CpG序列和猪白细胞介素6基因转染表达对猪囊尾蚴基因疫苗免疫影响的研究

以猪囊尾蚴VTS76抗原基因和质粒VPIL 6、pUCl8 CpG免疫接种小鼠 ,检测了小鼠的体液及细胞免疫反应。结果发现 ,VPIL 6或pUC CpG与VTS76共同免疫小鼠的特异性抗体滴度、IgG含量、淋巴细胞白细胞介素 2诱生活性、脾细胞增殖反应和血液免疫细胞数量显著高于VTS76免疫组和对照组。证明VPIL 6和CpG序列能显著增强动物对DNA疫苗的细胞和体液免疫反应 。

CpG序列及阳离子脂质体对猪带绦虫抗原基因免疫应答的影响

本实验将猪带绦虫抗原基因VTS76分别与pUC1 8质粒、重组pUC1 8 CpG质粒联合及阳离子脂质体包装后免疫小鼠。结果表明 :pUC1 8和 pUC1 8 CpG能显著提高免疫小鼠总IgG和特异性抗体水平 ,增加小鼠免疫细胞数量 ,增强淋巴细胞增殖活性及白细胞介素 2的诱生活性。其中 ,pUC1 8 CpG的免疫增强效果更显著。阳离子脂质体包裹具有减少质粒用量。

CpG免疫调节序列最新研究进展

细菌等非脊椎动物的 ＤＮＡ和人工合成的寡聚核苷酸（ＯＤＮ）中所包含的免疫刺激 ＣＰＧ序列（ＣｐＧ－Ｓ）被抗原呈递细胞（ＡＰＣ）摄入后；经由ｐＨ依赖的胞内体酸化，产生活性氧（ＲＯＳ）；然后分别活化转录因子 ＡＰ－１和 ＮＦ－ｋＢ，激活细胞因子等基因的表达，从而刺激机体产生免疫应答，包括刺激多种免疫活性细胞分泌细胞因子，使机体产生快速高水平的抗体应答及细胞免疫应答。能产生这种刺激作用的最适序列为 ＣｐＧ ５’端为两嘌呤， ３’端为两嘧啶，并且具有种属特异性。 ＣｐＧ ＤＮＡ的佐剂特性将在未来疫苗研究开发中起到重要作用。此外，在基因治疗设计中加入最新发现的免疫抑制ＣｐＧ序列（ＣｐＧ－Ｎ）则可抑制针对目的蛋白的免疫应答，从而加强目的基因的治疗效果。

壳聚糖基因载体增强CpG-ODN免疫活性研究

目的应用壳聚糖(CS)包载含CpG序列的寡脱氧核苷酸(ODN),制备CS CpG-ODN基因载体,并研究其免疫活性。方法采用复凝法制备CS Cp-ODN基因载体。24只小鼠随机分为4组,每组6只,包括对照组、CS组、CpG-ODN组和CS CpG-ODN组,均通过后大腿肌内注射进行免疫接种。用MTT法检测淋巴细胞增殖情况,ELISA方法检测血清中IgG、IL-2和IL-12水平,流式细胞仪检测外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群。结果免疫接种CS CpG-ODN能提高小鼠淋巴细胞增殖水平;血清中IL-2和IL-12的含量明显升高,能获得高水平的保护性IgG;同时外周血T细胞亚群分析显示,CS CpG-ODN能更有效上调CD4+T细胞百分比以及CD4+/CD8+比值。结论CS CpG-ODN基因载体能有效提高CpG-ODN免疫促进作用。

CpG ODN对卵清蛋白致敏的哮喘小鼠模型的免疫调节作用研究

[目的]研究寡核苷酸免疫刺激序列CpGODN(CpGOligodeoxyneucleotide)对卵清蛋白(OVA)致敏哮喘小鼠的免疫调节作用,探讨哮喘的非激素治疗方法。[方法]以OVA免疫BALB/c小鼠,致敏前和致敏阶段腹腔注射CpGODN ,分别用地塞米松和生理盐水作为激素治疗组和哮喘对照组。流式细胞仪检测各组哮喘小鼠的外周血T淋巴细胞亚群;ELISA法检测各组小鼠血清IL - 4 ,IFN -γ,Ig -E水平;HE染色观察各组哮喘小鼠肺组织病理变化。[结果]与哮喘对照组相比,CpG组能明显降低血清IL - 4水平,NS组:(10 6 .97±13.4 0 ) pg/mL ,CpG组:(87.6 9±13.2 5 )pg/mL ;降低血清Ig -E水平,NS组:(4.78±1.6 5 )IU/mL ,CpG组:(3.5 2±0 .2 3)IU/mL(P <0 .0 5 ) ;增加血清IFN -γ含量,NS组:(34.76±1.5 1) pg/mL ,CpG组:(49.93±9.18) pg/mL(P <0 .0 5 ) ;上调CD4 /CD8的比值,NS组:(3.5 3±0 .37) ,CpG组:(3.73±0 .5 5 ) (P <0 .0 5 ) ;CpG组和地塞米松组均能抑制肺组织中嗜酸细胞的浸润(P <0 .0 5 )。[结论]CpGODN能有效促进哮喘小鼠体内TH2反应向TH1反应,可作为哮喘的预防和治疗的非激素手段。

鸡IL-18基因的克隆与序列测定

根据Genbank发表的鸡IL-18基因序列,设计一对引物,提取鸡脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增和扩增产物的克隆、测序,获得了中国江西土鸡IL-18基因片段,其大小为597bp,与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18的基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。

miRNA对免疫和炎症反应的调节功能

发现microRNAs（miRNAs）是近年来的一个重要科学突破,使我们对基因调控有了新的认识。miRNAs广泛存在于从植物、线虫到人类的细胞中^[1]。成熟miRNA能够通过核酸序列互补与特定的目标mRNA分子结合,使之降解或抑制其翻译,从而影响蛋白质的合成,最终达到调控基因表达的目的。

日本血吸虫 (中国大陆株 ) Sj16基因真核表达载体的构建及序列分析(英文)

目的 为了进一步研究日本血吸虫 (中国大陆株 ) Sj16的免疫调节功能 ,丰富有关血吸虫免疫逃避知识。 方法 根据曼氏血吸虫 Sm16基因已知序列设计合成一对引物 ,用 PCR技术从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫 c DNA文库中扩增 Sj16基因 ;将 Sj16基因定向克隆入 pc DNA3,转化感受态 DH5α菌 ;用酶切、PCR扩增鉴定筛选得到的重组阳性克隆。以重组 pc DNA3- Sj16质粒为模板 ,用双脱氧链末端终止法测定 Sj16基因序列 ,应用软件辅助分析 Sj16序列及进行 Sj16与曼氏血吸虫的 Sm16同源性比较。 结果 从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫 c DNA文库中获取 Sj16基因 ,重组质粒中含有 Sj16基因 ,成功构建日本血吸虫 (中国大陆株 )Sj16基因真核表达重组质粒 pc DNA3- Sj16 ;Sj16基因开放读码框有 35 4碱基 ,编码 117氨基酸 ,N端 18个氨基酸可能为信号肽序列 ;Sj16与 Sm16有高度同源性 ,只存在一个氨基酸的差异。 结论 成功克隆了 Sj16基因的真核表达载体 ,并测定、分析了 Sj16基因序列 ,为深入研究 Sj16的免疫调节功能 ,丰富有关血吸虫免疫逃避知识打下基础。

BCG HSP65-人HER-2/neuT细胞表位融合蛋白基因的扩增及序列分析

目的 :获得卡介苗热休克蛋白 6 5 (BCGHSP6 5 )与人HER 2 /neuT细胞表位 (GP2 )构成的融合蛋白 (BCGHSP6 5 GP2 )基因 ,并对其进行测序。方法 :从卡介苗结核杆菌中提取其基因组DNA ,设计一对寡核苷酸引物 ,采用聚合酶链反应 (PCR)获得BCGHSP6 5基因 ,再设计一对寡核苷酸引物 ,再次PCR ,获得BCGHSP6 5 GP2 基因 ,DNA序列分析BCGHSP6 5 GP2 基因。结果 :本实验采用两轮PCR方法获得的基因片段长度为 170 0bp ,DNA序列分析确证为编码BCGHSP6 5 GP2 融合蛋白的序列。结论 :采用PCR获得BCGHSP6 5 GP2 基因序列是正确的 。

优化基因免疫治疗的新进展

基因免疫是疫苗研究的热点。近年来发展迅速 ,但仍有很多问题尚未解决 ,如何优化基因免疫 ,提高其免疫效率 ,是基因免疫的一项关键性技术 ,本文拟从基因免疫载体、抗原选择、免疫佐剂、基因转移靶组织及基因转移技术的角度对此作一综述。

猪白细胞介素-12的分子克隆与序列测定

为研究白细胞介素－１２在机体免疫应答中的作用，从猪外周血提取单个核细胞（ＰＢＭＣｓ），用含ＬＰＳ的培养基培养细胞，从培养２ ｈ和１２ ｈ的活化细胞中分别提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出编码猪ＩＬ－１２两个亚基的基因，其大小分别为７２０ ｂｐ（Ｐ３５）和１ ０４４ ｂｐ（Ｐ４０），将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，回收纯化，用ＳａｃＩ和ＳａｌＩ双酶切后，分别将其连接至ｐＵＣ１８质粒上，进行质粒ＰＣＲ和ＳａｃＩ、ＳａｌＩ双酶切鉴定后筛选阳性克隆，并进行序列测定和分析。序列分析表明Ｐ３５基因开放阅读框含有６６９个核苷酸，序列与人、小鼠和羊同源性分别为７９．２％，３７．６％ ，８６．１％，Ｐ４０基因开放阅读框含有９７５个核苷酸，与人和小鼠、羊基因序列的同源性分别为７９．５％，５３．１％，８４．３％。结果表明克隆到了猪白细胞介素－１２ Ｐ３５和Ｐ４０两个亚基的基因，得到的Ｐ３５基因序列与国外报道完全一致，Ｐ４０基因序列与发表的序列有４个碱基差异，提示Ｐ４０基因可能存在多态性。

寄生虫副肌球蛋白的分子免疫学研究进展

副肌球蛋白存在于无脊椎动物,由同源二聚体构成。副肌球蛋白具有多方面的生理作用,是一个重要的显性抗原,具有调节免疫反应的特性。近来,对副肌球蛋白的分子生物学特点和免疫学作用做了较广泛深入的研究。该文将从其分布,作用及分子特征,疫苗的研究,T、B淋巴细胞表位,参与免疫调节等研究进展进行了综述。

嗜酸乳杆菌基因组的研究进展

嗜酸乳杆菌是一种很常用的益生菌株之一,具有调节肠道菌群、抑制病原菌、免疫调节、降低血清胆固醇等多种益生功能,广泛应用在食品、医药和饲料等领域。2005年报道第一株嗜酸乳杆菌NCFM的全基因组序列,在基因组水平上揭示了该菌株的部分生理和代谢特征,加速重要功能基因的进一步挖掘,为该菌的筛选和应用打下基础。本文就嗜酸乳杆菌基因组的最新研究进展、重要功能基因和比较基因组进行了综述。

金川牦牛TGF-β1基因克隆及蛋白质结构分析

为了探讨金川牦牛天然免疫调节因子TGF-β1基因特点,试验根据Gen Bank公布的野牦牛序列设计引物,并运用Ex PASy、ABCpred、BIMAS等生物信息学软件对基因序列进行核酸和蛋白质结构分析。结果表明：克隆的金川牦牛TGF-β1基因片段长度为607 bp,开放阅读框为471 bp,可编码157个氨基酸,其中丙氨酸、脯氨酸的含量最多,分别达14.01%、12.10%。分子质量为16.324 87 ku,理论等电点为9.48,不稳定系数为63.90。二级结构以无规则卷曲为主（64.33%）。TGF-β1基因存在潜在的抗原表位,B细胞有77-92,99-114,121-136等17个表位区域,T淋巴细胞有2-10,19-27,68-76,126-134等20个表位区域。系统进化分析中,金川牦牛TGF-β1基因与野牦牛同源性为96.7%,亲缘关系最近。试验获得金川牦牛TGF-β1基因,在哺乳动物中具有较高的保守性。

DNA疫苗的佐剂研究综述

DNA 疫苗是新发展起来的一种疫苗,它有许多传统疫苗所没有的特点,但是其免疫原性较弱限制了应用,本文探讨了传统与新型分子免疫佐剂在提高 DNA 疫苗的免疫效果方面发生的作用,其中主要从细胞因子、趋化因子、CpG 序列三个方面来说明。

肿瘤微环境在肺癌免疫调节中的作用及临床意义

肺癌是我国高发的恶性肿瘤之一，严重威胁人类生命，尽管目前外科手术、放化疗等方法得到很大提高，但其预后依然不容乐观。癌症是一种以DNA基因序列突变以及调节组织稳定性、