抗哈维氏弧菌脂多糖单克隆抗体的制备及其鉴定

以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9。该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1∶1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应。用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC1108-1的LPS与2 F 9的反应部分减弱,免疫印迹结果表明2 F9识别LPS的类脂A抗原。用抑制ELISA法半定量检测GYC1108-1培养上清的LPS,测得培养48 h LPS释放量不超过39μg/mL,大大低于使鱼类致死所需的LPS的剂量。

我国Q热立克次体脂多糖的SDS-PAGE和单克隆抗体免疫印迹分析

用SDS-PAGE对5株Q热立克次体LPS进行分析,发现七医、新桥和Ys8等国内分离的3个Ⅰ相株与国外Ⅰ相参考株Henzerling的LPS图象相似,而国外Ⅱ相参考株Grita的LPS图象与它们有明显的差异。我国分离株之间的SDS-PAGE分析也显示多糖结构的差异,新桥株与Henzerling株的LPS图象最相似,具有最完整的带型,七医株和Ys8株则与新桥株有所不同,特别是在蛋白酶K消化后的WCP电泳中均有顶部区带下移现象,七医株63和59K带较为细小,而Ys8株则无30K而有40K带等,有类似Grita株之处。免疫印迹发现,用Ⅰ相McAbB_5与LPS作免疫印迹,Ys8株和Grita株显示类似在多克隆抗体免疫印迹中的指纹状印迹(在17.5K下),而七医株仅显一14K带,新桥和Henzerling两株则无印迹。用Ⅰ相McAb与蛋白酶K消化后的WCP作免疫印迹的结果与上述基本一致。