北京市CoxA24病毒分子生物学特点的初步研究

目的：了解北京地区引起急性出血性结膜炎的CoxA24病毒的分子生物学特点。方法：收集北京市2007年7月至2007年9月疑似急性出血性结膜炎病例,采集患者眼拭子标本,接种于HeLa细胞,观察细胞是否出现病变。采用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）对阳性标本进行RNA检测,对RT-PCR结果阳性的标本PCR产物进行克隆测序。结果：检测88例患者眼拭子标本,获得5例阳性样本。将4例阳性的PCR产物进行克隆测序,将获得的4株CoxA24毒株与参考毒株进行核苷酸序列对比分析,结果显示该4株毒株组内核苷酸同源性为98.2%-99.5%,与新加坡提交的毒株同源性为96%-98.2%,与中国杭州和宁波2002年分离的CoxA24毒株其核苷酸同源性为94%-95.7%。系统进化树分析结果表明该4株毒株位于独立的一个分支上。结论：北京地区存在新的CoxA24变异毒株。

手足口病患儿EV71、CoxA16及EBV和CMV的检测与临床意义

手足口病（handfootandmouthdisease，HFMD）是一种全球性的急性传染病，病原体以肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus，CoxA16）为主。轻者预后良好，重症多合并神经系统疾病。

EV71和COXa16感染手足口病患儿血清IL-6及IL-37水平检测的临床意义

目的检测EV71和COXa16感染手足口病(HFMD)患儿血清白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-37(IL-37)水平并分析其意义。方法选取2012年1月1日~2017年12月31日我院儿科收治175例HFMD患儿作为研究对象,其中确诊的单纯EV71感染患儿100例,单纯CoxA16感染患儿65例,EV71和CoxA16合并感染患儿10例,另选取同期50例健康体检儿童作为对照组,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清IL-6和IL-37水平并分析其关系。结果EV71组、CoxA16组及EV71合并CoxA16组的IL-6、IL-37水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);EV71组的IL-6、IL-37水平均显著高于CoxA16组、EV71合并CoxA16组,差异有统计学意义(P<0.05)。EV71组重症患儿的IL-6、IL-37水平均显著高于轻症患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。EV71组IL-6与IL-37水平成正相关(P<0.05);EV71组IL-6与外周血单核细胞绝对值成正相关(P<0.05);EV71组IL-37水平与外周血中性粒细胞绝对值成正相关(P<0.05)。结论IL-6和IL-37参与了EV71和COXa16感染所致HFMD发病的病理生理过程,并与疾病的严重程度有关。

CoxA16感染不同病情手足口病患者NK细胞表达变化及临床意义

目的：分析探讨NK细胞在Cox A16感染的不同病情手足口病（hand-foot-mouth disease,HFMD）患者中的表达差异及临床意义。方法：收集2015年4-8月本院感染科确诊的Cox A16感染HFMD病例外周血标本54例,按临床表现分为普通型组（16例）、重型组（18例）和危重型组（20例）;同时,收集EV71感染重型HFMD病例18例作为对照组。患者年龄均为15~24个月。采用流式细胞术对上述外周血标本中NK细胞进行检测。结果：与正常健康儿童NK细胞参考值比较,普通型患者中NK细胞在淋巴细胞亚群中的相对百分比明显增高,而在重症病例中,重型患者NK细胞相对百分比降低,危重型病例NK细胞却显著升高。普通型组与重症组（包括重型组及危重型组）及重型组与危重型组组间NK细胞百分比比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。此外,EV71感染重症病例中NK细胞百分比高于正常值,与Cox A16感染重症病例的NK细胞低于正常值相反,两组间NK细胞表达差异比较有统计学意义（P〈0.05）。结论：Cox A16感染HFMD患者外周血中NK细胞的表达与其病情进展程度具有很大的相关性;而且在重症HFMD病患者中NK细胞的表达高低还与患者感染的不同病毒类型有关。推测NK细胞在不同病情HFMD中的活化效应不仅受到感染病毒致病性高低的影响,而且在病情危重时,在很大程度上主要受到危重型临床症状的影响。

VP4基因鉴定非EV71非CoxA16手足口病病原体漏检的研究

目的探讨肠道病毒VP4基因通用引物PCR诊断非肠道病毒71型(EV71)非柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)手足口病(HFMD)病毒方案的准确性。方法通过肠道病毒VP4基因通用引物PCR鉴定阜阳地区非EV71非CoxA16HFMD病毒时,显示两例病毒分离株为Sabin-1(命名为Fy-01和Fy-02株)。分别采用引物EVP4/Q8和VP1特异性引物对Fy-01和Fy-02分离株进行鉴定。结果采用VP4基因PCR扩增产物测序证实,两例病毒分离株为Sabin-1,而采用EVP4/Q8引物PCR扩增Fy-01分离株却存在异常的扩增条带,PCR扩增产物测序结果为柯萨奇病毒A组10型(CoxA10);将VP4基因PCR产物制备成克隆载体挑选多个单克隆测序结果显示,Fy-01分离株既存在Sabin-1 VP4基因,又存在CoxA10 VP4基因,证实为两种毒株混合感染。结论临床诊断为非EV71非CoxA16 HFMD的病例,如病原学诊断仅采用VP4基因PCR产物测序,特别是针对多种肠道病毒混合感染引起的HFMD,其结果并不完全可靠。

四季抗病毒合剂联用利巴韦林对CoxA16病毒增殖和感染作用的影响

目的探讨四季抗病毒合剂（Sijikangbingdu mixture，SJM）、利巴韦林注射液（Ribavirin injection，RBV）和SJM＋RBV对A16型柯萨奇病毒（CoxAl6）增殖和感染作用的影响。方法分别使用75TCID5、50TCID50CoxAl6感染Vero细胞模型和5日龄BALB／c乳鼠腹腔内注射1×10^6TCID50CoxAl6建立感染动物模型，采用SJM、RBV和SJM＋RBV给药后，检测CoxAl6感染Veto细胞损伤程度等指标，计算各用药方式对病毒感染乳鼠的死亡率、生存时间、体质量、临床症状评分等参数。结果SJM、RBV和SJM＋RBV对CoxAl6细胞的增殖具有剂量依赖性显著抑制作用，即随其剂量增大抑制作用显著增强（P〈0．01）。SJM、RBV和SJM＋RBV对CoxAl6病毒均具有显著抑制作用（P〈0．01），但SJM＋RBV组的抑制作用最强（P〈0．01或P〈0．05）。SJM、RBV和SJM＋RBV均能显著改善CoxAl6病毒感染乳鼠的临床症状，尤其SJM＋RBV组的乳鼠生存率和临床评分等指标均显著好于SJM和RBV组。结论SJM＋RBV抑制CoxAl6细胞增殖作用、提高感染CoxAl6病毒BALB／c乳鼠的存活率、延长其存活时间等保护效应均显著优于SJM、RBV单用组，并显著下移了抗CoxAl6病毒的有效剂量（相对SJM、RBV单用有效剂量而言），为临床治疗手足口病提供了用药新策略。

CoxA16感染手足口病患儿T细胞亚群及细胞因子的表达

目的检测Cox A16感染手足口病患儿T细胞亚群及细胞因子的表达,探讨其临床意义及患儿免疫功能变化。方法采用实时荧光PCR检测2013年4月至2014年9月咽拭子标本为Cox A16阳性重症手足口病患儿61例,分别在疾病急性期和恢复期采集患儿外周抗凝全血及空腹静脉血,另选40例健康体检儿童为健康对照组。采用流式细胞仪测定T细胞亚群;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清IL-4、IL-6,对检测结果进行统计学比较。结果急性期同恢复期和健康对照组比较,T细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例降低,CD8+比例升高,差异有统计学意义(tCD3+=4.217,4.978;tCD4+=4.196,5.103;tCD4+/CD8+=3.326,3.894;tCD8+=4.018,4.325,P<0.05);与恢复期和健康对照组比较,患儿急性期血清IL-4减低,而IL-6增高,差异有统计学意义(tIL-4=5.824,6.213;tIL-6=6.352,7.195,P<0.05)。结论 Cox A16感染手足口病患儿机体存在细胞免疫功能紊乱,可能与其致病机制有关。

手足口病肠道病毒EV71和CoxA16感染的检测分析

手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻微,以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。引起手足口病的病原体主要为肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）,其中EV71不仅引起HFMD,

深圳市非流行期在园儿童携带EV71和CoxA16的调查研究

目的了解非流行期在园儿童肠道病毒EV71和柯萨奇病毒CoxA16携带水平。方法采用随机整体抽样对三家幼儿园176名5岁以下儿童采集咽拭子样,进行实时荧光PCR法检测。结果 176名在园儿童有4人CoxA16阳性,阳性率为2.3%,2人EV71阳性,阳性率为1.1%。结论深圳某地非流行期在园儿童柯萨奇病毒CoxA16和肠道病毒EV71携带率分别是2.3%和1.1%,且年龄、性别、户籍、幼儿园等级、病原体差异不明显。

在园儿童携带EV71和CoxA16的调查研究

目的了解手足口病的流行期和非流行期在园儿童肠道病毒EV71与柯萨奇病毒CoxA16携带水平。方法采用随机整体抽样方法,对3家幼儿园5岁以下儿童采集咽拭子,进行实时荧光PCR检测。结果非流行期176名在园儿童有4名CoxA16阳性,阳性率为2.3%,2名EV71阳性,阳性率为1.1%。流行期216名在园儿童有7名CoxA16阳性,阳性率为3.2%,5名EV71阳性,阳性率为2.3%。结论深圳某地手足口病在流行期和非流行期,在园儿童病原体携带无显著差异;应采取措施加强对手足口病的预防和控制工作。

基于全基因组序列和E距离信息的CoxA16病毒亲缘关系分析

柯萨奇病毒A组16型(CoxsackievirusA16,CoxA16)病毒是引起手足口病(Hand,footandmouthdisease,HFMD)的主要病原体。为了解不同地区CoxA16病毒株的系统进化关系,收集了NCBI数据库中注释有具体地区分布的23条CoxA16全基因组序列,分别采用Kimura2-parameter法和E距离法对病毒株进行亲缘关系分析。结果表明,基于E距离的系统进化树最大程度地吻合了Kimura 2-parameter遗传距离法构建的系统进化树,且E距离法普适性较强,颇具应用潜力,为更精确地判断病毒株之间的进化关系提供了一条新途径。

抚州市CoxA6的流行特征及病原核酸检测结果分析

目的了解抚州市手足口病新的病原构成及流行规律,为预防和控制手足口病提供科学依据。方法用Real-time PCR方法对2018年7月-2019年6月采集的抚州市各县区医疗单位送检的临床诊断手足口病例咽拭子样本696例,进行肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CoxA16)、柯萨奇病毒A6型(CoxA6)和柯萨奇病毒A10型(CoxA10)核酸检测。结果696例咽拭子样本中,EV71阳性19例,CoxA16阳性157例,非EV71、非CoxA16型阳性220例,占总阳性的55.56%,CoxA6阳性138例,占非EV71、非CoxA16型阳性的62.73%,还有CoxA10阳性4例;CoxA6阳性病例在性别分布上差异有统计学意义(P<0.05)。结论在我市CoxA6型成为非EV71、非CoxA16型手足口病的主要致病毒株,1~2岁儿童为此型病毒感染的高危人群,男孩感染率大于女孩,高发季节在9~11月份和4月份,区域分布明显。

手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型分析

目的探究2018—2020年平顶山市新华区手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型状况。方法选择平顶山市新华区疾病预防控制中心2018年7月至2020年12月收治的104例手足口病患儿作为研究对象,通过患儿粪便及肛拭子标本对患儿病毒核酸进行检测,观察患儿肠道病毒病原学构成情况及分析患儿EV71病毒及CoxA16病毒VP1基因中各基因型同源性,并记录手足口病患儿临床症状表现及外周血白细胞水平。结果104例手足口病阳性样本中,EV71病毒感染54例(51.92%),CoxA16病毒感染7例(6.73%),其他肠道病毒感染43例(41.35%),EV71病毒感染比例高于CoxA16病毒感染比例,差异有统计学意义(P<0.05);CoxA16 VP1基因序列与A、B、C基因型代表株核苷酸同源性为82.6%~82.9%,与D基因型代表株核苷酸同源性为92.7%~99.2%;EV71 VP1基因序列与C4基因型代表株核酸同源性为92.4%~96.8%,与C4a基因型代表株核苷酸同源性为94.3%~96.8%,与C4b基因型代表株核苷酸同源性为92.4%~93.7%;EV71病毒、CoxA16病毒及其他肠道病毒感染组之间发热、皮疹等临床症状所占比例及外周血白细胞水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论手足口病患儿中EV71病毒感染比例相比于CoxA16病毒感染比例更高;且CoxA16及EV71 VP1基因序列均存在高同源性的病毒株;但各病毒株感染后临床症状表现几乎一致。

直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效

目的观察直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效。方法选取2019年8月—2022年8月贵州水矿控股集团有限公司总医院CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿85例,按照随机数表法分为观察组(42例)和对照组(43例),其中对照组患儿给予利巴韦林治疗,观察组患儿给予直肠滴入中药治疗。对比两组患儿治疗前后口腔疱疹、发热、皮疹等症状的评分,治疗前后患儿炎症因子、免疫指标水平及两组患儿治疗后不良反应发生率。结果治疗前,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分均降低,并且治疗后观察组患儿的以上症状评分低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α均降低,并且治疗后观察组患儿的以上降低幅度大于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿CD4^(+)、CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均升高,CD8^(+)水平降低,并且治疗后观察组患儿的变化幅度大于对照组(P<0.05);观察组患儿不良反应发生率为4.76%,对照组患儿不良反应发生率为18.60%,观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论给予CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿直肠滴入中药治疗,能减轻患儿临床症状及炎性反应,改善免疫功能,且不良反应少,值得借鉴。

不同标本EV71和CoxA16检测对于手足口病重症患者的临床意义分析

目的:了解泉州市2008年儿童手足口病重症病例不同标本中肠道病毒EV71和CoxA16的感染情况,为我市手足口病的治疗和防控提供依据。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光RT-PCR方法,对泉州市36例重症病例的咽拭子、疱疹液及脑脊液标本共104份(咽拭子35份,疱疹液32份,脑脊液36份)进行EV7I和CoxA16的检测,并对部分标本进行基因分型。结果:36例重症病例均只检出肠道病毒EV71,阳性率为100%,咽拭子、疱疹液、脑脊液的检出率分别为97.2%、100%、2.8%,基因分型为C4基因亚型,与国内其他省检出的基因型相同。结论:RT-PCR和实时荧光RT-PCR是手足口病快速、敏感、特异的检测方法。咽拭子和疱疹液的检出率无显著差异,所有重症病例均为C4基因亚型的EV7I感染,只有1例脑脊液检出EV7I,并且预后较差。

2008年湖州市肠道病毒71型和COXA16型的监测分析

目的:了解湖州市肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染提供依据。方法:采用荧光定量RT-PCR和RT-PCR方法,对湖州市101例疑似肠道病毒感染者的疱疹液、咽拭子及粪便标本进行肠道病毒通用核酸、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16的核酸检测。结果:肠道病毒通用核酸阳性87例,阳性率为86.14%(87/101)。其中EV71阳性20例,阳性率为19.80%(20/101);Cox A16阳性1例,阳性率为0.99%(1/101),二者均阴性14例。男女发病率分别为18.46%(12/65)和25.0%(9/36)。疱疹液中EV71检出率24.32%(9/37),Cox A l6检出率2.70%(1/37);咽拭子中EV71检出率18.96%(11/58),Cox A l6未检出;粪便标本中EV71和Cox A l6均未检出。结论:EV71是引起湖州市儿童手足口病的主要病原体,Ev71和Cox A16的发病率无性别差异,疱疹液、咽拭子标本中EV71及Cox A16的检出率明显高于粪便标本,要加强对Ev71和Cox A16的鉴别诊断,有利于提出更好的预防和控制措施。

EV71和CoxA16病毒的区别与联系

手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是婴幼儿常见传染病，主要表现为发热，手、足和口腔部的疱疹，由非脊髓灰质炎肠道病毒属的柯萨奇病毒（Coxsackievirus）A（CoxA）和B组，埃可病毒（ECHO viruses）4、6、7型等感染引起，CoxA16和人肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）感染尤其常见。1958年，加拿大首次分离出CoxA16[1]，1969年，加利福尼亚首次报道了EV71[2]，至1972年美国纽约、孟加拉国、澳大利亚陆续出现中枢神经系统感染流行时才真正分离出EV71病毒[1]。早期发现的手足口病病原体主要为CoxA16，20世纪70年代后，EV71与CoxA16感染交替出现，成为手足口病的主要病原体[3]。二者均在世界范围内引起多次暴发。CoxA16：美国（1968年）[4]、日本（1970年）[5]、澳大利亚（1991年）[6]、台湾（2006至2008年）[7]、西班牙（2009年）[8]；EV71：马来西亚（2000至2003年）[9]、新加坡（2000年）[10]、泰国（2008至2009）[11]、韩国（2008至2009年）[12]、中国阜阳（2008年）[13]。显然，手足口病已成为一种世界性疾病，已引起了全世界人民的重视。本文拟从病原学、临床表现、病毒基因型和核苷酸序列与临床表现的关系以及发病机制方面，对手足口病的两种主要病原体，即EV71和CoxA16的区别和联系进行综述。

一起CoxA6病毒引起的小儿脱甲症暴发调查

目的调查一起杭州市某幼儿园脱甲症暴发疫情的原因,分析脱甲症与手足口病/肠道病毒感染的关系。方法调查脱甲症流行病学特征和临床表现,开展室内环境空气质量、肠道寄生虫和微量元素检测,采用荧光PCR检测柯萨奇病毒A组6型(Cox A6)核酸,采用ELISA法检测Cox A Ig G抗体。选取该起脱甲症暴发疫情的病例和实验室确诊感染Cox A6的手足口病散发病例,进行病例对照研究。结果 33例病例中,男童21例,女童12例,平均年龄为(3.00±0.72)岁,发病时间主要集中在10月底至12月中旬。主要临床表现为指甲白斑、空洞、断裂及脱落等,平均受损指/趾(5.1±3.05)个。脱甲症发生时间距离手足口病发病期平均间隔(45±15)d。该幼儿园室内空气甲醛、苯、甲苯和二甲苯检测均在正常范围内;肠道寄生虫检测均为阴性;微量元素检测均在正常值范围内。病例Cox A Ig G抗体阳性率为63.64%;幼儿园脱甲症暴发疫情病例组和对照组发热、咳嗽、流涕、皮疹和脱屑等症状发生率差异有统计学意义(P<0.05)。Cox A6感染散发手足口病患儿的脱甲症罹患率为31.43%(11/35);脱甲表现与幼儿园暴发疫情类似,并有36.36%患儿伴皮疹和脱屑。患儿基础指标、生活习惯指标以及家庭影响指标等因素均非产生脱甲的危险因素(P>0.05)。结论杭州市某幼儿园脱甲症疫情可能是Cox A6病毒感染手足口病愈后发生的。脱甲症可能为肠道病毒感染引起的继发症状。

实时荧光定量RT-PCR检测急性出血性结膜炎CoxA24v病毒

目的对检测急性出血性结膜炎(AHC)病原CoxA24v的实时荧光定量RT-PCR方法进行特异性、敏感性、稳定性等方面的评估。方法利用实时荧光定量RT-PCR检测肠道病毒CoxA24v和其他几种肠道病毒,验证方法的特异性;根据TCID50进行倍比稀释,验证该方法的敏感性;将样品进行倍比稀释,做重复试验,验证方法的准确性。利用实时荧光定量RT-PCR对疑似AHC患者眼拭子进行检测。结果该方法对CoxA24v病毒的检测具有高度的特异性,对柯萨奇病毒A16、肠道病毒71等其他肠道病毒均无交叉反应。检测的灵敏度达0.1TCID50。用该方法对6个不同浓度的CoxA24 v进行5次检测,获得的结果重复性好。采用该方法检测疑似AHC患者标本,阳性者均测序,证明是Cox-A24v,未出现假阳性。结论实时荧光定量RT-PCR法是一种快速、敏感、特异、准确的方法,适用于急性出血性结膜炎的早期诊断和鉴别诊断。

PE、EV71及CoxA16基因探针的制备

目的制备地高辛标记基因探针,利用分子杂交试验同时检测手足口病患者粪便标本中的肠道病毒(Pan-enterovirus,PE)、肠道病毒71型(Enterovirs 71EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16)。方法根据GenBank已发表的基因序列,分别在PE、EV71、CoxA16保守区设计3对特异性寡核苷酸引物,进行实时荧光定量PCR检测。从PE、EV71、CoxA16阳性标本中分离病毒,提取RNA,以RT-PCR扩增产物作为基因探针的目的基因,采用随机引物法进行Digxigenin-11-dUTP标记,采用分子杂交试验检测3种基因探针的灵敏性和特异性。结果 RTPCR分别扩增出116、226、208bp目的基因片段,经标记后作为检测PE、EV71、CoxA16的3种高纯度的基因探针,对相应病毒RNA的最低检出限均为1pg,可分别与PE(+)、EV71(+)、CoxA16(+)标本提取的RNA发生特异性杂交,与乙型脑炎病毒、诺如病毒、轮状病毒、H3N2、甲型H1N1流感病毒的核酸无杂交反应。结论制备的PE、EV71及CoxA16基因探针灵敏、特异,操作简单,适用于手足口病病原的实验室检测。