含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究

目的 以肿瘤抗原P815AB抗原肽为模式抗原 ,研究CpG寡聚脱氧核苷酸 (CpGODN)对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用 [3H ] TdR掺入法研究CpGODN体外刺激小鼠脾细胞增殖效应 ,用ELISPOT和 [3H] TdR释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性CTL应答的效应。结果 ODN182 6在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖。经 4次免疫 ,在“肽 +ODN182 6 +IFA”组中 ,4/6的小鼠体内出现了特异性CTL应答 ;在“肽 +ODN182 6 +PBS”组 ,有 3只小鼠在完成 4次免疫前先后死亡 ,余 3只中有 1只体内也可检测到相应CTL反应 ;而对照“肽 +IFA”组 ,6只小鼠体内均未诱发出特异性CTL应答。结论 CpGODN对P815AB表位肽有较为理想的免疫佐剂效应 ,但疫苗构成形式对其免疫效果有着决定性的作用 ,“肽 +ODN182 6 +IFA”是本研究中最有效的疫苗形式 。

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制人膀胱癌细胞在裸鼠体内的生长

目的:观察不同剂量的CpG ODN 1668对裸鼠皮下接种人膀胱移行细胞癌T24细胞生长的抑制作用,并与卡介苗的作用进行比较。方法:通过皮下接种T24细胞,建立裸鼠皮下接种人膀胱癌细胞的动物模型。将裸鼠随机分为5组,(1)对照组;(2)BCG组;(3)小剂量CpG ODN 1668组;(4)中等剂量CpG ODN 1668组;(5)大剂量CpG ODN 1668组。自肿瘤细胞接种后第1天起给药,共4次(第1、8、15、22天),在肿瘤周围多点注射相应药物(早期给药);同样方式另设5组动物,自肿瘤细胞接种后第7天起(第7、14、21、28天)于肿瘤周围多点注射相应药物(延迟给药)。观察肿瘤体积和裸鼠的生存率。结果:早期给药时,在CpG ODN 1668各剂量组和BCG组,肿瘤生长均被抑制,裸鼠的生存期得到延长。中等剂量和大剂量CpG ODN 1668组对肿瘤细胞生长的抑制作用强于BCG组。延迟给药时,CpG ODN 1668各剂量组肿瘤体积和裸鼠的生存率,与对照组和BCG组的差异无显著统计学意义。结论:CpG ODN 1668的早期应用,可抑制人膀胱癌细胞T24在裸鼠体内的生长,并表现为剂量依赖性;其抗肿瘤效应是非T细胞依赖的。当加大使用剂量时,CpG ODN 1668对膀胱癌细胞生长的抑制作用强于BCG。而当肿瘤负荷较大时,CpG ODN 1668和BCG的延迟使用对膀胱肿瘤细胞在裸鼠体内的生长无抑制作用。

CpG寡聚脱氧核苷酸在肿瘤免疫治疗中的应用进展

CpG寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)具有激活机体免疫系统的作用。CpG ODN能够直接诱导浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)的活化和成熟,促进Th1型细胞因子的分泌和B细胞分化成浆细胞。CpG ODN作为肿瘤疫苗的佐剂已应用于多个临床试验中。单独应用CpG ODN具有抗肿瘤作用,联合其他抗肿瘤治疗(如单克隆抗体、化学治疗、放射治疗和细胞因子等)具有协同抗肿瘤作用。虽然在应用CpG ODN治疗ⅢB～Ⅳ期非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)的Ⅲ期临床试验中,与标准化疗方案相比没有延长患者的中位生存期并发生较严重的不良反应,但是在其他临床试验中CpG ODN具有明确的抗肿瘤作用。CpG ODN在抗肿瘤治疗中的有效性和安全性方面还需要进一步的临床试验证实。

含CpG基序的寡聚脱氧核糖核苷酸辅助乙肝疫苗对孕鼠和仔鼠的免疫效果

目的 观察不同剂量CpG 182 6联合乙肝疫苗注射孕鼠后 ,对孕鼠本身及其仔鼠的特异性免疫效果。方法 分别用不同剂量 (10、2 0、4 0 μg/只 )CpG 182 6作为乙肝疫苗佐剂辅助免疫孕鼠 ,ELISA方法检测孕鼠和仔鼠血清乙肝表面抗体 (HBsAb)水平 ,并观察仔鼠存活数量和生长发育指标 (体质量、身长、胎脑和胎仔体质量系数 )变化。结果 给孕鼠注射CpG 182 6 +乙肝疫苗或单纯乙肝疫苗后 ,孕鼠血清HBsAb水平总是高于仔鼠水平 (P <0 .0 1) ,但孕鼠与仔鼠血清HBsAb水平间无相关性存在 (r =0 .379 P >0 .0 5 ) ;CpG 182 6 +乙肝疫苗免疫孕鼠后 ,2 0 μg/只剂量组孕鼠和仔鼠血清HBsAb含量均高于 10、4 0 μg/只剂量组 ,单纯乙肝疫苗组及空白对照组 (P <0 .0 5 ) ,但仔鼠存活数量及体质量、身长、胎脑和胎仔体质量系数等生长发育指标间均无显著差异 (P均>0 .0 5 )。结论 CpG 182 6 (2 0 μg/只 )联合乙肝疫苗免疫孕鼠时 ,既能显著提高孕鼠及其仔鼠血清特异性免疫抗体水平 ,又不对仔鼠生长发育造成不良影响 ,是一种在妊娠期即可刺激免疫系统不成熟个体免疫活性的理想免疫佐剂。

局部应用CpG寡聚核苷酸联合4-1BB单克隆抗体治疗小鼠肝癌荷瘤的研究

目的探讨局部应用CpG寡聚核苷酸(CpG-ODN)联合4-1BB单克隆抗体对小鼠肝癌的疗效,并评价4-1BB单克隆抗体对CpG-ODN免疫治疗效果的影响。方法在BALB/c雄鼠四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,建立荷瘤小鼠模型,7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠,随机分成模型对照组、CpG组和CpG+4-1BB组,并在左下肢瘤内注射药物。选取同批正常小鼠作为正常对照组。记录小鼠生存情况,计算荷瘤体积、脏器指数,检测血清白细胞介素(IL)-12和干扰素(IFN)γ浓度以及脾脏CD8+T淋巴细胞比例。计量数据用方差分析,各组小鼠存活率采用Log-Rank检验分析。结果处死前模型对照组小鼠荷瘤持续增长,CpG组和CpG+4-1BB组荷瘤体积[(976.08±29.55)mm3、(47.25±0.93)mm3)]与模型组[(1 336.52±39.40)mm3]相比均减小(F = 5 329.273,P < 0.05);CpG+4-1BB组远处荷瘤体积[(611.83±113.02)mm3]与模型组和CpG组[(1 406.62±51.09)mm3、(1 380.01±51.44)mm3]相比减小(F = 247.160,P < 0.05),但CpG组与模型组无明显差异(P > 0.05)。模型组血清IL-12浓度[(23.90±2.33)pg/ml]、IFNγ浓度[(103.02±6.10)pg/ml]和脾脏CD8+T淋巴细胞比例(4.54%±0.62%)较正常组均减低(P值均< 0.05);CpG组和CpG+4-1BB组血清中IL-12浓度[(29.21±2.23)pg/ml、(37.04±1.49)pg/ml]、IFNγ浓度[(116.12±4.08)pg/ml、(138.65±1.72)pg/ml)、CD8+T淋巴细胞比例(6.65%±0.64%、12.73%±0.88%)均高于模型组(P值均< 0.05);CpG+4-1BB组高于CpG组(P < 0.05)。CpG+4-1BB组小鼠存活率均高于模型组和CpG组(χ2 = 25.544,P < 0.05),CpG组与模型组之间无明显差异(P > 0.05)。四组脏器指数无明显差异(P > 0.05)。结论4-1BB单克隆抗体联合CpG-ODN治疗可使肝癌荷瘤体积缩小,并可抑制远处荷瘤增长,明显延长小鼠存活时间。

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制肾癌细胞增殖及肿瘤生长的体内外实验研究

目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在体内外对肾癌细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度CpG ODN1826和non-CpG ODN1982(ODN1982)干预对体外培养人肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖的影响。24只BALB/c裸鼠皮下接种Caki-1细胞建立荷瘤裸鼠模型,4d后根据每周1次的治疗方式随机分为对照组(PBS)、ODN1982组(50μg ODN1982)、小剂量CpG ODN1826组(25μgCpG ODN1826)和大剂量CpG ODN1826组(50μgCpG ODN1826),每组6只。于建模后35d处死动物,比较各组荷瘤裸鼠的肿瘤体积、质量及肿瘤组织学改变;体外分离各组荷瘤裸鼠脾淋巴细胞,乳酸脱氢酶释放法检测不同靶标比例(脾淋巴细胞:Caki-1细胞或脾淋巴细胞:小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞)的荷瘤裸鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 ODN1982对Caki-1细胞的体外增殖活性无显著影响;500μg/mLCpG ODN1826干预可显著抑制Caki-1细胞增殖。至实验终止时点,小剂量和大剂量CpG ODN1826组荷瘤裸鼠的肿瘤体积显著小于ODN1982组和对照组(P<0.05);各组间肿瘤质量比较差异均具有统计学意义(P<0.05);组织学观察显示,小剂量和大剂量CpG ODN1826组肿瘤组织较多炎性细胞浸润。当靶标比例为50:1时,大剂量CpG ODN1826组裸鼠脾淋巴细胞对Caki-1细胞和YAC-1细胞的杀伤活性分别为(9.74±1.16)%和(79.65±5.23)%,显著高于对照组的(7.67±0.22)%和(10.12±3.03)%及ODN1982组的(7.66±0.93)%和(27.60±9.83)%(P<0.05)。结论 CpG ODN对体外肾癌细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤组织生长均具有明显抑制作用,其机制可能与CpG ODN增强荷瘤裸鼠的固有免疫应答有关。

CpG寡聚脱氧核苷酸对变应性联合气道疾病气道重塑的影响研究

背景激素是变应性联合气道疾病(ACAD)常用的治疗方法,但慢性ACAD出现气道重塑,可能影响其疗效,故有必要寻找与激素联合并有协同作用的新型免疫治疗。前期研究发现CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)抑制ACAD气道炎症,但对气道重塑的效果有待研究。目的探讨CpG-ODN对慢性ACAD小鼠模型气道重塑的影响。方法本研究时间为2016年4月-2018年3月。30只清洁级雌性BALB/c小鼠采用随机数字表法分为正常对照组(Control组)、ACAD组、变应性联合气道疾病CpG-ODN干预组(ACAD/CpG-ODN组)、变应性联合气道疾病布地奈德干预组(ACAD/BUD组)、变应性联合气道疾病CpG-ODN+BUD联合干预组(ACAD/CpG-ODN+BUD组)。实验动物腹腔卵清蛋白(OVA)或磷酸盐缓冲液(PBS)致敏,鼻腔OVA/PBS 3周激发,随之6周雾化气道激发。ACAD/CpG-ODN组、ACAD/BUD组和ACAD/CpG-ODN+BUD组分别给予CpG-ODN、BUD和CpG-ODN+BUD滴鼻,其他组给予PBS滴鼻。每次鼻腔或气道激发后10 min内,对小鼠抓鼻和喷嚏次数进行计数。HE和PAS染色观察小鼠鼻腔组织的病理特点。HE、AB-PAS和Masson’s染色观察小鼠肺组织病理变化,并行气道炎症评分。免疫组化检测肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),应用Image-Pro Plus图片分析软件定量评估,并进行症状评估。结果各组小鼠抓鼻次数和喷嚏次数比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中ACAD组抓鼻次数和喷嚏次数均多于Control组,ACAD/CpG-ODN组、ACAD/BUD组、ACAD/CpG-ODN+BUD组抓鼻次数和喷嚏次数均少于ACAD组(P<0.05)。HE和PAS染色显示,ACAD/CpG-ODN组和ACAD/BUD组鼻黏膜病理改变较ACAD组减轻,而ACAD/CpG-ODN+BUD组进一步减轻。HE、AB-PAS和Masson’s染色显示,ACAD/CpG-ODN组和ACAD/BUD组肺组织病理改变较ACAD组减轻,而ACAD/CpG-ODN+BUD组进一步减轻。各组气道炎症评分比较,差异有统计学意义(P<0.01);其中ACAD组气道炎症评分高于Control组,ACAD/CpG-ODN组、ACAD/BUD组、ACAD/CpG-ODN+BUD组气道炎症评分均低于ACAD组(P<0.05)。各组肺组织中TGF-β1和α-SMA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中ACAD组TGF-β1和α-SMA表达水平均高于Control组,ACAD/CpG-ODN组、ACAD/BUD组、ACAD/CpGODN+BUD组均低于ACAD组(P<0.05)。结论CpG-ODN、布地奈德抑制慢性ACAD模型鼻部炎症和支气管肺组织气道重塑,两者可能具有协同作用。

CpG寡聚脱氧核苷酸在灵长类动物中免疫调节活性的研究进展

包含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸 (ODN)具有类似于微生物DNA激活内在免疫系统的能力 ,可提高适应性免疫力而抑制传染性生物的早期传播。CpGODN在疫苗佐剂的设计以及哮喘、过敏、传染病和癌症的治疗中显示出良好的应用前景。由于CpG识别体系在进化中出现的种间差异 ,在啮齿类动物中表现出最强活性的CpGODN却无法有效地刺激灵长类动物产生免疫应答。已有大量证据表明CpGODN在小鼠中具有治疗活性 ,而其在灵长类动物中作用的研究仍需继续深入。现就作用于灵长类动物的CpGODN的分类、作用机制和其作为疫苗佐剂与免疫保护剂以及在癌症。

CpG寡聚脱氧核苷酸应用于变态反应性鼻炎的研究进展

近年来,变态反应性鼻炎发病率呈明显上升趋势.一些研究发现CpGDNA在变态反应性鼻炎治疗中具有其它传统治疗药物无可比拟的优势,虽然目前还处于动物模型及前期临床实验阶段,并且机制还不完全清楚,但越来越受到人们的重视.着重介绍了对目前人们对CpGDNA的认识进行了,并对其用于变态反应性鼻炎治疗的现状进行了综述.

CpG寡核苷酸联合Texo对小鼠结肠癌的治疗作用

目的肿瘤细胞分泌的外泌体(tumor-derived exosomes,Texo)是目前肿瘤免疫治疗领域的一个热点。文中主要观察小鼠结肠癌细胞CT-26分泌的Texo联合包含有未甲基化的CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对小鼠结肠癌细胞CT-26移植瘤的治疗作用。方法使用差速离心法分离和提取CT-26细胞分泌的Texo,紫外分光光度计进行蛋白定量,透射电镜观察Texo的形态。用Texo、CpG ODN1826、CpG ODN1826+Texo(联合组)和等渗盐水(对照组)免疫BALB/c小鼠,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定T细胞对CT-26细胞的体外杀伤活性。建立CT-26小鼠结肠癌皮下移植瘤模型,1周后皮下注射Texo、CpG ODN1826、CpG ODN1826+Texo以及等渗盐水,观察它们对皮下移植瘤生长的抑制作用。结果CT-26细胞分泌的Texo为直径30～100 nm的膜囊泡。CpG ODN1826+Texo联合免疫小鼠的T细胞体外对CT-26细胞的杀伤作用与单药组和对照组相比均明显增强(P<0.05)。动物实验表明,Texo和CpG单药组的抑瘤作用与对照组相比有明显差异(P<0.05),而联合组能更显著地抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论与CpG ODN和Texo单药相比,二者联合用药能有效的抑制小鼠结肠癌皮下移植瘤的生长。

局部应用Cp G寡聚脱氧核苷酸联合OX40单抗治疗肝细胞癌小鼠模型的效果分析

目的探讨局部应用CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合OX40单抗方案对肝细胞癌的疗效,以及对远处同源肿瘤的治疗效果。方法在BALB/c雄性小鼠四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,建立荷瘤模型,7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠,随机分成模型对照组、CpG组、CpG+OX40组,每组10只,并在左下肢瘤内注射药物。选取10只同批正常小鼠作为正常对照组。计算荷瘤体积,ELISA法检测血清IL-12和IFNγ浓度,流式细胞术检测脾脏CD8^+T淋巴细胞比例,比较3组小鼠治疗后的生存情况。计量资料多组间比较采用重复测量设计资料的方差分析和单因素方差分析,进一步两两组间比较采用LSD-t检验;采用log-rank检验分析3组小鼠(不包含正常组)生存率,并绘制生存曲线。结果给予治疗后,模型对照组荷瘤呈进行性增长,血清IL-12和IFNγ水平、脾脏CD8^+T淋巴细胞比例较正常对照组均减低(P值均<0.05)。与模型对照组相比,CpG组和CpG+OX40组干预荷瘤体积均缩小(P值均<0.05);CpG+OX40组远处荷瘤体积比CpG组和模型对照组增长减慢(P值均<0.05),但CpG组远处荷瘤体积与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组相比,两实验组血清中IL-12和IFNγ水平及脾脏CD8^+T淋巴细胞比例均升高(P值均<0.05),且CpG+OX40组高于CpG组(P值均<0.05)。CpG+OX40组小鼠生存率均高于模型对照组和CpG组(P值均<0.05),CpG组与模型对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OX40单抗联合CpG-ODN可使治疗处肝脏肿瘤缩小,并有效减缓远处肿瘤增长,延长小鼠生存时间。

B型CpG寡聚脱氧核苷酸在细菌性疫苗中的研究进展

CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligonucleotide,CpG ODN)是由人工合成的含有非甲基化CpG的ODN,在疾病预防及临床治疗领域具有广阔的应用前景。其中B型CpG ODN因具有强免疫刺激作用等特点被广泛用于疫苗研究中,且部分基序已进入临床试验阶段。随着临床治疗中的细菌耐药性问题日益严重,以B型CpG ODN为佐剂开展细菌性疫苗研发成为研究热点。本文对现有的B型CpG ODN 1826、2006、2007和1668等基序在细菌性疫苗中的研究现状及相关研究进展作一综述,以期为后续细菌性疫苗的开发及应用提供参考。

CpG寡聚脱氧核苷酸增强树突状细胞疫苗诱导的特异性抗前列腺癌作用

目的观察CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）对截短的人前列腺特异性膜抗原（tPSMA）基因修饰的树突状细胞（DCs）诱导的抗前列腺癌效应。方法利用复制缺陷性腺病毒AdEasy-1系统，通过基因重组技术构建Ad—tPSMA及Ad—eGFP。将Ad-tPSMA和Ad．eGFP感染鼠源性DCs，用含10μg／L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素（IL）-4和含10％胎牛血清（FCS）的RPMI1640培养基诱导培养6d后，然后再添加1mg／L的CpG—ODN体外培养1d，最后添加1mg／L的脂多糖（LPS）继续培养1d，使其成熟。流式细胞仪检测DCs细胞表型，CCK-8法检测混合淋巴细胞反应T细胞增殖能力，酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测T细胞分泌细胞因子[IL-2、干扰素（INF）-γ]的影响，CCK-8试剂检测T细胞特性杀伤靶细胞活性。结果CpG．ODN促进Ad—tPSMA感染的DCs（CpG／DCs-Ad—tPSMA）高表达MHCII（83．8±3．7）％、CD80（79．8±5．6）％和CD86（78．3±2．8）％，且刺激同种异体T细胞增殖能力明显高于DCs—Ad—tPSMA组、DCs—Ad—eGFP组和未转染的DCs组（P〈0．05）；培养上清中细胞因子IL-2（179．64±2．72）ng／L和INF．1（1581．75±28．61）ng／L，表达水平均明显高于DCs—Ad—tPSMA组、DCs．Ad．eGFP组和未转染的DCs组（P〈0．05）；CpG／DCs—Ad—tPSMA组诱导RM-1-tPSMA细胞特异性杀伤率为（55．3±1．2）％，明显高于DCs—Ad—tPSMA组（40．7±1．4）％、DCs—Ad—eGFP组（12．7±1．2）％和未转染的DCs组（10．8±1．7）％（P〈0．05）。结论CpG—ODN能增强PSMA基因修饰的DCs疫苗诱导的特异性抗前列腺癌效应。

含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸2395对鼠巨细胞病毒肝炎新生小鼠的治疗作用

目的 研究含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸2395（CpG ODN2395）对鼠巨细胞病毒（MCMV）肝炎新生小鼠的治疗作用及相关机制.方法 SPF级BALB/c新生小鼠,按窝随机分为对照组、病毒组和治疗组.对照组：腹腔注射9 g/L盐水20×10-6L隔日1次;病毒组：腹腔注射MCMV（病毒致半数细胞感染量TCID50=108.31/L）20×10-6L1次,从接种MCMV当日起隔日腹腔注射9 g/L盐水20×10-6L;CpG治疗组：腹腔注射MCMV（TCID50=108.31/L） 20×10-6L1次,从接种MCMV当日起隔日腹腔注射CpG ODN2395 20 mg/kg.观测小鼠的生长发育情况.HE染色观察肝脏病理,酶联免疫吸附试验检测小鼠血清ALT、IFN-α,PCR法检测肝脏MCMV DNA,反转录（RT）-PCR法检测肝脏IFN-α mRNA,Wester blot法检测肝脏的Toll样受体9（TLR9）和衔接蛋白-髓样分化标志物88 （MyD88）的表达水平.应用SPSS 16.0软件进行分析.结果 1.病毒组小鼠生长发育落后,体质量低于对照组和治疗组,7d、14 d时差异有统计学意义（F=18.919、25.543,P均＜0.05）;治疗组发育介于对照组和病毒组之间,体质量均低于对照组,在7d时差异有统计学意义（t=3.187,P ＜0.05）.2.病毒组小鼠血清ALT高于对照组和治疗组,治疗组血清ALT高于对照组,差异均有统计学意义（F=11.407、11.791、154.565,P均＜0.05）.3.肝组织病理改变：病毒组肝组织病变活动性积分（HAI）值在第3天达高峰,以后逐渐下降;治疗组肝组织HAI均值也在第3天达高峰,但肝损害明显轻于病毒组,以后肝病变逐渐减轻,在第7天和第14天时HAI均值都显著低于病毒组.4.病毒组和治疗组小鼠3d、7d和14 d时肝脏MCMV DNAPCR检测阳性,3个时间点治疗组MCMV DNA负荷量均低于病毒组.5.病毒组和治疗组的3d时血清IFN-α达高峰,7d、14 d时渐下降;治疗组的血清IFN-α高于病毒组和对照组.6.病毒组和治疗组肝脏IFN-α mRNA表达水平在3d时增加,7d时达高峰,14 d时下降,3个时间点表达水平差异有统计学意义.治疗组IFN-αmRNA表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.7.治疗组肝脏TLR9表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.治疗组肝脏MyD88表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.结论 CpGODN2395可能提高TLR9的表达水平,通过MyD88依赖途径激活IFN-α的分泌,抑制MCMV的复制,减轻新生小鼠MCMV肝炎肝功能损害,改善肝脏病变和降低肝脏病毒负荷量具有抗MCMV的活性作用.

CpG 684-乙肝疫苗食蟹猴重复免疫安全性评价

目的对食蟹猴重复给予含CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)佐剂的乙型肝炎病毒疫苗,考察该疫苗的非临床安全性,为临床设计人用剂量及监测临床不良反应提供参考依据。方法 30只食蟹猴随机分为3组:溶媒对照组、CpG 684-乙肝疫苗50μg和500μg[含50μg或500μg CpG 684+10μg乙型肝炎表面抗原(HBsAg)]组,每组雌雄各半。在第0,2,4和6周各im免疫1次,试验期间观察食蟹猴的症状和注射部位刺激性,测定体质量、摄食量、体温和心电图,进行血液学、血清生化检测、血清中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、抗核抗体、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)水平检测;末次免疫后3 d和4周分别对每组部分食蟹猴进行剖检,脏器称重,并采集组织样本进行组织病理学检查。结果各组食蟹猴未见异常症状、注射部位肉眼观察未见异常,CpG 500μg组雌性食蟹猴外周血单核细胞数量增加(P<0.01)。各疫苗组均可诱导食蟹猴产生一定水平的HBsAb。食蟹猴大体病理学检查未见与疫苗相关的异常变化。组织病理学检查发现,注射部位肌束间发生轻至中度炎症反应,免疫结束4周有部分恢复,未见其他与给予疫苗相关的组织病理学改变。其他检测指标均未见异常。结论 CpG 684-乙肝疫苗在给定剂量下多次免疫食蟹猴具有较好的安全性。

趋化因子SLC和免疫佐剂CpG-ODN联合应用对小鼠移植黑素瘤的疗效

目的:探讨次级淋巴组织趋化因子(seccondary lymphoid tissue chemokine,SLC)和CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)联合应用对小鼠移植黑素瘤的治疗效果及其可能机制。方法:制备SLC-Fc融合蛋白,体外检测SLC-Fc对小鼠淋巴细胞的趋化效应。建立小鼠黑素瘤移植模型,随机分生理盐水对照组、CpG-ODN组、SLC-Fc组以及SLC-Fc+CpG-ODN组共4组。观察治疗后各组小鼠肿瘤的生长情况,流式细胞术检测移植瘤组织中淋巴细胞的种类和浸润情况。结果:成功制备SLC-Fc蛋白,SLC-Fc对小鼠淋巴细胞具有剂量依赖性(0.03、0.3和3μg/L)趋化作用。瘤内注射SLC-Fc和(或)CpG-ODN明显抑制肿瘤的生长,联合治疗组瘤体明显小于对照组(P<0.01),并且小鼠存活时间也明显延长。联合治疗组瘤体内CD4+、CD8+T淋巴细胞和CD11c+树突状细胞较对照组显著增多(P<0.05,P<0.01),并且其肿瘤引流淋巴结也明显增大。结论:SLC和CpG-ODN联合应用对小鼠移植黑素瘤有抑制作用,其机制与趋化CD4+T、CD8+T细胞和促进DCs增殖有关。

新CpG寡聚脱氧核苷酸体内抗肿瘤与增强免疫活性研究

目的:探讨新设计CpG寡聚脱氧核苷酸(ODN)在小鼠体内的抗肿瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:建立C57BL/6小鼠腹腔、皮下荷黑素瘤肿瘤模型,腹腔注射CpGODN,观察荷瘤鼠生存时间、肿瘤生长曲线,计算抑瘤率。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白细胞介素(IL)12和免疫球蛋白E(IgE)含量;3H-TDR掺入法检测脾脏B细胞、T细胞增殖活性;51Cr释放法检测NK细胞杀伤活性;中性红法检测腹腔巨噬细胞吞噬功能。结果:CpG10,CpG11能明显延长腹腔接种肿瘤小鼠的生存时间,与阳性对照CPG1826相比P<0.01;二者平均抑瘤率(皮下荷瘤鼠)分别为(55.2±2.3)%与(40.7±1.7)%,显著高于CpG1826[抑瘤率(17.8±7.6)%](P<0.05,P<0.01)。CpG10/CpG11可促使荷瘤小鼠血清IL-12含量显著升高(P<0.01),IgE含量显著下降(P<0.01);明显刺激B细胞、T细胞增殖能力以及NK细胞的杀伤活性(P<0.01),对腹腔巨噬细胞的吞噬功能有显著提高(P<0.01)。CpGl0免疫增强活性较CPGl826更强(P<0.05)。结论:CpGODN能激活荷瘤鼠抗肿瘤免疫反应,从而抑制小鼠黑素瘤的生长,新结构寡核苷酸的CpG10呈现优于阳性对照的良好抗肿瘤免疫效应。

CpG寡聚脱氧核苷酸佐剂对狂犬病疫苗免疫效果的影响

目的探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对狂犬病疫苗(rabies vaccine,RV)免疫效果的影响。方法以市售狂犬病疫苗为抗原,分别以低、中、高剂量的CpG ODN(1.25、5、20μg/剂)及其与氢氧化铝[(Al(OH)_3]联合的复合物作为疫苗佐剂,按Essen程序经腿部肌肉免疫BALB/c小鼠。免疫前2 d及首次免疫后分别于第6、8、10、14、35和42天采血,分离血清,通过快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测血清中抗狂犬病病毒中和抗体效价;并经ELISPOT法分析首次免疫第6和14天小鼠脾细胞分泌IFNγ的情况。结果低、中剂量的CpG ODN及其与Al(OH)_3联合使用均可使小鼠在首次免疫后第8天产生具有保护水平的中和抗体,第10天阳转率均达100%;在首次免疫后第35及42天,小鼠产生抗狂犬病病毒中和抗体水平均明显升高(P<0.05);在首次免疫后第6及14天,低、中剂量的CpG ODN可明显提高小鼠脾细胞的IFNγ分泌水平(P<0.05)。结论 CpG ODN对RV具有免疫增效作用,可能成为一种新型的RV佐剂。

CpG ODN对小鼠哮喘模型气道高反应性及炎症影响的研究

目的探讨免疫刺激序列CpG寡聚脱氧核苷酸（ODN）对小鼠哮喘模型气道高反应性（AHR）及炎症过程的影响。方法雌性C57BL／6J小鼠30只，随机分为正常对照组（A组）、模型组（B组）、CpGODN预防组（C组）、CpGODN治疗组（D组）及布地奈德治疗组（E组），建立小鼠哮喘模型。采用有创体积描记法对小鼠进行肺功能及AHR检测；采集血、肺组织及支气管肺泡灌洗液（BALF）标本，对BALF行细胞总数计数及嗜酸粒细胞（EOS）绝对值计数，ELISA法测定血清和BALF中细胞因子IL一4、IFN—γ水平。结果B组BALF中细胞总数、EOS绝对值计数和EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均显著高于A组（均P〈001），C、D、E组均显著低于B组（均P〈0．01），但仍显著高于A组（P〈0．05或0．01）。B组气道阻力增加幅度（Raw％）和肺顺应性下降幅度（Cdyn％）均显著高于A组（P〈0．01）；C、D、E组较B组显著降低（均P〈0．01）；C、D、E组肺组织炎症程度改变不一，明显比B组减轻。B组血清和BALF中IL-4的水平显著高于A组（P〈0．01），而BALF中IFN—γ的水平显著低于A组（P〈0．01）。结论CpGODN在致敏阶段及致敏后均能明显改善哮喘肺组织炎症，降低BALF中细胞总数及EOS％；降低AHR；调节Th1/Th2细胞因子的平衡。致敏后CpGODN干预优于致敏阶段的干预。