利用小鼠模型评价含有5'-GTCGTT-3'特征序列的人CpG寡脱氧核苷酸的免疫刺激活性

为了寻找合适的动物模型来评价人CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)的活性 ,研究了CpG2 0 0 6等含有 5 ' GTCGTT 3'特征序列的人CpG ODN对小鼠的免疫刺激活性。在体外它们能够促进小鼠脾淋巴细胞转化 ,促进B细胞分泌IgM ,但不能诱生高水平的IFN γ。研究了CpG2 0 0 6等序列在体内作为疫苗佐剂对HBsAg免疫效果的影响 ,发现 :(1)人CpG ODN能够明显提高抗 HBs抗体水平 ,并逆转Al(OH) 3 对Thl类免疫应答的抑制 ;(2 )初免时以CpG2 0 0 6为佐剂可以使免疫应答“锁定”在Thl类免疫应答 ,而加强免疫时以CpG2 0 0 6为佐剂可以在一定程度上逆转初免时Al(OH) 3 诱生的Th2类免疫应答 ;(3)CpG2 0 0 6联合Al(OH) 3 作为佐剂的单剂量疫苗的免疫效果强于两剂量以Al(OH) 3 为佐剂的常规疫苗。上述结果表明 :小鼠可以作为动物模型用于含有 5 ' GTCGTT 3'特征序列的人CpG ODN免疫效果的研究。

体外筛选对鸡具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸

分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对SPF鸡全血 ,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞 ,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激 ,用3 H TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下的转化效果 ,从而建立了适用于大批量筛选对鸡具有免疫刺激活性CpGODN的淋巴细胞转化方法。进一步用该方法筛选自行设计合成的 38条ODN。结果表明 ,用低速离心法分离的鸡PBMC ,在细胞含量为10 7mL-1、 37℃、 5 %CO2 条件下 ,经CpGODN刺激 6 4～ 6 6h后 ,可以得到稳定的高效转化 ;不含CpG模体的ODN不具有免疫刺激活性 ;CpGODN 10、 11和 14具有最佳的免疫刺激活性 ,刺激指数大于 10。

CpG寡脱氧核苷酸增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答(英文)

目的 :探讨CpG寡脱氧核苷酸 (ODN)增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答效果。方法 :选用环磷酰胺 (CTX)所致免疫抑制模型小鼠 ,以乙肝疫苗和 2 0 μgCpGODN联合或单独左胫前肌肌注免疫C5 7BL/6小鼠。 2wk后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3wk后摘除眼球取血 ,用ELISA法检测抗 HBsIgG抗体和IL 12的水平。同时 ,无菌取脾脏做HE染色 ,观察脾脏淋巴细胞的数量和细胞核的变化。结果 :CpGODN与疫苗联合注射组产生的绝对抗体量比单独注射疫苗组提高 1倍 ;注射组产生IL 12的水平较单独注射疫苗组也有明显升高。光镜下各组脾脏淋巴细胞的变化如下 :正常对照组脾脏可见大量的淋巴细胞 ;与正常对照组相比较 ,CTX组的淋巴细胞明显稀少 ;而CTX加CpG组的淋巴细胞数明显增多 ,细胞核也明显增大。结论

CpG基序的寡脱氧核苷酸对人轮状病毒乳鼠腹泻模型的保护作用

目的:探讨含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)干预对人轮状病毒(human rotavirus,HRV)感染乳鼠的保护作用机制。方法:64只ICR乳鼠随母鼠按窝随机均分为4组:正常对照组、HRV感染组、CpG ODN预处理组、CpG ODN治疗组。观察各组乳鼠的治疗反应和排毒情况;免疫组化法检测小肠组织Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)、IFN-γ的表达。结果:HRV感染组乳鼠的腹泻天数、排毒时间及重型腹泻发病率均高于CpG ODN预处理组和CpGODN治疗组(P<0.05);CpG ODN预处理组、CpG ODN治疗组TLR9、IFN-γ表达水平明显高于正常对照组和HRV感染组(P<0.01),并且两者存在正相关(P<0.05)。结论:CpG ODN预处理和治疗都能提高HRV感染乳鼠小肠组织TLR9、IFN-γ的表达,对HRV感染乳鼠有保护作用。

K型和D型CpG寡脱氧核苷酸对猪外周血单个核细胞免疫刺激活性的比较研究

目的:比较K、D两型CpG寡脱氧核苷酸(CpG 0DN)对猪外周血单个核细胞(PBMC)免疫刺激活性的差异.方法:用人工合成的@K型和D型两类CpG 0DN和不含CpG基元的对照0DN D48分别刺激已分离的猪PBMC,3H-TdR掺入法测定每分闪烁次数(cpm)值,计算刺激指数(SI).双抗体夹心ELISA法测定活化细胞上清中IFN-γ和IL-2表达水平.结果:D和K型CpGODN对猪PBMC增殖均具有较强刺激作用,K型的增殖效应高于D型.含'GTCGTT'基元的2006作用尤为显著,但不能有效刺激猪PBMC分泌IFN-γ和IL-2.D型刺激增殖效应低于K型,但能有效地促进猪PBMC分泌IFN-γ和IL-2.结论:K型和D型CpG 0DN在刺激猪PBMC增殖及其分泌IFN-γ、IL-2的水平有所不同.

TLR9在CpG寡脱氧核苷酸所致种属特异性免疫效应中的意义

目的:探讨TLR9在CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)种属特异性免疫效应中的意义。方法:CpG-ODN体外刺激人、猕猴、小鼠外周血单个核细胞(PBMC),ELISA测培养液IFN-α含量;RT-PCR检测PBMC中TLR9的表达水平。结果:CpG-ODN2216有效诱导人PBMC分泌IFN-α,而对猕猴和小鼠却无明显的免疫刺激活性;TLR9在人PBMC中均有表达,并且在CpG-ODN介导激活的人PBMC中表达上调;TLR9在猕猴PBMC中不表达。结论:TLR9是构成CpG-ODN种属特异性的重要分子基础。

CpG寡脱氧核苷酸联合IL-2刺激慢性淋巴细胞白血病细胞的细胞遗传学研究

本研究探讨磷酸胞苷酰寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)和白介素-2(IL-2)联合刺激培养慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞的遗传学特征。对115例CLL患者的外周血(或骨髓)标本,应用CpG-ODN DSP30联合IL-2刺激培养CLL细胞72小时,常规收获细胞制备染色体并进行R显带分析,探讨CLL的染色体核型特征。结果表明:115例CLL患者中,染色体分析成功率(可分析分裂相≥20个)为74.8%,异常核型检出率为58.1%。检测出一种染色体异常21例(24.4%),2种染色体异常6例(7.0%),复杂核型23例(26.7%),其中高度复杂核型9例(10.5%)。在86例患者中共检出102种163个异常,其中数目异常116个(71.2%),结构异常47个(28.8%),最常见的染色体数目异常是+12(14.0%),结构异常是15q+(5.8%)。结论:大多数CLL患者具有细胞遗传学异常,其中染色体数目异常明显多于结构异常。采用DSP30联合IL-2可以有效的增加CLL细胞的分裂相,提高CLL细胞染色体异常检出率。

CpG寡脱氧核苷酸的免疫刺激特性及应用研究进展

CpG基序是指含有非甲基化的胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)二核苷酸为核心序列的基序为5′-R-D-CpG-Y-Y-3′的DNA或寡脱氧核苷酸序列,是DNA具有免疫刺激活性的结构基础。随着对CpG特性研究的不断深入,CpG寡脱氧核苷酸在激活先天性免疫、作为疫苗佐剂、对变态反应进行免疫治疗、抗肿瘤应用及基因治疗等方面均显示出较广阔的应用前景。现就CpG寡脱氧核苷酸的免疫激活作用、细胞识别及结构特征、治疗疾病方面的应用及毒理作用加以探讨。

长链CpG寡脱氧核苷酸DNA重组质粒对禽流感灭活疫苗免疫应答的影响

为明确导入长链CpG寡脱氧核苷酸3个DNA重组质粒对禽流感H5亚型灭活疫苗的免疫应答的影响,将21日龄试验雏鸡随机分为6组,即健康对照组(A组)、疫苗对照组(B组)、空载体对照组(C组)、pUC26免疫促进组(D组)、pUC30免疫促进组(E组)及pUC44免疫促进组(F组),对6组雏鸡在首免后1～8周(WPI)检测其HI抗体水平并在1、4及8WPI测定脾脏、法氏囊及胸腺免疫器官指数。研究结果表明:在2WPI,D(P<0.01)、F(P<0.01)及E组(P<0.05)HI抗体水平极显著或显著高于C组;在3WPI,F组HI抗体水平分别显著高于B(P<0.05)、C(P<0.05)及E组(P<0.05);在5WPI,F(P<0.01)和D(P<0.05)组HI抗体水平极显著或显著高于C组;在6WPI,F组HI抗体水平显著高于C组(P<0.05);在8WPI,F组HI抗体水平极显著高于B(P<0.01)或C组(P<0.01)。在4WPI,A组胸腺指数极显著或显著高于C(P<0.05)及D组(P<0.01),E组胸腺指数显著高于D组(P<0.05);在8WPI,E组脾脏指数显著高于A组(P<0.05)。

含CpG寡脱氧核苷酸对小鼠肝癌的生长抑制作用及造血功能的影响

目的 观察含CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对种植小鼠肝癌 (hepatoma 2 2 ,H2 2 )的生长抑制作用及对荷瘤小鼠造血功能的影响。方法 右股皮下接种H2 2 细胞后的BALB/C小鼠 ,随机分为 7组 ,包括生理盐水组、非CpGODN组、CpGODN组、5 氟尿嘧啶 (5 FU)组、白细胞介素 2 (IL 2 )组、CpGODN +5 FU组和IL 2 +5 FU组。皮下注射给药 ,给药期间鼠尾静脉采血观察骨髓抑制情况。用药 12天 ,于最后一次用药 2 4h后颈椎脱臼处死小鼠 ,剥离肿瘤 ,测量大小和称重。结果 单用CpGODN、CpGODN +5 FU、5 FU、IL 2 +5 FU的抑瘤率为 4 2 75 %、5 6 0 2 %、6 3 98%、5 7 91% (P <0 0 1) ,后两组不良反应明显 ,有显著骨髓抑制作用。结论 CpGODN对移植小鼠肝癌生长具有抑制作用 ,并能缓解化疗引起的骨髓抑制状态。

CpG寡脱氧核苷酸对外周血单个核细胞功能的影响：1型糖尿病患者与健康者对照

背景:有研究表明CpG寡脱氧核苷酸可增强外周血单个核细胞的功能,但对1型糖尿病患者的影响至今少有报道。目的:观察CpG寡脱氧核苷酸对1型糖尿患者患者与健康志愿者外周血单个核细胞γ干扰素、白细胞介素12,10表达的影响。方法:将1型糖尿病患者与健康志愿者的外周血单个核细胞根据刺激物不同分为空白对照组、CpG寡脱氧核苷酸组。用RT-PCR法检测外周血单个核细胞γ干扰素、白细胞介素12mRNA和白细胞介素10mRNA的表达。结果与结论:1型糖尿患者γ干扰素和白细胞介素12mRNA的表达明显低于健康志愿者(P<0.01)。1型糖尿患者与健康志愿者外周血单个核细胞经CpG寡脱氧核苷酸组刺激后,γ干扰素和白细胞介素12mRNA的表达增高(P<0.01),白细胞介素10mRNA的表达无差异(P>0.05)。结果提示,CpG寡脱氧核苷酸可促进1型糖尿患者外周血单个核细胞表达γ干扰素和白细胞介素12。

CpG寡脱氧核苷酸佐剂研究进展

佐剂是先于抗原或与抗原同时应用、能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答、增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型,而本身并无抗原性的物质。阐述了CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)的作用特点、作用效果和应用等,提出了其发展前景,为新型佐剂的应用提供了理论基础。

含未甲基化CpG寡脱氧核苷酸对人外周血树突状细胞抗肿瘤作用的影响

目的 :研究含未甲基化CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对人外周血树突状细胞 (dendriticcells ,DC)分化、成熟及其抗肿瘤作用的影响。方法 :分离正常人外周血DC ,透射电镜观察CpGODN刺激组和未刺激组DC的超微结构 ,流式细胞仪分析其表面HLA DR、CD86的表达 ,MTT法检测其对同种异体混合淋巴细胞反应 (mixed lymphocytereactor ,MLR)中T细胞增殖的影响及调节T细胞杀伤肿瘤的能力。结果 :与未刺激组相比 ,CpGODN刺激组DC表面突起细、长且规则 ,粗面内质网增多 ,空泡减少甚至消失 ;同时DC表面HLA DR、CD86的表达上调 ,能明显促进MLR中T细胞的增殖 ,增强DC调节T细胞杀伤肿瘤活性。结论 :CpGODN可诱导人外周血DC分化成熟 。

CpG寡脱氧核苷酸序列的设计与筛选

目的:根据CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)的设计原则,设计和筛选对新生儿脐血单个核细胞免疫刺激作用较强的CpGODN;从中探求CpGODN的结构与免疫刺激活性之间的关系。方法:根据目前有关CpGODN免疫刺激活性的研究资料,设计合成15条不同结构特点的硫代及非硫代修饰的CpGODN,MTT法检测CpGODN对脐血中单个核细胞的刺激作用,分别筛选出作用较强的CpGODN,然后以CpG2006和T8为阳性对照,无关序列CpG17为阴性对照,再次比较这些CpGODN对单个核细胞的刺激增殖作用。结果:设计的2条CpGODN吸光度A值(CpG1:0 280±0 0612;CpG6:0 277±0 0562)高于T8(0 241±0 0438),而与CpG2006(0 283±0 0794)相当。结论:用MTT法筛选出了2条对新生儿免疫作用较强的CpGODN;CpGODN的结构与其免疫活性密切相关,这些关系特点利于指导CpGODN的设计。

应用含CpG基序的寡脱氧核苷酸增强HBsAg诱导健康小鼠抗-HBs产生的实验研究

目的探讨人工合成的含CpG基序的寡脱氧核酸(ODN)作为佐剂,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)诱导普通小鼠产生体液免疫应答的影响。方法以血源HBsAg为接种疫苗,人工合成含CpG基序的硫代磷酸寡脱氧核苷酸作为佐剂,以BALB/e小鼠作为实验动物进行免疫接种;采用ELISA方法检测抗HBs,判断免疫小鼠的体液免疫功能。结果联合CpG ODA组在抗HBs转化率、出现时间、滴度峰值方面优于单用HBsAg组,CpG ODN的佐剂效果接近完全弗氏佐剂,而单用CpG,ODN则不能诱导抗HBs的产生。结论 CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/C小鼠产生体液免疫应答。

新型免疫佐剂-CpG寡脱氧核苷酸

含未甲基化CpG基序的寡脱氧核苷酸能够直接刺激B细胞等抗原递呈细胞,提高Th1产量并促进细胞因子的产生及抗原递呈细胞的成熟和活化。这使CpG寡核苷酸具有良好的免疫佐剂活性,能够促进和提高抗原特异性免疫应答。本篇着重介绍了CpG寡核苷酸作为免疫佐剂的研究进展。

含CpG基序的寡聚脱氧核糖核苷酸辅助乙肝疫苗对孕鼠和仔鼠的免疫效果

目的 观察不同剂量CpG 182 6联合乙肝疫苗注射孕鼠后 ,对孕鼠本身及其仔鼠的特异性免疫效果。方法 分别用不同剂量 (10、2 0、4 0 μg/只 )CpG 182 6作为乙肝疫苗佐剂辅助免疫孕鼠 ,ELISA方法检测孕鼠和仔鼠血清乙肝表面抗体 (HBsAb)水平 ,并观察仔鼠存活数量和生长发育指标 (体质量、身长、胎脑和胎仔体质量系数 )变化。结果 给孕鼠注射CpG 182 6 +乙肝疫苗或单纯乙肝疫苗后 ,孕鼠血清HBsAb水平总是高于仔鼠水平 (P <0 .0 1) ,但孕鼠与仔鼠血清HBsAb水平间无相关性存在 (r =0 .379 P >0 .0 5 ) ;CpG 182 6 +乙肝疫苗免疫孕鼠后 ,2 0 μg/只剂量组孕鼠和仔鼠血清HBsAb含量均高于 10、4 0 μg/只剂量组 ,单纯乙肝疫苗组及空白对照组 (P <0 .0 5 ) ,但仔鼠存活数量及体质量、身长、胎脑和胎仔体质量系数等生长发育指标间均无显著差异 (P均>0 .0 5 )。结论 CpG 182 6 (2 0 μg/只 )联合乙肝疫苗免疫孕鼠时 ,既能显著提高孕鼠及其仔鼠血清特异性免疫抗体水平 ,又不对仔鼠生长发育造成不良影响 ,是一种在妊娠期即可刺激免疫系统不成熟个体免疫活性的理想免疫佐剂。

含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究

目的 以肿瘤抗原P815AB抗原肽为模式抗原 ,研究CpG寡聚脱氧核苷酸 (CpGODN)对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用 [3H ] TdR掺入法研究CpGODN体外刺激小鼠脾细胞增殖效应 ,用ELISPOT和 [3H] TdR释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性CTL应答的效应。结果 ODN182 6在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖。经 4次免疫 ,在“肽 +ODN182 6 +IFA”组中 ,4/6的小鼠体内出现了特异性CTL应答 ;在“肽 +ODN182 6 +PBS”组 ,有 3只小鼠在完成 4次免疫前先后死亡 ,余 3只中有 1只体内也可检测到相应CTL反应 ;而对照“肽 +IFA”组 ,6只小鼠体内均未诱发出特异性CTL应答。结论 CpGODN对P815AB表位肽有较为理想的免疫佐剂效应 ,但疫苗构成形式对其免疫效果有着决定性的作用 ,“肽 +ODN182 6 +IFA”是本研究中最有效的疫苗形式 。

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制人膀胱癌细胞在裸鼠体内的生长

目的:观察不同剂量的CpG ODN 1668对裸鼠皮下接种人膀胱移行细胞癌T24细胞生长的抑制作用,并与卡介苗的作用进行比较。方法:通过皮下接种T24细胞,建立裸鼠皮下接种人膀胱癌细胞的动物模型。将裸鼠随机分为5组,(1)对照组;(2)BCG组;(3)小剂量CpG ODN 1668组;(4)中等剂量CpG ODN 1668组;(5)大剂量CpG ODN 1668组。自肿瘤细胞接种后第1天起给药,共4次(第1、8、15、22天),在肿瘤周围多点注射相应药物(早期给药);同样方式另设5组动物,自肿瘤细胞接种后第7天起(第7、14、21、28天)于肿瘤周围多点注射相应药物(延迟给药)。观察肿瘤体积和裸鼠的生存率。结果:早期给药时,在CpG ODN 1668各剂量组和BCG组,肿瘤生长均被抑制,裸鼠的生存期得到延长。中等剂量和大剂量CpG ODN 1668组对肿瘤细胞生长的抑制作用强于BCG组。延迟给药时,CpG ODN 1668各剂量组肿瘤体积和裸鼠的生存率,与对照组和BCG组的差异无显著统计学意义。结论:CpG ODN 1668的早期应用,可抑制人膀胱癌细胞T24在裸鼠体内的生长,并表现为剂量依赖性;其抗肿瘤效应是非T细胞依赖的。当加大使用剂量时,CpG ODN 1668对膀胱癌细胞生长的抑制作用强于BCG。而当肿瘤负荷较大时,CpG ODN 1668和BCG的延迟使用对膀胱肿瘤细胞在裸鼠体内的生长无抑制作用。

CpG寡聚脱氧核苷酸在肿瘤免疫治疗中的应用进展

CpG寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)具有激活机体免疫系统的作用。CpG ODN能够直接诱导浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)的活化和成熟,促进Th1型细胞因子的分泌和B细胞分化成浆细胞。CpG ODN作为肿瘤疫苗的佐剂已应用于多个临床试验中。单独应用CpG ODN具有抗肿瘤作用,联合其他抗肿瘤治疗(如单克隆抗体、化学治疗、放射治疗和细胞因子等)具有协同抗肿瘤作用。虽然在应用CpG ODN治疗ⅢB～Ⅳ期非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)的Ⅲ期临床试验中,与标准化疗方案相比没有延长患者的中位生存期并发生较严重的不良反应,但是在其他临床试验中CpG ODN具有明确的抗肿瘤作用。CpG ODN在抗肿瘤治疗中的有效性和安全性方面还需要进一步的临床试验证实。