分别为0.905和0.952。针对COX1基因的特异性扩增均检测到目标DNA,并且扩增条带较亮。用该方法对其他吸虫囊蚴检测的对比试验显示特异性引物均未出现任何非特异性扩增反应;用ITS区通用引物检测其他吸虫囊蚴则显示出严重的非特异性扩增反应。结论通过形态观察结合PCR法识别出了不同发育阶段的华支睾吸虫囊蚴。用华支睾吸虫核糖体DNA ITS区的特异性引物进行PCR检测的灵敏性和特异性均优于相应通用引物。针对COX1基因的特异性PCR检测的灵敏性和特异性与核糖体DNA ITS区的检测结果相当。

弓首蛔虫线粒体cox1基因的多态性研究

应用PCR SSCP技术和DNA 序列分析对犬弓首蛔虫(Toxocara canis)线粒体DNA(mtDNA)中的细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)进行了分析研究,并与弓首属的猫弓首蛔虫、马来西亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫及弓蛔属的狮弓蛔虫进行了种间比较。结果显示,犬弓首蛔虫种群内的pcox1 序列差异为2.72%,与马来西亚弓首蛔虫种群间的序列差异为11.38%,与猫弓首蛔虫种群间的序列差异为11. 20%,与牛弓首蛔虫种群间的序列差异为10.40%,与狮弓蛔虫种群间的序列差异为11.48%;马来西亚弓首蛔虫种群内的pcox1 序列差异为0.57%,与猫弓首蛔虫的序列差异为8.23%,与牛弓首蛔虫的序列差异为8.70%,与狮弓蛔虫的序列差异为10.60%。研究证实,犬弓首蛔虫不同地方虫株的pcox1 有一定差异,与同属其他种类及狮弓蛔虫的差异较大;马来西亚弓首蛔虫确为一独立种。

鸡蛔虫线粒体cox1基因的克隆及序列分析

本研究旨在阐明鸡蛔虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅰ亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用pcox1序列构建其与其他蛔虫的进化关系。应用聚合酶链反应(PCR)扩增鸡蛔虫虫株的pcox1,将测定获得序列应用Clustal X 1.81程序进行比对,然后用Phylip 3.67程序MP法和Mega 4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle 5.2程序构建最大似然树。所获得的pcox1序列长度一致,均为250bp,种内变异在0～2.5%之间。种系发育分析表明,8个鸡蛔虫分离株位于同一分枝。由于鸡蛔虫pcox1序列种内相对保守,种间差异较大(6.9%～15.3%),故可作为种间遗传变异研究的标记,研究结果为进一步研究鸡蛔虫的群体遗传结构奠定了基础。

基于线粒体cox1基因序列的弹涂鱼类系统进化关系

于我国雷州半岛红树林海区捕获隶属于弹涂鱼属(Periophthalmus)、大弹涂鱼属(Boleophthalmus)与青弹涂鱼属(Scartelaos)的4种弹涂鱼,克隆4种弹涂鱼23个个体cox1基因序列,通过分析4种弹涂鱼与Gen Bank中12种弹涂鱼cox1基因序列的变异特征,探讨4种弹涂鱼与后者的种间亲缘关系。结果表明,16种弹涂鱼的82个体的cox1基因序列共检测到单倍型44个,核苷酸多态位点212个(占35.4%),种间平均核苷酸差异数为4(占2.01%);基于最大似然法(ML)和邻接法(NJ)构建的系统发育树显示,各弹涂鱼属多形成一独立分支,亲缘关系明显,齿弹涂鱼属(Periophthalmodon)镶嵌于弹涂鱼属内,大弹涂鱼属与青弹涂鱼属形成并列分支,亲缘关系较近。依化石记录标定的松散分子钟估算物种分歧时间,结果表明,各弹涂鱼属出现明显分化大约发生于渐新世末期至中新世早期(23.61~15.65 Ma)。

基于cox1基因对中国青藏高原地区细粒棘球绦虫遗传多态性的研究

通过对中国青藏高原地区细粒棘球绦虫的遗传多态性分析,了解该地区细粒棘球绦虫的遗传变异情况,为细粒棘球蚴病的防治提供基础材料。基于线粒体cox1基因全序列(1 609bp)分析中国青藏高原地区47个细粒棘球绦虫分离株的序列变异情况,并结合NCBI数据库中已公布的中国青藏高原和中东地区所有细粒棘球绦虫cox1基因全长序列,对比分析两个种群的遗传多态性特征。结果显示,47个样品均被确定为G1基因型,分为10个单倍型(C1~C10),其中优势单倍型C1与中东优势单倍型相同,且该单倍型呈世界性分布。中国青藏高原地区细粒棘球绦虫的单倍型多样性(Hd)与核苷酸多样性(π)较低,明显低于中东种群,两个地区Tajima’s D和Fu’s Fs检验值均为负值,遗传结构差异不显著。研究结果表明:中国青藏高原细粒棘球绦虫可能是由一个起源于中东的有效种群进入该地区后,经历了近期群体扩张或遗传瓶颈,在高原地区天然的地理隔离作用下,逐渐发展成了现在的种群。

中华双腔吸虫线粒体cox1基因的克隆及序列分析

以从中国甘肃玛曲牦牛胆管中采集的3条中华双腔吸虫作为研究对象,用引物JB3及JB4.5扩增中华双腔吸虫的线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅰ亚基(cox1)基因部分序列(pcox1),并用pcox1序列构建其与其它吸虫的进化关系。将测定获得序列应用Clustal X 1.81程序进行比对,然后用Phylip 3.67程序MP法,并用Puzzle 5.2程序构建最大似然树。所获得的3个中华双腔吸虫样品pcox1序列长度一致,均为355bp。种系发育分析表明,3个中华双腔吸虫样品位于同一分枝。本研究系首次报道中华双腔吸虫的线粒体cox1序列,从而为进一步研究中华双腔吸虫进一步的分类、鉴定和遗传变异研究奠定了基础。

基于cox1基因序列分析山羊褐黄血蜱种系发育关系

为分析山羊褐黄血蜱分离株的线粒体(mt DNA)部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并利用cox1序列分析山羊褐黄血蜱与其它蜱的种群遗传关系,本研究利用PCR扩增山羊褐黄血蜱的部分cox1片段,并对其进行测序分析。结果显示16株山羊褐黄血蜱分离株的cox1序列长度均为800 bp左右,且分离株与基因库中褐黄血蜱位于同一分支,与其它蜱类得到了很好的鉴别。本研究表明pcox1序列种内相对保守,种间差异较大,可作为山羊褐黄血蜱的种间遗传变异研究的分子遗传标记。

蛇四棘食道口线虫线粒体cox1基因的克隆及序列分析

本研究旨在分析长沙市四棘食道口线虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅰ亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况。应用聚合酶链反应(PCR)扩增四棘食道口线虫虫株的pcox1,应用Clustal X 1.83程序对序列进行比对,同时利用DNAStar 5.0中的MegAlign程序进行同源性分析,并与GenBankTM中已知四棘食道口线虫相应基因序列进行比较分析。所得pcox1序列长度一致,均为393 bp,与GenBank公布的线虫相关序列进行比较分析结果表明,各个分离株与已知四棘食道口线虫相应基因的相似性分别在98%以上,与其它科线虫的相似性均小于91%。四棘食道口线虫pcox1序列种内相对保守,种间差异明显。本研究为进一步研究四棘食道口线虫的群体遗传学奠定了基础。

用cox1基因片段的PCR鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

目的:用cox1基因片段的PCR技术对亚洲带绦虫和牛带绦虫的快速鉴别。方法:用亚洲带绦虫和牛带绦虫线粒体cox1基因片段的特异性引物以及带绦虫cox1基因片段的通用引物,对贵州省都匀地区和从江地区的带绦虫虫卵和节片DNA进行常规PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测和核酸序列测定,并用NC-BI Blast对扩增产物的核酸序列与NCBI数据库中带绦虫的cox1基因进行比对。结果:5株都匀带绦虫DNA样品经亚洲带绦虫cox1基因片段的特异性引物PCR,均扩增出约260 bp的产物,PCR产物的核酸序列与NCBI数据库中亚洲带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为100%;2株从江带绦虫的DNA样品用亚洲带绦虫特异性引物和牛带绦虫特异性引物的PCR均未见扩增产物,而通用引物PCR则扩增出约1 000 bp的产物,核酸序列与NCBI数据库中牛带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为99%,在牛带绦虫特异性引物的结合位点存在一个碱基差异。结论:常规PCR扩增特异性的cox1基因片段可快速鉴定亚洲带绦虫;从江牛带绦虫株的cox1基因特异性片段部分存在变异,导致与特异性引物结合能力的差异,可采用cox1基因通用引物PCR结合测序进行鉴定。

新疆石河子地区鸡皮刺螨形态学鉴定及其cox1基因比对分析

为了确定新疆石河子地区流行的鸡螨虫的种类,采集本地区蛋鸡和斗鸡流行的螨样进行形态学观察鉴定,同时克隆并分析其线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基1(cox1)基因,并与Gen Bank登录的鸡皮刺螨参考序列对比分析同源性并构建系统进化树。初步形态学鉴定结果显示:该虫体呈长椭圆形,后部略宽,螯枝细而长;背面有1块背板,前部较宽,后缘平直;胸板拱桥形,宽大于长,板上刚毛2对;肛板圆三角形,肛孔位于肛板后部;雄螨的胸殖板和腹肛板相接形成全腹板,具有鸡皮刺螨的形态特征。分子生物学鉴定发现,本研究螨虫株cox1基因与法国和意大利鸡源鸡皮刺螨cox1基因序列同源性达99%,证实石河子地区流行的鸡螨虫为鸡皮刺螨,该螨虫与法国和意大利鸡源鸡皮刺螨具有较近的亲缘关系。

黄鳝胃瘤线虫线粒体cox1基因的多态性研究

为了解渝西地区黄鳝胃瘤线虫分离株线粒体细胞色素C氧化酶第I亚基（cox1）的遗传变异情况及与其他科线虫的种群遗传关系,本研究对该地区黄鳝胃瘤线虫cox1部分序列进行了克隆测序和进化分析.结果表明渝西地区6株胃瘤线虫分离株的cox1序列长度一致,均为441bp;各分离株之间的相似性为97.5%~100%.种系发育树表明,6个胃瘤线虫分离株均位于同一分枝.由于胃瘤线虫cox1序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的标记.本研究结果为胃瘤线虫的分类鉴定以及进一步的分子流行病学调查和群体遗传研究奠定了基础.

长沙市黑斑蛙蛔虫pcox1基因的扩增及序列分析

为研究长沙市黑斑蛙蛔虫分离株的线粒体DNA pcox1序列的遗传变异情况,并分析黑斑蛙蛔虫cox1部分序列与其它蛔虫的种群遗传关系。利用PCR扩增黑斑蛙蛔虫mtDNA的pcox1片段,将PCR扩增出的片段纯化后测序,并对其序列进行分析。结果显示所获得的4株cox1序列长度存在一定差异,为400～410 bp。由于黑斑蛙蛔虫cox1序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的分子标记。本研究报道的黑斑蛙蛔虫cox1序列,为黑斑蛙蛔虫的分类鉴定以及进一步的分子流行病学调查和群体遗传研究奠定了基础。

二化螟线粒体cox1基因的克隆、序列测定和分子系统学分析

[目的]克隆并分析二化螟线粒体细胞色素c氧化酶亚基I基因(cox1)。[方法]利用PCR方法扩增了二化螟线粒体cox1基因,并测定了其全序列。通过检索GenBank数据库获得了其他21种鳞翅目昆虫的cox1序列,并进行了同源性比较和分子系统学分析。[结果]cox1基因编码框包含1531个核苷酸,编码510个氨基酸的蛋白;起始密码子为CGA,终止密码子仅由一个T组成。利用ML方法构建了基于cox1基因编码氨基酸序列的鳞翅目昆虫的分子系统树,发现分子系统树与从形态学角度的系统分类在大方面上是基本一致的,但也略有差异。[结论]为进一步研究cox1基因的表达和应用奠定了基础。

黄鳝大型多钩槽绦虫cox1基因的多态性研究

为阐明黄鳝大型多钩槽绦虫渝西地区分离株线粒体基因细胞色素c氧化酶第I亚基（cox1）的遗传变异情况,本试验对黄鳝大型多钩槽绦虫cox1序列进行PCR扩增、克隆、测序及序列分析,并与GenBank中已知绦虫相应基因序列进行比较分析.结果显示渝西地区6个样品cox1碱基序列长度一致,均为444bp.同源分析发现渝西地区不同分离株间的同源性较高,为97.3%～100%,而6个大型多钩槽绦虫分离株与GenBank中收录的其他绦虫相比,同源性较低,为10.1%～12.1%.由于大型多钩槽绦虫cox1序列种内相对保守,种间差异较大,故可以作为种间遗传变异研究的标记.

基于cox1基因的贻贝科遗传差异及系统发育关系

基于线粒体DNA的细胞色素C氧化酶亚基1基因(cox1),分析贻贝科8个属中13个物种的种间、种内遗传差异及系统发育关系,结果表明,属间遗传距离为0.245~0.630,平均为0.487;同物种的母系和父系cox1遗传距离为0.21~0.24;新西兰绿唇贻贝与资料中的绿唇贻贝和Perna perna聚为1支,支持率为100%,后与翡翠贻贝聚为1支;13个物种中,除Trichomya hirsuta与贻贝属种类聚为1支外,其余各属均聚为单系支,贻贻属Mytilus、股贻贝属Perna、肌蛤属Musculista 3个属遗传关系近。

酒泉市狐狸消化道蛔虫分子鉴定及cox1基因序列分析

为了确定从酒泉市某养殖场北极狐(Alopex lagopus)肠道分离蛔虫的种类,本次研究通过形态学和分子生物学方法对分离的虫株进行鉴定。在对6条分离于北极狐小肠蛔虫进行形态学鉴定的基础上,应用PCR技术对分离株的线粒体cox1基因部分序列进行扩增、测序与分析。形态学鉴定结果表明6条蛔虫与弓首蛔虫形态学特征基本一致;测序结果显示,6个虫株cox1基因序列大小为418 bp,其序列同源性为99.4%—100.0%,与GenBank收录的狮弓蛔虫分离株同源性最高,为99.4%—99.7%;NJ系统进化分析结果显示6个分离株与狮弓蛔虫属于同一分支,其亲缘性较其他蛔虫种属相对最近。结合形态学与分子生物学技术将从狐狸肠道分离的蛔虫虫株均为狮弓蛔虫,其研究结果为狐狸蛔虫病的防控提供指导。

人结膜吸吮线虫病2例报告及Cox1基因分析

目的检测辽宁和山东两地人体结膜吸吮线虫(Thelaziacallipaeda)分离株的形态学及基因型,探讨两地分离株虫体基因差异及其系统发生亲缘关系。方法采集2例病人感染的虫体进行形态学鉴定,对其线粒体Cox1基因进行PCR扩增测序,将测序结果与基因库中文献比对分析,结合GenBank上已发表的同源序列,对不同地域来源的11个个体进行系统发育分析。结果与结论经Cox1基因鉴定,2例病人均可确诊为人结膜吸吮线虫病且其感染的虫体均与欧洲种同源(99.1%及99.6%)。两条虫体扩增的Cox1基因碱基存在差异(8/689),但不同地理虫株之间未见明显遗传变异现象(98%～100%)。

猬迭宫绦虫广东分离株线粒体pcox1基因的克隆及序列分析

为阐明猬迭宫绦虫广东分离株的遗传变异情况,本研究利用PCR技术扩增了猬迭宫绦虫的部分细胞色素C氧化酶第Ⅰ亚基(pcox1)基因,经SSCP筛选出带型差异的代表样品进行测序,经系统发育树表明,广东分离株与已知猬迭宫绦虫位于同一分枝。同时研究表明猬迭宫绦虫pcox1序列种内相对保守,又存在一定种间差异,可作为种间遗传变异研究的标记,研究结果为进一步研究猬迭宫绦虫的群体遗传结构奠定了基础。