柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达及初步活性测定

目的:原核表达柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1,以便于研制血清学检测试剂。方法:在基因库中钓取CVA16-VP1的全长序列,采用PCR逐步合成法合成其全长基因,测序正确后克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化;建立捕获免疫酶联法检测IgM抗体,检测20份手足口病阳性血清和30份阴性血清,评价重组抗原的灵敏度和特异性;采用CVA16全病毒免疫的抗小鼠血清进行Western印迹。结果:重组CVA16-VP1蛋白在大肠杆菌中获得高效表达;用重组蛋白抗原检测,20份手足口病患儿阳性血清中有4份阳性,其中1份同时为肠道病毒71型(EV71)VP1阳性,30份阴性血清无反应。结论:实现了CVA16-VP1的高效表达,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为柯萨奇病毒A组16型诊断试剂的研究奠定了基础。

CA16滴度微量检测方法的建立及其验证

目的建立用Vero细胞检测柯萨奇病毒A组16型（CAl6）滴度的方法，并对其适用性进行初步验证。方法通过对细胞种类的选择、细胞接种浓度和细胞病变判定时间的优化，建立测定CAl6滴度的半数细胞感染剂量法（CCID50法），并对其进行初步验证。结果通过对病毒感染后细胞病变情况的观察，确定了以Vero细胞作为CAl6病毒滴度检定用细胞。Vero细胞的最佳接种浓度和结果判定时间分别为5×10^4-1×10^5细胞／mL（即96孔板内每孔加入的最终细胞量为5×10^3-1×10^4细胞）和7d。由4组人员对6批CAl6病毒液进行重复检测，实验结果表明不同实验人员测定结果的变异系数（CV）在1．739％-4．974％之间，说明该方法测定结果重复性好，准确度高。结论该法简便、稳定，可以灵敏、准确地检测CA16病毒的滴度，可用于相关疫苗生产过程中的质量控制。

2021年吉林省手足口病的病原构成及柯萨奇病毒A组16型VP1区基因特征分析

目的了解2021年吉林省手足口病(HFMD)的病原构成及柯萨奇病毒A组16型的VP1区基因特征,为手足口病科学防治提供依据。方法对2021年吉林省手足口病流行的主要病原体构成进行分析,并对优势病原体VP1基因编码区核苷酸序列进行测定和分析。结果278例HFMD患者标本中分离获得78株肠道病毒阳性毒株,阳性率为28.06%,其中CV-A16占35.90%,CV-A6占32.05%,CV-A4占11.54%,CV-A10占6.41%,未分型肠道病毒占14.10%。13株CV-A16阳性毒株中,9株属于B1a基因亚型,4株属于B1b基因亚型。13株CV-A16流行株之间氨基酸和核苷酸同源性分别为97.9%~100.0%和86.7%~100.0%。13株CV-A16流行株的第14、22、23、143、164、251、266及279位点发生了氨基酸突变。结论2021年吉林省HFMD CV-A16,CV-A6两种主要病原体共循环。13株CV-A16流行株B1a和B1b 2个基因亚型共同流行,以B1a基因亚型为主;与2008年青海株相比,共发生了8处氨基酸位点变异。

吉林省2012年柯萨奇病毒A组16型基因亲缘关系及氨基酸位点变异分析

目的了解吉林省2012年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）来源的柯萨奇病毒A组16型（Coxsackie Virus Group A Type 16,CVA16）基因亲缘关系及氨基酸位点的变异情况。方法收集吉林省2012年73例HFMD临床标本,病毒分离后对其中22株的VP1编码区部分核苷酸进行序列测定和分析。结果 22株CVA16中,12株为B1a基因亚型,10株为B1b基因亚型,12株B1a基因亚型氨基酸同源性为95.0%-97.8%,10株B1b基因亚型氨基酸同源性为94.3%-97.0%;有8株在第23位氨基酸位点发生了亮氨酸（Leucine,L）→蛋氨酸（Methionine,M）的变异,其余14株在该氨基酸位点均为L。结论 CVA16为吉林省HFMD的主要病原体之一,毒株间的同源性较高,均属于B基因群,在系统进化树上分别属于两个进化分支。

1050例疑似肠道病毒患者感染情况分析

目的了解1 050例疑似肠道病毒患者感染情况。方法采集2016年至2018年北京地坛医院收治的疑似肠道病毒感染患者的粪便标本或咽拭子共1 050份,采用实时荧光定量PCR检测肠道病毒通用型核酸、柯萨奇病毒A组6型(Coxsackie virus A6,CoxA6)、CoxA10、CoxA16、肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)。比较不同型别、不同年龄、不同标本类型患者肠道病毒阳性检出率。结果 2016年至2018年共检测疑似肠道病毒感染患者样本1 050例,通用型肠道病毒阳性657例,阳性率为62.57%(657/1050);其中EV71型阳性率依次为37.89%、31.58%、3.86%;CoxA16型阳性率依次为19.82%、4.68%、3.86%,均呈现逐年递减趋势;非EV71、CoxA16型肠道病毒阳性率依次为42.29%、63.74%、92.28%,呈现逐年递增趋势。在2018年检测的259例非EV71、CoxA16型肠道病毒阳性样本中,CoxA6型肠道病毒阳性率为84.94%(220/259),≤2岁的CoxA6型肠道病毒阳性患者感染率为77.2%(170/220)。在1 050例疑似肠道病毒感染样本中,同时进行粪便标本及咽拭子检测的样本为766例,其中粪便标本阳性为280例,阳性检出率为72.16%(280/776);咽拭子阳性为188例,阳性检出率为48.45%(188/776)。不同标本类型阳性检出率差异有统计学意义(χ^2=45.566,P<0.01)。结论近几年引起手足口病毒的亚型发生了变化,非EV71、CoxA16型肠道病毒已成为主要的流行病原,这与疾病的流行情况发生改变有关。建议临床完善非EV71、CoxA16型肠道病毒诊疗体系,检验科及时更换试剂,以满足临床需求。

重庆市万州区2016~2018年柯萨奇病毒A组16型所致手足口病的流行现状分析

目的探讨重庆市万州区2016-2018年柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)所致手足口病的流行现状。方法选取2016-2018年本市3家儿童医院或综合性医院儿科作为CoxA16感染手足口病监测哨点,结合手足口病个案及暴发数据分析CoxA16感染手足口病发病情况,调查人群年龄、时间分布特征。结果本市手足口病普通病例CoxA16感染率分别为2016年(24/50)、2017年(29/60)、2018年(42/88);CoxA16感染手足口病病例发病率主要集中于3月-6月;各年龄组CoxA16感染手足口病年均估算发病率随着年龄的升高而降低,高发年龄组是1-4岁;各月龄组CoxA16感染手足口病年均估算发病率随着月龄的增加呈上升趋势,高发月龄组是6-11月;各月份CoxA16感染手足口病估算发病率不同,高发月份是4-6月。结论2016-2018年本市CoxA16感染手足口病常发生于4-6月份、1-4岁及6-11月龄儿童群体。

2015年上海市奉贤东部地区手足口病患儿的病原分布与临床特征

目的:分析2015年上海市奉贤东部地区手足口病患儿的病原分布及其临床特点。方法:收集2015年1-12月上海市奉城医院感染门诊确诊的256例手足口病患儿的相关临床资料,常规采集血标本,采用ELISA法进行病毒早期检测,并分析手足口病患儿的临床特点。结果:256例病毒检测总阳性率为22.27%,其中肠道病毒71型阳性率为12.89%,柯萨奇病毒A组16型阳性率为9.38%。所有病例均为轻症病例,无一例发展为重症病例或死亡。结论:奉贤东部地区2015年手足口病患儿肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组16型检出率较低。手足口病防控重点以散居儿童和幼托儿童为主,采取综合有效措施降低手足口病的流行至关重要。

2011-2019年天津市西青区健康人群EV71和CVA16中和抗体监测分析

目的了解2011-2019年天津市西青区健康人群肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CVA16)中和抗体水平,为手足口病预防控制提供科学依据。方法采集天津市西青区健康人群静脉血标本进行EV71和CVA16中和抗体定量检测,对检测结果进行描述性分析。结果2011-2019年共采集404份健康人群的血清标本,其中EV71中和抗体阳性率为93.56%,CVA16中和抗体阳性率为87.38%。不同年份EV71抗体阳性率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=8.41,P<0.05);不同年份CVA16抗体阳性率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.03,P>0.05)。<5岁年龄组抗体阳性率最低,EV71和CVA16中和抗体阳性率随着年龄的增加均呈上升趋势。不同年龄组间的EV71和CVA16中和抗体阳性率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),学龄前儿童抗体阳性率均低于其他人群。不同性别EV71和CVA16中和抗体阳性率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。各年龄组人群不同抗体滴度构成比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EV71和CVA16隐性感染比例较高,<5岁学龄前儿童抗体阳性率最低,应加强<5岁儿童及托幼机构等重点人群和场所的疾病防控工作。

CV-A16感染沙鼠细胞因子和趋化因子的动态变化分析

柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是导致手足口病的病原体之一,CV-A16感染后宿主的外周血细胞的细胞因子表达变化的报道较少,也未见有关血清中细胞因子含量在感染前后的表达变化。为了分析CV-A16感染的不同严重程度的沙鼠细胞因子和趋化因子的动态变化。通过腹腔注射CV-A16构建CV-A16感染发病模型,应用流式细胞术、实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测病毒载量、血清炎症因子和趋化因子水平动态变化。CV-A16感染后重症沙鼠的临床症状,包括体重下降程度、临床症状分值以及死亡率均显著高于轻症沙鼠,并且重症沙鼠外周血白细胞比例和升高趋势总体上高于轻症感染沙鼠;重症感染沙鼠全血中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α的mRNA转录水平上调,IL-4、IL-10、IL-8和IP-10的mRNA转录水平下调;并且CV-A16感染后重症沙鼠血清中的TNF-α和IFN-γ含量显著上升,IL-8和IP-10的含量显著下降。结论为重症沙鼠全血和血清中存在多种趋化和炎症因子上调,可能与Th1炎症失调有关。

某医院手足口病患儿流行病学特征及感染因素分析

目的 分析手足口病患儿流行病学特征及感染影响因素。方法 选取2019年9月—2020年9月在江南大学附属医院就诊的手足口病患儿作为研究对象,分析其病原学、流行病学特征,以多因素Logistic回归分析法对手足口病患儿感染的危险因素进行分析。结果 143例手足口病患儿中检出肠道病毒71型(EV-71)IgM阳性100例(69.93%)、柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)IgM抗体阳性者28例(19.58%),其他肠道病毒IgM抗体阳性15例(10.49%)。男性手足口病患儿中EV-71 IgM抗体阳性率(73.97%)高于CoxA16 IgM抗体阳性率(19.18%)及其他肠道病毒IgM抗体阳性率(6.85%);女性手足口病患儿中EV-71 IgM抗体阳性率(67.14%)高于CoxA16 IgM抗体阳性率(18.57%)及其他肠道病毒IgM抗体阳性(14.29%);春夏季节发病手足口病患儿EV-71 IgM抗体阳性率(52.43%)、CoxA16 IgM抗体阳性率(44.66%)高于其他肠道病毒IgM抗体阳性率(2.91%),秋冬季节发病手足口病患儿其他肠道病毒IgM抗体阳性率(48.78%)高于EV-71 IgM抗体阳性率(21.95%)、CoxA16 IgM抗体阳性率(26.83%);重症组EV-71 IgM抗体阳性率(100.00%)高于CoxA16 IgM抗体阳性率(0.00%)及其他肠道病毒IgM抗体阳性率(0.00%);普通组EV-71 IgM抗体阳性率(55.96%)高于CoxA16 IgM抗体阳性率(22.02%)及其他肠道病毒IgM抗体阳性率(22.02%)(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄<3岁、热峰≥39℃、热程≥3 d、家庭卫生较差、与感染者接触、有神经反射异常均为手足口病患儿感染的危险因素(OR=1.707;1.721;1.752;0.617;1.992;2.061,P<0.05)。结论 手足口病患儿感染的肠道病毒类型有明显的季节分布规律,且EV-71感染为手足口病患儿的主要病毒感染类型,CoxA16感染次之。同时,年龄<3岁、热峰≥39℃、热程≥3 d、家庭卫生较差、与感染者接触、有神经反射异常均为手足口病患儿感染的危险因素,临床应密切关注以上指标以提高手足口病的防治效果。

上海市松江区手足口病的病原学及序列特征的研究

目的分析2010年-2012年上海市松江区手足口病的流行病学特征和主要病原体肠道病毒的基因型别。方法收集从松江区各医疗机构送检的疑似手足口病的样本,采用荧光定量RT-PCR方法对采集的1 207份HFMD进行肠道病毒(Enterovirus,EV)核酸检测;对部分EV71的VP1区进行序列测定和分析,用MEGA软件进行病毒基因特征分析,通过Blast服务器比对进行EV型别鉴定,通过序列比对了解松江区HFMD病毒的基因型别。结果松江区各乡镇均有病例报告,地区分布无显著特点;<5岁的婴幼儿为疾病高发年龄段;5月-7月为发病高峰期,肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)和柯萨奇A16(Coxsackie Virus 16,CoxA16)为主要病原体,基于VP1区序列分析表明松江区EV71毒株与C4a亚型毒株有最近的亲缘性和最高的同源性。结论 2010年-2012年上海市松江区流行的HFMD主要病原为EV71和CoxA16,其中EV71属于C4a亚型。

湘潭市手足口病病原学实验室检测分析

目的:根据手足口病病原学检测结果分析该病流行特征,同时评估从不同部位采集样品的阳性检出率,为手足口病的防控提供科学依据。方法:临床诊断为手足口病例的咽拭子标本,疱疹液标本,粪便标本,采用实时荧光(定量)PCR进行检测,对总肠道病毒阳性的标本,进行EV71和CA16分型,检测结果分组统计分析。结果:在652份监测病例样品中,总肠道病毒阳性样品446份,其中EV71阳性199份,占44.52%;CA16阳性176份,占39.37%;其它型肠道病毒阳性71份,占15.97%。在103份重症病例样品中,总肠道病毒阳性91份,其中EV71阳性77份,占84.62%,CA16阳性3份,占3.29%,其它型肠道病毒阳性10份,占10.10%。结论:湘潭市手足口病流行病原以EV71型和CA16型交替流行;重症病例主要由EV71引起;疱疹液,粪便标本的阳性检出率高于咽拭子。

2014年-2015年湘潭市手足口病监测结果分析

目的根据湘潭市2014年-2015年手足口病监测实验室检测结果分析手足口病病原学流行特征,为制定预防和控制措施提供参考依据。方法采用荧光定量RT-PCR方法,对2014年-2015年湘潭市674份疑似手足口病病例样品进行肠道病毒通用核酸(EV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)检测。结果 674份样品中,肠道病毒通用核酸阳性(EV)440例,阳性率为65.28%;EV71型阳性80例,阳性率为11.86%;Cox A16阳性89例,占13.20%;其他型阳性271份,占40.39%;重症病例38例,EV阳性34份,阳性率为89.47%;EV71阳性22份,阳性率为57.89%;其他型阳性9份,阳性率为23.68%。结论 2014年-2015年,湘潭市手足口病以其他型为主要流行株,同时混合EV71型和Cox A16型;重症病例主要由EV71型引起。

2017年平顶山市手足口病病原学监测结果分析

目的分析2017年平顶山市手足口病的病原学特征,为平顶山市手足口病的预防控制工作提供病原学依据。方法选取2017年平顶山市手足口病病例作为研究对象,采集手足口病患者的粪便或肛拭子标本,进行总肠道病毒、柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus group A type 16, Cox Al6)和肠道病毒71型(Enterovirus type 71, EV71)病原学检测,并利用描述流行病学方法对检测结果进行分析。结果在所采集的320例手足口病病例标本中,肠道病毒阳性226份,总检出率为70.63%;其中Cox Al6、EV 71、EV 71+Cox Al6和其它肠道病毒等4种(类)病毒的检出数分别为42份、82份、1份和101份,分别占肠道病毒阳性总数的18.58%(42/226)、36.28%(82/226)、0.44%(1/226)和44.69%(101/226)。患者以3岁以下儿童为主,男性多于女性,以散居儿童为主。结论应持续加强当地儿童手足口病的病原学监测,并建议进行其他肠道病毒的分型检测,动态掌握手足口病病原学变化规律,为手足口病防治提供明确的病原学依据。