添加CpG ODN佐剂对鸭坦布苏弱毒活疫苗免疫效果影响研究

鸭坦布苏病毒是一种黄病毒科黄病毒属单股正链RNA病毒,可造成蛋鸭、种鸭产蛋下降,给养鸭业造成巨大经济损失的重要疾病。目前,坦布苏弱毒活疫苗是临床上有效预防该病的重要手段之一。CpG ODN作为疫苗佐剂被证实能够有效提高疫苗的免疫效果,但其对弱毒活疫苗的是否具有免疫增强的效果尚不清楚。本研究选择鸭坦布苏弱毒活疫苗FX2010-180P,以CpG ODN为免疫佐剂,在鸭体内进行免疫以及攻毒保护实验。通过检测鸭体内抗体水平、免疫保护率、组织切片来进行免疫效果的评估。结果显示,FX2010-180P免疫组鸭子在免疫后3~4 d即可产生特异性抗体,而添加CpG ODN疫苗佐剂组,免疫鸭的抗体产生时间滞后于未添加组。攻毒保护实验结果显示,两种方式免疫方式都可以保护鸭子不受坦布苏病毒野毒的感染。本研究结果显示添加CpG ODN对鸭坦布苏FX2010-180P弱毒活疫苗并不具有免疫增强的效果。

高效赤红球菌协同CpG ODN增强鸡禽流感疫苗的免疫效力

禽类疫苗存在免疫效率低、免疫持续时间短和细胞免疫刺激不足等问题,新型禽类疫苗佐剂亟待开发。作者的前期研究证实,CpG ODN具有高度的安全性以及良好的细胞和体液免疫刺激功能,然而,CpG ODN的生产和使用成本十分高昂,尚未用于禽类疫苗佐剂。为了降低成本并提升功效,基于TLR2和TLR21潜在的协同关系,本研究以禽流感疫苗为模式疫苗,探究了赤红球菌和CpG ODN协同刺激免疫的关系。通过HI试验、细胞增殖试验和相关细胞因子表达量的检测,证实了该复合佐剂具有更强大的体液免疫和细胞免疫提升功效,能提升Th 1型免疫反应,免疫保护持续时间长,同时还能增强系统和局部免疫。通过检测受体的表达量,确证了CpG ODN与赤红球菌之间存在着协同关系。此外,在CpG ODN剂量减半的复合佐剂刺激试验中,发现由于协同关系的存在,CpG ODN半剂量的复合佐剂仍具有良好的免疫刺激效果。本研究为进一步降低CpG制剂的生产和使用成本做了先行探究,为CpG制剂高效且成本可控地应用于禽类动物养殖,乃至畜牧养殖奠定了基础。

CpG ODN B对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫增强效应

目的:探究CpG ODN作为疫苗佐剂对鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫效果。方法:将CpG ODN B/P这2种类型的免疫佐剂分别与鸡新城疫重组杆状病毒载体疫苗BV-BXY-F混合后,以鼻腔免疫方式进行鸡体免疫,并进行攻毒保护实验,通过对鸡体的临床症状观察,以及检测免疫保护率、中和抗体水平、淋巴细胞增殖活性、细胞因子含量,分析各CpG ODN对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响。结果:BV-BXY-F+CpG ODN B免疫组鸡在免疫后42 d中和抗体效价最高,免疫保护率100%,中和抗体效价,sIgA、IgG、IgA、IFN-γ、IL-2、IL-4、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞含量较BV-BXY-F+CpG ODN P组分别提高了32.08%、8.44%、13.56%、23.71%、50.20%、132.97%、39.76%、38.43%、25.99%,且差异显著(P<0.05),与单独免疫组BV-BXY-F相比分别提高了13.71%、89.39%、10.41%、21.26%、159.17%、52.71%、237.84%、80.51%、75.57%。结论:CpG ODN B对增强鸡新城疫重组杆状病毒疫苗的免疫增强效果最好。

CpG ODN对鸡新城疫LaSota活疫苗的免疫增强效应

将3种不同的未甲基化CpG ODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后,经滴鼻和点眼免疫鸡,通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量,以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1βmRNA量,分析各CpG ODN对新城疫LaSota活疫苗免疫效果的影响。结果表明,经2次免疫后,含GTCGTT核心基序的CpG ODN1组,鸡血清平均HI抗体效价最高达8.2log2、淋巴细胞刺激指数达9.836、NO分泌量达35.833μmol/L,分别比疫苗单独免疫组高出2个滴度(P<0.05)、4.4(P<0.01)、27.6μmol/L(P<0.01);含GACGTT核心基序的CpG ODN2组增强作用不明显,与疫苗单独免疫组无差异;而CpG ODN3的免疫刺激活性由于受其侧翼序列的影响,作用明显减弱甚至丧失。对细胞因子的影响,CpG ODN3组IFN-γmRNA表达量稍高于CpG ODN1组,而其余细胞因子均以CpG ODN1组表达水平最高(P<0.05)。由此证明CpG ODN1能显著增强鸡对新城疫LaSota活疫苗的体液和细胞免疫反应,可以作为高效的免疫增强剂。

CpG ODN对哮喘小鼠气道炎症及GATA-3的影响

目的观察CpGODN对支气管哮喘小鼠气道炎症及肺组织GATA-3mRNA表达的影响。方法将40只雌性BALB/C小鼠随机分为4组(每组10只):生理盐水对照组(A组);哮喘组(B组);CpGODN干预组(C组);GpCODN对照组(D组)。以鸡卵白蛋白(OVA)致敏小鼠建立哮喘模型,C组和D组在OVA激发前分别予CpGODN及对照GpCODN腹腔注射。在末次激发后24h收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液行白细胞计数及EOS分类计数,ELISA法检测各组小鼠BALF中IL-4、IL-5及IFN-γ水平,肺组织HE染色观察其病理变化以及用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中GATA-3mRNA的表达。结果各组BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、IL-4、IL-5和IFN-γ浓度分别为:A组为(7.46±1.77)×105个/mL、(0.75±0.48)%、(26.9±4.6)pg/mL、(41.7±5.1)pg/mL和(110.4±12.1)pg/mL,B组为(21.68±4.40)×105个/mL、(9.50±1.13)%、(267.6±24.5)pg/mL、(218.2±15.2)pg/mL和(47.9±9.6)pg/mL,C组为(8.98±2.23)×105个/mL、(2.90±0.86)%、(85.9±8.1)pg/mL、(63.0±9.6)pg/mL和(221.0±29.9)pg/mL,D组为(20.41±3.47)×105个/mL、(9.60±1.30)%、(260.7±15.7)pg/mL、(205.1±15.8)pg/mL和(52.2±10.7)pg/mL。B组与A组比较差异有显著性(P<0.01),C组与B组比较差异有显著性(P<0.01),D组与B组比较差异无显著性(P>0.05)。C组小鼠肺组织GATA-3mRNA的表达较B组明显减低,差异有显著性(P<0.01),D组与B组比较差异无显著性(P>0.05)。结论CpGODN可以抑制哮喘小鼠Th2型细胞因子生成,抑制肺部GATA-3mRNA的表达,减轻哮喘气道炎症。

微波消融联合CpG ODN治疗小鼠移植性结肠癌及对免疫状态的影响

目的研究微波消融联合CpGODN对小鼠移植性结肠癌的治疗作用及对免疫状态的影响。方法 Balb/c小鼠皮下接种结肠癌CT26细胞建立肿瘤模型,肿瘤分别给予瘤周注射PBS、微波消融、微波消融+瘤周注射CpGODN和瘤周注射CpGODN四种处理。定期测量肿瘤大小,利用流式细胞仪检测小鼠外周血中CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+细胞的比例;采用ELISA检测小鼠外周血中IL-2、IL-12和IFN-γ含量。给予微波消融组和微波消融联合CpGODN组治愈的小鼠再次接种CT26细胞,观察成瘤率。结果微波消融组和微波消融联合CpGODN组小鼠的肿瘤体积显著小于PBS组和CpGODN组。4组小鼠外周血中的CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞比例无显著性差异,微波消融联合CpGODN组及微波消融组的CD3+CD4+T/CD3+CD8+T细胞比值分别为1.58±0.10和1.53±0.13,与PBS组和CpGODN组相比显著升高(P均<0.05)。微波消融联合CpGODN组小鼠外周血中IL-2浓度为(64.6±7.4)pg/ml,IL-12浓度为(314.1±26.9)pg/ml,IFN-γ浓度为(61.9±7.3)pg/ml,显著高于其他3组(P均<0.05)。肿瘤再次攻击实验中微波消融联合CpGODN组成瘤率为25.0%,显著低于微波消融组的75.0%(P<0.05)。结论 CpGODN增强了微波消融治疗小鼠的免疫功能,减少了肿瘤再次攻击的成瘤率。

CpG ODN增强猪囊尾蚴病疫苗免疫反应的试验研究

依据CpG基序的生物学和免疫学特性 ,人工设计合成了硫代修饰的多种CpGODN序列 ,通过兔、小鼠和猪体进行了与铝胶、2 0 6佐剂和蜂胶佐剂的配伍和比较试验 ,用ELISA法测定加单一佐剂或联合佐剂组疫苗诱导的抗猪囊尾蚴病的抗体含量 (IgG或IgG2a)和效价 ,用MTT淋巴细胞转化试验法测定刺激指数 ,进一步证实了CpG基序的种类、数量和空间结构以及与其他佐剂联合对疫苗免疫反应的影响 ,CpG基序以 1个TpC的 5′端开始 ,紧接着 3个GTCGTT基序 ,基序与基序之间由TpT或T分隔 ,在兔、小鼠和猪都能诱导机体产生强烈的免疫反应特别是细胞免疫反应。

新型CpG ODN增强乙肝疫苗诱导IgG2a类抗体产生的实验研究

目的寻找能增强乙肝疫苗刺激IgG2a类抗体产生,使机体处于Th1样免疫环境的新型乙肝疫苗佐剂。方法选用自行设计的A、B、C型CpGODN,并以发表的A、B型CpGODN作为阳性对照,与重组乙肝疫苗混合后于第0、4周免疫BALB/c小鼠,用ELISA法检测免疫小鼠血清中HBsAb水平及种类。结果各型CpGODN都能增强乙肝疫苗刺激HBsAb的产生水平,CpGODN+乙肝疫苗免疫的小鼠血清中HBsAb类型为IgG2a>>IgG1,而单独应用商品化重组乙型肝炎疫苗的小鼠血清中HBsAb类型为IgG1>>IgG2a。结论各型CpGODN对重组乙型肝炎疫苗[含Al(OH)3佐剂]均具有增效作用,而且可以诱导机体产生倾向于Th1途径的免疫应答反应。

负载GST抗原的树突状细胞疫苗联合CpG ODN抗日本血吸虫感染的保护性研究

目的研究负载GST抗原的树突状细胞(DC)疫苗联合非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(CpGODN)免疫小鼠抗日本血吸虫感染的作用。方法将GST抗原纯化后负载树突状细胞株DC2.4,免疫荧光染色法检测GST的负载情况,并进行动物保护性实验。35只C57BL/6小鼠随机均分7组(每组5只),分别作免疫注射:A组为未处理的DC,B组为牛血清白蛋白(BSA)处理的DC,C组为GST负载的DC,D组为GST+CpGODN共刺激的DC,E组为CpGODN刺激的DC,F组为GST蛋白,G组为空白对照组。A～E各组DC经0.25%胰蛋白酶消化后用PBS调整密度至107/ml,每鼠皮下注射0.1ml,每次间隔2周,共免疫3次。F组首次每鼠免疫50μgGST蛋白加福氏完全佐剂,第2、3次分别免疫50μg、10μgGST蛋白加福氏不完全佐剂,均为皮下注射。各组于末次免疫后10d收集血清,ELISA方法分析血清中的特异性抗体。各组小鼠于末次免疫后2周每鼠经腹部感染尾蚴30±1条。6周后剖杀小鼠,计算减虫率。结果 DC经GST负载后可在荧光显微镜下观察到抗GST的特异荧光,表明抗原已被DC摄取。各组小鼠免疫后,F组抗体水平最高,为2.1270±0.4115,另外C组(0.5552±0.0789)和D组(0.7150±0.0523)的抗体水平均高于G组(0.2358±0.0889),差异有统计学意义(P<0.05)。免疫后攻击感染,D组小鼠的减虫率最高为53.3%,其次为F组(24.0%)和C组(21.3%),但D组与两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CpGODN联合GST抗原负载的树突状细胞疫苗具有一定的抗日本血吸虫感染作用。

CpG ODN增强乙型肝炎表面抗原免疫小鼠的抗体产生

目的 :探讨合成含CpG基序的寡核苷酸 (CpGODN)对重组乙型肝炎表面抗原 (rHBsAg)及乙型肝炎疫苗增强小鼠特异性抗体产生的效应。方法 :采用非纯系 (Km)及纯系 (Balb c)小鼠作为免疫对象 ,经后腿胫骨前肌免疫 2次 ,ELISA法检测血清乙型肝炎表面抗体 (抗 HBs)效价。结果 :加CpGODN组 ,其抗 HBs效价均较单独注射rHBsAg和疫苗组明显增高 ,持续时间长 ,且纯系鼠的抗体效价明显高于非纯系鼠。结论 :CpGODN对小鼠抗 HBs产生具有增强作用 ,且与疫苗中的铝佐剂有协同效应。

不同CpG ODN对大鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的研究

目的:筛选对大鼠骨髓间充质干细胞增殖具有影响作用的CpG ODN。方法:体外全骨髓贴壁法提取并纯化大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代孵育12 h至完全贴壁,双盲法加入不同CpG ODN共孵育48 h,MTT比色法检测,不同大鼠重复实验3次,筛选促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的CpG ODN。结果:与PBS溶媒对照组相比,有4条CpG ODN对不同大鼠BMSCs均具有显著促增殖作用,MTT结果具有统计学意义(P<0.05)。结论:4条CpG ODN具有显著促进大鼠BMSCs增殖的作用,将在下一步的实验中探讨它们对BMSCs分化功能的作用。

免疫刺激剂CpG ODN在家禽疾病防控中的研究进展

CpG ODN是含一个或多个非甲基化CpG基序的寡聚脱氧核苷酸,根据其结构及生物学活性的不同,分为A、B、C、P四种类型,目前在家禽疾病防控方面的研究主要以B型CpG ODN为主,CpG ODN通过与鸡TLR-21受体结合发挥其免疫刺激活性,可用于防控鸡常见细菌性感染、病毒性感染以及球虫感染等。文章从CpG ODN的分类、作用机制、家禽疾病防控等方面进行阐述,为CpG ODN在家禽生产中的应用提供参考。

STAg联合CpG ODN和CT鼻内免疫小鼠诱导的特异性抗体应答和脾淋巴细胞的特异性增殖反应

目的观察可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)和/或霍乱毒素(CT)鼻内免疫BALB/c小鼠后血清IgG、肠冲洗液IgA抗体水平及脾淋巴细胞体外特异性增殖反应,探讨CpG ODN和CT的佐剂效应。方法6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为5组,分别用20μl PBS(PBS组)、20μg STAg(抗原组)、20μg STAg+10μgCpG ODN(CpG佐剂组)、20μg STAg+1μg CT(CT佐剂组)、20μg STAg+1μg CT+10μg CpG ODN(联合佐剂组)滴鼻,间隔2周,免疫2次。末次免疫后第20 d颈椎脱臼处死小鼠,收集血清和肠冲洗液,ELISA法检测血清弓形虫特异性IgG和肠冲洗液IgA。分离脾淋巴细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测致敏脾淋巴细胞体外增殖活性。结果ELISA法测定PBS组、抗原组、CpG佐剂组、CT佐剂组及联合佐剂组小鼠血清IgGA值分别为0.025 6±0.012 1、0.054 2±0.024 4、0.109 4±0.007 5、0.110 1±0.009 1和0.124 6±0.013 7,肠冲洗液IgAA值分别为0.141 8±0.030 2、0.415 2±0.080 70、.526 9±0.075 40、.846 5±0.115 5和1.128 9±0.100 3,脾淋巴细胞刺激指数SI分别为1.159 0±0.275 5、1.364 0±0.349 8、1.582 0±0.375 3、1.928 0±0.278 9和2.371 0±0.646 9,差异均有统计学意义(P<0.01);联合佐剂组肠冲洗液IgA水平和脾淋巴细胞的SI值与CpG佐剂组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论STAg联合CpG ODN和/或CT鼻内免疫小鼠可有效诱导机体免疫反应,两种佐剂联合免疫的效果优于单一抗原或抗原联合单一佐剂。

自然养殖水体投喂CpG ODN和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗WSSV的免疫保护作用

用添加CpG寡聚核苷酸(CpG ODN)和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母(VP28-yl)的饵料投喂凡纳滨对虾,进行田间中试实验。投喂30 d后进行WSSV感染实验,评估其对凡纳滨对虾的免疫保护作用。投喂实验结束后,CpG ODN投喂组对虾的相对增重率达到(65.8±7.8)%(P<0.05),这暗示CpG ODN可能具有促生长作用。WSSV攻毒后,CpG ODN和VP28-yl投喂组对虾中WSSV拷贝数与对照组相比均显著降低(P<0.05),相对免疫保护率分别可达到26.7%和36.7%。在投喂结束和WSSV刺激后,CpG ODN组对虾中的呼吸爆发水平均显著升高(P<0.05)。而在VP28-yl投喂组,WSSV引起的细胞凋亡则显著受到抑制(P<0.05)。此外,WSSV刺激后,STAT基因在CpG ODN组和VP28-yl组对虾中的表达水平均显著上调(P<0.05),分别在第5天和第3天达到最大值,而对照组中则显著下调。研究结果表明,CpG ODN和VP28-yl增强了凡纳滨对虾抗病毒免疫力,对养殖对虾病毒性疫病的防控具有显著作用,可以作为免疫增强剂添加在饵料中,具有在养殖生产中推广使用的前景。

CpG ODN对非小细胞肺癌患者化疗后免疫功能的影响

目的测定非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者化疗前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)经胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸(cytosine-phosphorothioateguanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN)刺激后,CD4+CD25highTreg细胞及IFN-γI、L-12的变化,评价不同时间点CpG ODN的干预效果。方法选取NSCLC患者20例,分别抽取患者化疗前(d0)、化疗后第3天(d3)及第7天(d7)外周血3 mL,分离PBMC。每份PBMC均分为实验组及对照组,实验组给予CpG ODN 2006刺激,对照组不做干预。经培养48 h后收集细胞以流式细胞仪检测CD4+CD25highTreg细胞百分比,并取上清液检测INF-γ和IL-12(pg/mL)。结果实验组CD4+CD25highTreg细胞百分比在d0、d3、d7分别为(2.22±0.66)%,(2.09±0.44)%和(2.08±0.48)%,较对照组均有明显下降(P<0.05)。实验组IFN-γ在d0、d3、d7分别为(40.64±5.90)、(40.57±5.80)和(45.30±4.78)pg/mL,d0和d7时较对照组显著增加(P<0.05),d3时变化不明显(P>0.05)。实验组IL-12在d0、d3、d7分别为(41.02±6.65)、(39.41±7.41)和(45.75±12.46)pg/mL,d0和d3时较对照组明显增加(P<0.05),而d7时变化不明显(P>0.05)。动态观察对照组,d3时CD4+CD25highTreg细胞比例下降至最低点,而后逐渐回升;实验组在d7时CD4+CD25highTreg细胞比例仍持续下降;实验组的IFN-γ值呈现升高趋势,d7和d0、d3相比明显升高(P<0.05);而实验组IL-12值在化疗前后无明显变化,即化疗前d0与化疗后d3、d7比较,以及d3与d7比较,差异均不明显(P值均>0.05)。肺癌患者化疗次数及外周血淋巴细胞的数目与CpG ODN对CD4+CD25highTreg细胞比例及IFN-γI、L-12的分泌作用无显著相关性(P>0.05)。结论 CpG ODN能有效下调CD4+CD25highTreg细胞,刺激INF-γ的分泌,优化肺癌患者抗肿瘤的免疫微环境,有利于机体的抗肿瘤免疫;肺癌患者即使化疗后外周血淋巴细胞的数目明显减少,CpG ODN仍能下调CD4+CD25highTreg细胞和刺激INF-r的分泌,发挥抗肿瘤作用。

CpG ODN对Treg细胞及Th17细胞分化的影响

目的研究免疫佐剂CpG ODN对小鼠脾细胞中Treg细胞、Th17细胞分化的影响,为进一步的临床免疫治疗应用奠定基础。方法体外分离小鼠脾细胞后,加入抗CD3单抗及抗CD28单抗培养,并相应加入诱导Treg细胞分化的细胞因子TGF-β、IL-2或诱导Th17细胞分化的细胞因子TGF-β、IL-6、IL-23,培养24h后加入CpG1982、CpG1826继续培养48h,培养结束后收集细胞进行细胞内染色流式细胞术检测Treg/Th17细胞,利用实时定量PCR检测Foxp3、RORγt、IL-10、IL-17mRNA的水平,Western blot检测Foxp3、RORγt蛋白表达,ELISA检测脾细胞培养上清IL-10、IL-17水平。结果在细胞因子TGF-β、IL-2的诱导下,CD4+Foxp3+Treg细胞数量明显增多,核转录因子Foxp3 mRNA和蛋白水平均增高,且细胞培养上清中IL-10的水平也升高,在细胞因子诱导的同时加入CpG1826培养后CD4+Foxp3+Treg细胞数量明显减少,Foxp3水平降低,培养上清中IL-10的水平降低,差异具有统计学意义(均P<0.05);单独加入CpG1826以及在培养液中加入细胞因子TGF-β、IL-6、IL-23后,Th17细胞数量均明显增加,核转录因子RORγt水平升高,细胞培养上清中IL-17水平增加,与对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05),CpG1826联合细胞因子组则对Th17细胞分化具有更加明显的刺激效应(P<0.05)。结论免疫佐剂CpG1826具有抑制小鼠脾细胞中Treg细胞分化、促进Th17细胞分化的作用,从而发挥对Treg/Th17系统的调节功能。

CpG ODN佐剂促进HBsAg疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的探讨

目的 探讨cpG ODN对重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）诱导小鼠细胞免疫应答的影响。方法HBsAg和HBsAg＋CpG ODN分别肌肉注射免疫Balb／c小鼠后，从淋巴组织（脾和淋巴结）和非淋巴组织（肺）分离淋巴细胞，体外经HBsAg抗原刺激后，利用ELISA检测细胞培养液中IFN-γ的水平，再利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ^＋细胞的频率，分析IFN-7^＋细胞亚群。结果对照组和HBsAg免疫组IFN-γ产生的水平很低，当HBsAg加强免疫1～2次后，IFN-γ表达仍然没有明显升高；而CpG ODN＋HBsAg免疫1次或加强免疫后，CpG显著促进HBsAg诱导的IFN-γ产生。进一研究结果表明CpG促进HBsAg诱导淋巴器官和非淋巴器官内CD4^＋和CD8^＋T细胞IFN-γ的表达。结论CpG免疫佐剂不仅能诱导细胞免疫应答同时也诱导体液免疫应答，提示CpG ODN可以用于HBsAg预防和治疗性佐剂。

CpG ODN增强免疫力低下小鼠对乙肝疫苗的体液免疫应答

目的 探讨CpGODN对免疫力低下小鼠的体液免疫增强作用。方法 选用老年C57BL/ 6小鼠和免疫抑制模型小鼠 ,将重组HBsAg疫苗和CpGODN同时或单独肌注到小鼠体内 ,2周后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3周后摘除眼球取血 ,用ELISA方法检测抗HBsAgIgG抗体。 结果 免疫抑制模型中同时注射CpGODN和疫苗组产生的IgG抗体绝对量是单独注射疫苗组的 2倍 ;老年鼠组中 1 0 μg和2 0 μgCpGODN与疫苗同时注射组产生的IgG抗体绝对量分别是单独注射疫苗组的 3倍和 4倍。

新型CpG ODN对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的:探讨我室自行设计的CpG ODN(CpG BW001)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法:CpGBW001刺激人外周血单个核细胞(PBMC)48小时,用VSV病毒保护实验及ELISA法检测培养上清的病毒保护能力及其中的IFNα-含量。将上述CpG BW001刺激人PBMC的上清与HepG2.2.15细胞共孵育12天后收集培养上清,用放射免疫法检测该培养上清液中HBsAg及HBeAg的含量,用点杂交法检测HBV DNA的含量。结果:CpG BW001刺激人PBMC产生以IFNα-为主的抗病毒物质;CpG BW001刺激人PBMC的培养上清作用于HepG2.2.15细胞后,HepG2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的含量明显减少,且细胞内HBV DNA的含量也显著降低。结论:CpG BW001能通过刺激细胞产生抗病毒物质如IFNα-等,从而在体外抑制HBsAg和HBeAg的表达及HBV的复制。

细胞因子IL-27和CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组蛋白疫苗免疫效果的影响

目的研究细胞因子佐剂IL-27单独或与CpG2216佐剂联合使用对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将编码IL-27的质粒(以下简称IL-27)单独或与CpG2216佐剂作为联合佐剂与G1F/M2共免疫Balb/c小鼠3次,每次免疫10 d后取血,分离血清,用间接ELISA法测定3次免疫后的血清IgG抗体效价以及末次IgG1、IgG2a抗体效价。第3次免疫后2周处死小鼠,取脾细胞,用LDH法检测CTL活性、ELISPOT法检测分泌IL-4和IFN-γ的淋巴细胞水平、流式细胞仪检测CD4^+、CD8^+的效应记忆和中央记忆T细胞。结果 ELISA结果表明:除PBS组外,各组均诱导了高水平的IgG抗体无显著性差异(P<0.05),IgG2a、IgG1分别为Th1和Th2型抗体,IL-27+G1F/M2组、IL-27+CpG2216+G1F/M2组IgG2a和IgG1的比值明显高于其他组,说明IL-27作为佐剂对G1F/M2所诱导的体液免疫应答无增强作用但可以调节免疫应答的类型,使免疫应答更平衡;CTL杀伤实验显示:IL-27^+CpG2216+G1F/M2组的CTL杀伤活性显著高于其他各组(P<0.05);ELISPOT结果显示:IL-27^+CpG2216+G1F/M2组中分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著高于其他组分泌IFN-γ的淋巴细胞数量,且各组分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著高于同组分泌IL-4的淋巴细胞数量(P<0.05),即均诱导了Th1型优势应答;流式细胞仪检测结果说明IL-27+G1F/M2组和IL-27^+CpG2216+G1F/M2组均能诱导产生大量的CD44^+CD62L^+双阳性细胞。结论细胞因子佐剂IL-27和CpG2216佐剂联合使用可以增强吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答而且IL-27对Th1型优势应答具有调节作用。