Cpb1基因在乳腺癌中差异表达的初步研究

目的本研究利用生物信息学,从GenBank的乳腺癌表达文库中筛选了未见于国内外报道的高表达基因进行初步研究,以发现与乳腺癌相关的新基因。方法利用RT-PCR法对福州市第一医院和福建省人民医院乳腺外科2006～2007年切除手术中收集到的25例乳腺癌组织、11例癌旁正常组织和6例良性肿物组织进行了测定。重点研究Cpb1基因在乳腺癌组织、癌旁正常组织、良性肿物组织的表达差异。结果通过Fisher’s精确检验,Cpb1在小部分乳腺癌组织中具有特异性表达。结论研究表明Cpb1基因在部分乳腺癌患者中其表达差异显著,提示有望成为新的乳腺癌分子标志物。

产气荚膜梭菌毒素β1的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

目的原核表达产气荚膜梭菌毒素β1(Clostridium perfringens Beta1 toxin,CPB1),建立该毒素抗体的间接ELISA检测方法。方法利用基因工程技术获得cpb1基因,克隆至载体pET32a,构建重组质粒pET32α-cpb1,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CPB1。以重组蛋白CPB1作为包被抗原,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,建立CPB1抗体的间接ELISA检测法。并以CPB1的单克隆抗体McAb 1K19为一抗,优化包被蛋白的包被浓度、一抗稀释度、封闭时间及二抗稀释度,确定方法的临界值,验证方法的特异性、精密性、灵敏性。采用建立的方法检测201份正常牛血清样品及阴性、阳性小鼠血清样品。结果表达的重组蛋白CPB1相对分子质量约为54000(CPB1蛋白与硫氧化还原蛋白的融合蛋白),主要以包涵体形式表达。包被蛋白最佳浓度为10μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶16384,最佳封闭时间为120 min,二抗最佳稀释度为1∶1000。除B和C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.p.)外,其他常见食源性致病菌A_(450)均低于0.3;批内及批间精密性CV均<10%;当McAb 1K19稀释度为1∶32768,即浓度为0.002μg/μL时,A_(450)为0.2235,P/N为10.2。201份正常牛血清及阴性小鼠血清均为阴性,阳性小鼠血清为阳性,检测符合率为100%。结论制备的重组蛋白CPB1可用于建立CPB1抗体的间接ELISA检测法,建立的方法具有良好的精密性及较高的灵敏性,可用于大量临床样品的检测。