CpG 684-乙肝疫苗食蟹猴重复免疫安全性评价

目的对食蟹猴重复给予含CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)佐剂的乙型肝炎病毒疫苗,考察该疫苗的非临床安全性,为临床设计人用剂量及监测临床不良反应提供参考依据。方法 30只食蟹猴随机分为3组:溶媒对照组、CpG 684-乙肝疫苗50μg和500μg[含50μg或500μg CpG 684+10μg乙型肝炎表面抗原(HBsAg)]组,每组雌雄各半。在第0,2,4和6周各im免疫1次,试验期间观察食蟹猴的症状和注射部位刺激性,测定体质量、摄食量、体温和心电图,进行血液学、血清生化检测、血清中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、抗核抗体、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)水平检测;末次免疫后3 d和4周分别对每组部分食蟹猴进行剖检,脏器称重,并采集组织样本进行组织病理学检查。结果各组食蟹猴未见异常症状、注射部位肉眼观察未见异常,CpG 500μg组雌性食蟹猴外周血单核细胞数量增加(P<0.01)。各疫苗组均可诱导食蟹猴产生一定水平的HBsAb。食蟹猴大体病理学检查未见与疫苗相关的异常变化。组织病理学检查发现,注射部位肌束间发生轻至中度炎症反应,免疫结束4周有部分恢复,未见其他与给予疫苗相关的组织病理学改变。其他检测指标均未见异常。结论 CpG 684-乙肝疫苗在给定剂量下多次免疫食蟹猴具有较好的安全性。

小鼠重复给予CpG 684-狂犬疫苗安全性评价

目的对小鼠重复给予CpG684-狂犬疫苗，考察该新型疫苗的非临床安全性，为临床设计人用剂量及临床毒副反应的监测提供参考依据。方法使用BALB／c小鼠，分为5组：溶媒对照组、狂犬疫苗对照组、（2．5μg CpG684＋1／4狂犬疫苗）·只“组、（5μg CpG684＋1／4狂犬疫苗）·只“组和（15μgCpG684＋1／4狂犬疫苗）·只。组。肌肉注射给药，在第0、3、7、14、28、42天各给药1次，实验期间观察动物的临床症状、注射部位刺激性，测定体重、摄食量，进行抗狂犬病毒抗体和抗体亚型IgG2a检测；末次给药后1d、3周分别进行血液学和血清生化测定，分别对每组部分动物进行剖检、脏器称取质量，并采集组织样本进行组织病理学检查。结果狂犬疫苗本身和CpG684-狂犬疫苗各剂量在第4～6次给药后使小鼠产生严重过敏反应。各剂量CpG684-狂犬疫苗在末次给药后引起雌、雄小鼠单核细胞数量增加及雌性小鼠血小板减少，高剂量CpG684-狂犬疫苗还引起雄性小鼠血小板减少；高剂量CpG684-狂犬疫苗引起雌、雄小鼠血清总胆固醇（CHO）增加；狂犬疫苗和中、高剂量CpG684-狂犬疫苗引起小鼠血清碱性磷酸酶（ALP）水平降低，以上改变在停药后3周均恢复。单独狂犬疫苗和各剂量CpG684-狂犬疫苗均引起雌、雄小鼠血清球蛋白增加、A／G比值降低，停药后3周未恢复。给予单独狂犬疫苗和各剂量CpG684-狂犬疫苗均引起小鼠脾脏质量增加，停药后3周有-定的恢复。与疫苗相关的组织病理学改变为脾脏白髓增生和白髓生发中心易染体巨噬细胞数目增多，以及注射肌肉局部显著炎症反应和纤维组织增生，停药后3周除高剂量组外，其他组均能较好恢复。结论狂犬疫苗和CpG684．狂犬疫苗引起小鼠严重过敏反应、血清球蛋白和脾脏质量增加、ALP降低，CpG684-狂犬疫苗引起小鼠血小板减少、单核细胞数量和血清CHO增加。与疫苗相关的组织病理学改变为脾脏白髓增生和白髓生发中心易染体巨噬细胞数目增多，以及注射肌肉局部显著炎症反应和纤维组织增生。停药后3周上述变化多数能较好恢复。

大鼠重复肌肉注射CpG 684-乙肝疫苗安全性评价

目的:对大鼠重复给予Cp G 684-乙肝疫苗,考察该新型疫苗的非临床安全性,为临床设计人用剂量及临床不良反应的监测提供参考依据。方法:大鼠分为3组:溶媒对照组、(50μg Cp G 684+10μg HBs Ag)组和(500μg Cp G 684+10μg HBs Ag)组。每组40只动物,其中主毒性组每组30只,卫星组每组10只,雌雄各半。肌肉注射(im)给药,在第0,2,4和6周各给药1次,实验期间观察动物的临床症状、注射部位刺激性,测定体重、体温、摄食量,进行血清IL-6,TNF-α,IFN-γ和乙肝表面抗体测定;给药结束和恢复期结束解剖前进行尿检、血液学、血液凝固、血清生化学和抗核抗体测定,分别对每组部分动物进行剖检、脏器称重,并采集组织样本进行组织病理学检查。结果:注射疫苗使大鼠摄食量暂时性减少;低、高剂量均引起雌、雄鼠白细胞和中性粒细胞数量显著增加、血红蛋白含量轻度降低;高剂量引起雌、雄鼠红细胞比容(HCT)轻度降低、雌鼠红细胞数轻度减少及雄鼠平均红细胞比容(MCV)和平均红细胞血红蛋白含量(MCH)轻度降低,低剂量亦引起雌鼠HCT轻度降低;低、高剂量疫苗均引起雌、雄鼠血清白蛋白和A/G比值降低,高剂量引起雌鼠血清总蛋白降低及雌、雄鼠丙氨酸氨基转换酶(ALT)轻度升高。给药结束时,高剂量组2只雄鼠血清K+,P,ALT,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)水平明显升高,Na+和Cl-水平降低,伴有肝血窦扩张充血和其他部分实质器官间质血管扩张。给药结束时,低、高剂量组雄鼠和高剂量组雌鼠的脾重及脾/体重比值增加。恢复期结束时,上述变化均明显恢复。与给予供试品相关的病理学改变为注射部位肌肉、坐骨神经及邻近肌肉的炎性细胞浸润、纤维组织增生、肌肉组织坏死及腹股沟淋巴结淋巴小结内易染体巨噬细胞增多和副皮质区增宽,恢复期结束时病变明显消退。疫苗可诱导大鼠产生抗乙肝表面抗体,其他检测指标均未见明显异常。结论:大鼠重复肌肉注射Cp G 684-乙肝疫苗,引起外周血中性粒细胞数和脾脏重量增加,引起摄食量、血红蛋白含量、红细胞比容、血清白蛋白量轻度降低,高剂量疫苗引起血清ALT轻度升高,与给予疫苗相关的病理学改变为注射部位和腹股沟淋巴结炎性反应病变,以上均为可逆性变化。疫苗未引起其他评价指标的明显变化。