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不同序列Cp G ODN对牙周膜细胞的促增殖作用 被引量:5
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作者 秦雁雁 申玉芹 +4 位作者 任春霞 郭恪 林崇韬 王丽颖 于永利 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期876-879,I0001,共5页
目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10~15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs... 目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10~15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs,取第4和5代细胞用于实验。实验组用1~12号Cp G ODN刺激PDLCs,分别培养24、48和72h,用PBS做对照组,MTT比色法检测吸光度A492值。结果:原代培养的PDLCs呈长梭形或星形,胞突细长,中央有圆形或椭圆型的胞核,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,为中胚层来源细胞。与对照组比较,实验组Cp G ODN的A均值升高,其中9、11号Cp G ODN与对照组比较A值明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Cp G ODN有促人PDLCs增殖作用,其中9、11号Cp G ODN可显著促进人PDLCs增殖。 展开更多
关键词 牙周膜细胞 cp g odn 细胞增殖
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TLR9激动剂CpG-ODN对HepG2肝癌细胞增殖及侵袭的影响 被引量:1
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作者 李鹏 张艳婷 +2 位作者 胡莹 何彩霞 杨少奇 《宁夏医科大学学报》 2015年第4期397-399,412,F0004,共5页
目的探讨Toll样受体9(TLR9)激动剂未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤核苷酸序列(Cp G-ODN)对Hep G2肝癌细胞增殖及侵袭的影响。方法应用不同浓度的Cp G-ODN作用于肝癌细胞株Hep G2不同时间,采用实时荧光定量PCR法检测Hep G2中TLR9mRNA表达情况,MT... 目的探讨Toll样受体9(TLR9)激动剂未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤核苷酸序列(Cp G-ODN)对Hep G2肝癌细胞增殖及侵袭的影响。方法应用不同浓度的Cp G-ODN作用于肝癌细胞株Hep G2不同时间,采用实时荧光定量PCR法检测Hep G2中TLR9mRNA表达情况,MTT法检测Hep G2细胞的增殖变化,Transwell法检测其侵袭能力变化。结果 Cp G-ODN组(4、16μg·m L-1)与阴性对照组比较可增加Hep G2细胞中TLR9mRNA的表达;Cp G-ODN(1、4、16μg·m L-1)激动TLR9后可促进Hep G2细胞增殖,且以48h最为显著,并存在剂量依赖关系;Cp G-ODN(4、16μg·m L-1)激动TLR9可增强Hep G2细胞的侵袭能力(P均<0.05)。结论 TLR9表达上调可促进肝癌细胞增殖和侵袭。 展开更多
关键词 TOLL样受体9 肝癌细胞 HEP g2 胞嘧啶-鸟嘌呤核苷酸序列
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反相色谱检测CpG ODN纯度方法的建立 被引量:1
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作者 王丽丽 马波 +6 位作者 何丽芳 吴凯 杨华智 唐业峰 赵志宏 何建东 钱雯 《药物生物技术》 CAS 2015年第4期335-339,共5页
Cp G ODN是以非甲基化Cp G为核心的经硫代修饰的单链脱氧寡核苷酸高分子聚合物,具有免疫刺激作用。近年来,Cp G ODN引起了疫苗、哮喘、肿瘤等预防及治疗中的广泛研究。Cp G ODN通过固相法进行合成时,易产生n-1,n-2杂质序列,使得目的序... Cp G ODN是以非甲基化Cp G为核心的经硫代修饰的单链脱氧寡核苷酸高分子聚合物,具有免疫刺激作用。近年来,Cp G ODN引起了疫苗、哮喘、肿瘤等预防及治疗中的广泛研究。Cp G ODN通过固相法进行合成时,易产生n-1,n-2杂质序列,使得目的序列纯度降低。因此,文章建立了一种反相色谱法对合成后的序列进行检定。通过采用反向层析色谱C18柱,甲醇-六氟异丙醇溶液为流动相,线性梯度洗脱,体积流量为0.25 m L/min,检测波长为260 nm,柱温60℃,进样量5μL,获得了精确度较高的检定结果。之后,对比了毛细管凝胶电泳及反相色谱分别对杂质序列的检测结果,发现反相色谱的检测结果更优,分离度达1.4以上,而毛细管电泳法无法有效检定n-1序列。此外,该方法进行了方法学的验证,在16.5~660μg/m L浓度范围内线性良好,R2=0.991 2。回收率为98.7%,进行了6个批次样品的精密度与重现性检定,检定结果良好,RSD≤5%。因此文章所述纯度检定方法效果较佳,精密度及准确度更高,适合于Cp G ODN序列的纯度检测,为核酸序列在未来的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 高效液湘色谱 毛细管凝胶电泳 cpg odn 核苷酸 纯度 线性回归 精密度 回收率
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Toll样受体9在宫颈癌细胞中的表达及抗凋亡作用 被引量:2
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作者 陈颍 周家德 《安徽医学》 2015年第4期399-402,共4页
目的研究宫颈癌Hela细胞中Toll样受体9(TLR9)的表达情况及TLR9对宫颈癌Hela细胞抗凋亡能力的影响,寻求宫颈癌免疫治疗的新途径。方法体外培养宫颈癌Hela细胞株,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hela细胞中TLR9mRNA的表达情况;四甲基... 目的研究宫颈癌Hela细胞中Toll样受体9(TLR9)的表达情况及TLR9对宫颈癌Hela细胞抗凋亡能力的影响,寻求宫颈癌免疫治疗的新途径。方法体外培养宫颈癌Hela细胞株,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hela细胞中TLR9mRNA的表达情况;四甲基偶氮唑盐(MTT)检测不同浓度人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对Hela细胞生长抑制情况;流式细胞术(FCM)检测Cp G-ODN预刺激对Hela细胞抗TRAIL诱导凋亡能力的影响。结果 1TLR9 mRNA在Hela细胞中表达,应用Cp G-ODN刺激24 h后,TLR9 mRNA的表达增加,与PBS对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。2MTT比色法检测显示,TRAIL蛋白可抑制Hela细胞生长,随着TRAIL蛋白浓度增加,抑制率增加。并且计算半抑制浓度IC50(223.092±3.850)ng/m L。3流式细胞术检测显示,TLR9特异性激动剂Cp G-ODN刺激Hela细胞后,TRAIL诱导细胞凋亡率为(15.32±2.46)%,与无Cp G-ODN预刺激组[(43.49±2.04)%]相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR9特异性激动剂Cp G-ODN能够增强Hela细胞抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡能力,提示TLR9在肿瘤的恶性进程中发挥作用,为宫颈癌的免疫治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 宫颈癌 HELA细胞 TOLL样受体9 细胞凋亡 cpg-odn
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