Cpd5抗宫颈癌作用的研究

目的观察2-(2-巯基乙醇)-3-甲基-1,4-萘醌(Compound 5,Cpd5)对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察Cpd5对HeLa细胞的生长抑制作用,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测Cpd5对HeLa细胞的凋亡诱导,Hoechst-33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态。结果 10、20、30、40、50μmol/L Cpd5处理HeLa细胞48h,生长抑制率分别为4.23、13.11、35.13、51.37、79.90%。不同时间点(12、24、48和72h)检测,细胞生长抑制率存在剂量-时间依赖关系。流式细胞术检测,30μmol/L Cpd5处理12、24和48h后,细胞凋亡率分别达7.15、16.07、44.16%;50μmol/L组的细胞凋亡率明显高于30μmol/L,且随时间增加而显著增加。结论 Cpd5能以剂量-时间依赖的方式抑制HeLa细胞增殖并诱导调亡,是潜在的抗宫颈癌新药。

鸦胆子苦醇通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的机制研究

目的探究鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的分子机制。方法针对本实验室保存的Hela细胞,使用不同浓度(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 nmol·L^(-1))的鸦胆子苦醇处理细胞。并将Hela细胞分为Control组(正常培养的Hela细胞)、BRU-L组(使用10.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)BRU-H组(使用20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNANC+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)、BRU-H+pcDNA-TLR9组(转染pcDNA-TLR9+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和EdU法检测各组细胞增殖情况;TUNNEL染色法,经流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞TLR9、MyD88、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)情况、ELISA检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和活性氧基团(ROS)含量。结果与0 nmol·L^(-1)组比较,10 nmol·L^(-1)组细胞活存活率、IC50值开始显著降低(P<0.05)。不同浓度的BRU刺激细胞后,细胞增殖能力显著降低,且呈剂量依赖(P<0.05)。。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)阳性细胞率、缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著降低,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显增加(P<0.05);Control组、BRU-L、BRU-H组/BRU-H+pcDNA-NC呈持续递减/递减趋势(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组EDU阳性细胞率、TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著升高,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞JC-1水平和ATP含量显著降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平显著增加(P<0.05);与BRU-L组比较,BRU-H组、BRU-H+pcDNANC组JC-1水平和ATP含量进一步降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平进一步增加(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组细胞JC-1水平和ATP含量增加,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可通过调控TLR9-MyD88信号通路制Hela细胞增殖。

斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制研究

目的:探讨斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制。方法:2023年1月—2023年12月购买1株人宫颈癌Hela细胞,培养至对数生长期后开始实验,将其分为4组,分别加斑蝥酸钠0μmol/L(空白对照组)、4μmol/L(4μmol/L组)、8μmol/L(8μmol/L组)和16μmol/L(16μmol/L组),每个浓度分别设置5个复孔(每组样本量为5),以细胞活力试验(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤2(BCL-2)、人细胞凋亡调节因子(Bax)、人半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况。结果:4μmol/L组、8μmol/L组和16μmol/L组的细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3相对表达量水平均高于空白对照组,BCL-2/Bax相对表达量水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着斑蝥酸钠浓度的升高,人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3随之也升高,BCL-2/Bax相对表达量逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。经斑蝥酸钠处理后可见细胞皱缩、变圆,细胞边缘出芽形成多花环结构的凋亡小体。结论:斑蝥酸钠具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、促进其凋亡的作用,具有剂量依赖性,其对细胞凋亡的调控作用可能与调控BCL-2,Bax和Caspase-3表达有关。

藻岩黄质对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨藻岩黄质对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,分析其抑制肿瘤生长的机制。方法:体外培养HeLa细胞,设为给药组和空白对照组,空白对照组采用常规细胞培养,给药组加入一定浓度的藻岩黄质培养。采用MTT法检测不同浓度(0.1、0.5、1μmol/L)藻岩黄质处理HeLa细胞24 h及0.5μmol/L藻岩黄质处理HeLa细胞12、24、48 h后,HeLa细胞存活率的变化;采用Annexin V/PI流式细胞仪分别检测0.1μmol/L、0.5μmol/L藻岩黄质刺激HeLa细胞24 h及48 h后的凋亡情况;测定0.1、0.5、1μmol/L的藻岩黄质刺激HeLa细胞后培养基中ATP的生成和总氧摄取量。结果:与空白对照组相比,随着药物浓度增加,HeLa细胞生长逐渐缓慢(P<0.05);随着药物浓度和刺激时间增加,HeLa细胞凋亡率显著增加(P<0.05);随着药物刺激浓度增加,HeLa细胞ATP的产生率也显著下降(P<0.05)。结论:藻岩黄质能够抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导其凋亡。

顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和凋亡

目的:探讨顺铂对HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2蛋白表达及核转位的影响,并观察细胞自噬和凋亡的变化。方法:使用不同浓度的顺铂(0、2.5、5、10μmol/L)干预HeLa人宫颈癌细胞,MTT法检测细胞活性,Transwell实验观察细胞迁移能力,mCherry-GFP-LC3B融合蛋白腺病毒转染HeLa细胞观察自噬水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平,免疫蛋白印迹检测Nrf2在细胞质和细胞核内的表达情况,免疫荧光法观察Nrf2的核转位情况。结果:与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可抑制HeLa细胞的活性及细胞迁移能力(P<0.05),且随着药物浓度增高抑制作用增强(P<0.05)。与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可促进HeLa细胞中LC3B的表达、细胞凋亡及Nrf2的核转位(P<0.05),降低细胞质中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05),并升高细胞核中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和细胞凋亡,并抑制细胞的活性和迁移能力。

褪黑素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

探究了褪黑素(melatonin,MLT)联合顺铂(cisplatin,DDP)对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。体外培养宫颈癌HeLa细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定MLT、DDP及其联合使用对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;将HeLa细胞分为对照组、褪黑素组、顺铂组和联合组;其中褪黑素组采用2.5 mmol·L^(-1)的褪黑素处理细胞;顺铂组采用5μg·mL^(-1)的顺铂处理细胞;联合组采用2.5 mmol·L^(-1)的褪黑素+5μg·mL^(-1)的顺铂联合处理。采用克隆形成实验、流式细胞仪、划痕实验和Transwell小室实验分别检测各组HeLa细胞的增殖、凋亡、侵袭情况,蛋白质印迹法检测Ki-67、PCNA、Bcl-2、Bax、N钙粘蛋白(N-cadherin)、E钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达情况。MTT结果显示MLT、DDP可以显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P<0.05),且随着使用浓度的升高抑制率显著升高;相比单独使用MLT、DDP,联合使用MLT和DDP可以显著升高对HeLa细胞增殖的抑制率(P<0.05)。相比对照组,褪黑素组和顺铂组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率以及Ki67、PCNA、Bcl-2、E-cadherin蛋白相对表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率和蛋白Bax、N-cadherin、Vimentin相对表达水平升高(P<0.05)。相比褪黑素组和顺铂组,联合组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率、Ki67、PCNA、Bcl-2、E-cadherin蛋白相对表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。结果表明,MLT和DDP均可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭并促进其凋亡,且联合使用效果更为显著。

基于PI3K/Akt信号通路探讨甲基莲心碱对HeLa细胞的影响

目的探讨甲基莲心碱对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法以不同质量浓度甲基莲心碱(0、10、15、20、25、30μg/mL)处理HeLa细胞,CCK-8法检测细胞活性,在光学显微镜下观察细胞形态,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。建立裸鼠HeLa细胞移植瘤模型,随机分为对照组、顺铂组和甲基莲心碱低、高剂量组,观察各组移植瘤生长情况,HE染色观察肿瘤组织细胞形态变化,Western blot法检测肿瘤组织蛋白表达。结果随着甲基莲心碱干预剂量的增加,HeLa细胞逐渐失去正常形态,细胞变圆,贴壁能力降低,透光性增加。与对照组比较,甲基莲心碱组细胞活性降低(P<0.05),细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),并呈时间和剂量依赖性;细胞PI3K、Akt蛋白表达无明显变化(P>0.05)。与对照组比较,甲基莲心碱组裸鼠肿瘤生长受到抑制(P<0.05),肿瘤组织Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0.05),Bax、cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论甲基莲心碱可促进宫颈癌HeLa细胞凋亡,其可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路发挥作用。

虎杖粗提物对宫颈癌Hela细胞增殖与迁移作用机制研究

目的:探究虎杖粗提物对宫颈癌Hela细胞增殖和迁移的机制。方法:使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)、ATP(Adenosine 5′-triphosphate)、LDH(Lactate dehydrogenase)试剂盒检测虎杖粗提物对Hela细胞增殖的影响;采用划痕实验检测虎杖粗提物对Hela细胞水平迁移能力的影响;采用流式细胞术检测虎杖粗提物对Hela细胞凋亡的影响;采用免疫印迹法(Western blotting)检测虎杖粗提物对Hela细胞caspase 1/3/8/9、PARP(poly ADP-ribose polymerase)以及GSDME(Gasdermin E)等蛋白表达的影响。结果:虎杖粗提物抑制了Hela细胞的增殖,显著抑制Hela细胞的迁移能力,诱导了Hela细胞凋亡,并显著增加了cleaved-caspase 3/8/9、PARP等Hela细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结论:虎杖粗提物可以有效抑制Hela细胞的增殖和迁移,可能通过诱导细胞凋亡和导致线粒体功能障碍发挥作用。

掌叶半夏有效提取物单独或与顺铂联合对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用

目的观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP+PE处理细胞;用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果PE及DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PE可加强DDP对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞呈现出凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论PE对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,同时能提高HeLa细胞对顺铂的敏感性。

miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响以及对Bcl-2表达的调节

目的研究miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-143对宫颈癌HeLa细胞系Bcl-2蛋白及mRNA表达的调节作用。方法将miR-143,anti-miR-143以及microRNA空对照高表达质粒用脂质体转染进宫颈癌He-La细胞中,MTT法检测宫颈癌HeLa细胞增殖的变化,His-tone/DNA ELISA检测细胞凋亡;Western blot和RT-PCR检测Bcl-2蛋白和mRNA的表达情况;双荧光素酶报告基因法检测miR-143的靶位点。结果 MiR-143抑制HeLa细胞的增殖,促进细胞凋亡,而anti-miR-143促进HeLa细胞增殖,抑制细胞凋亡;高表达的miR-143抑制Bcl-2蛋白的表达,anti-miR-143增加Bcl-2蛋白的表达量,而Bcl-2 mRNA的变化很小;miR-143抑制Bcl-2 3'端的荧光素酶的活性,突变miR-143与Bcl-2的预测结合位点后,荧光素酶的活性恢复。结论 MiR-143至少部分通过打靶Bcl-2抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并且促进HeLa细胞凋亡。

热疗对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

目的:观察不同加温温度对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法:人宫颈癌Hela细胞株常规方法培养,采用水浴加热法(温度为41℃、42.5℃、43.5℃、)对细胞进行加温处理,处理后继续培养24h。用流式细胞仪检测细胞凋亡,单细胞凝胶电泳(singlecellgelelectrophoresis,SCGE)法检测DNA受损状态。结果:随着温度的增加细胞凋亡率增加,42.5℃、43.5℃加温1h后细胞凋亡率最高分别为30.7%和34.6,坏死细胞分别为13.2%和29.6%。单细胞凝胶电泳发现42.5℃加温1h后40.0%的细胞有DNA损伤,43.5℃加温1h后80.0%以上的细胞DNA损伤,而41℃加温处理1h后仅有20.0%细胞DNA受损。结论:单独加温处理1h可诱导细胞凋亡,并导致细胞DNA损伤。

黄连素对人宫颈癌Hela细胞株的体外作用研究

目的研究黄连素对人宫颈癌Hela细胞株的体外作用,探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法测定细胞生长抑制率;原位末端标记技术法(TUNEL)检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测药物作用前后细胞(COX-2)、Bcl-2蛋白水平表达的变化。结果黄连素在体外能以时间和剂量依赖的方式对宫颈癌Hela细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡;免疫细胞化学法证实黄连素作用Hela细胞后Bcl-2蛋白表达下调,COX-2的表达无明显变化。结论黄连素在体外对宫颈癌Hela细胞具有生长抑制作用,并可诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能与Bcl-2蛋白表达下调有关。

黄芪对体外培养人宫颈癌Hela细胞的抑制作用

目的:观察不同剂量黄芪水提物对体外培养人宫颈癌Hela细胞的抑制作用。方法:采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法检测黄芪对宫颈癌Hela细胞生长的影响。结果:黄芪抑制Hela细胞的生长,且呈剂量依赖性。黄芪促进Hela细胞的凋亡,且随着时间的延长,凋亡细胞比例明显增加。结论:黄芪对宫颈癌Hela细胞有明显抑制生长和促凋亡作用,且呈时间、剂量依赖性。

中药复方儿黄散对宫颈癌Hela细胞增殖抑制及Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方儿黄散(EHS)对宫颈癌Hela细胞增殖抑制和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,二步法免疫组化检测Bcl-2蛋白表达变化。结果:儿黄散能够抑制Hela细胞增殖,并且使Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:中药复方儿黄散能促进Hela细胞凋亡,其分子机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用。方法:培养人宫颈癌Hela细胞,不同浓度Rg3处理,HE染色观察细胞形态学改变,CCK-8、流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:Rg3作用后Hela细胞出现了典型的凋亡形态学变化,包括细胞皱缩、细胞核内染色体浓缩。10、20、40、80μg/ml人参皂苷Rg3处理48小时后Hela细胞的平均生存率为76.3%、57.1%、50.0%、29.8%;流式细胞术(FCM)显示肿瘤细胞凋亡率为16.4%、37.0%、50.0%、69.8%,表明肿瘤细胞在人参皂苷Rg3诱导下发生凋亡。结论:Rg3能抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡作用呈剂量依赖性。

大戟苷诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制研究

目的:研究大戟苷对人宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法:取Hela细胞分为空白对照组、顺铂组(阳性对照,10 mg/L)和大戟苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/L),分别加入相应药物进行培养。药物作用24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。药物作用48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Hoechst 33258染色法检测细胞核的形态变化;采用Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-10蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,顺铂组和大戟苷各剂量组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01),细胞核浓染,或有变形、缩小、碎裂,或出现凋亡小体。与空白对照组比较,大戟苷低、中、高剂量组细胞中Cyt-C、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值均显著降低(P<0.05或P<0.01);大戟苷中、高剂量组细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-10蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:大戟苷能显著抑制Hela细胞增殖、促进细胞凋亡,其作用可能是通过激活Caspase依赖的线粒体凋亡途径来实现的。

过表达TPX2对人宫颈癌HeLa细胞侵袭和凋亡的影响

目的通过TPX2过表达慢病毒载体在人宫颈癌HeLa细胞过表达TPX2基因,在体外研究TPX2对人宫颈癌HeLa细胞侵袭和凋亡的作用及其相关机制。方法构建TPX2过表达慢病毒载体(LV11-TPX2)及阴性对照(LV11-NC),选取稳定感染过表达慢病毒载体(LV11-TPX2)的HeLa细胞作为过表达组,将稳定感染(LV11-NC)的HeLa细胞作为阴性对照组,未感染病毒的人宫颈癌HeLa细胞作为空白对照组(CON)。采用Transwell基底膜侵袭实验测定各组细胞的侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞凋亡及侵袭相关蛋白质Bcl-2、Bax、Caspase-3、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)及nm23-H1的表达。结果成功构建TPX2过表达慢病毒载体(LV11-TPX2),可有效过表达TPX2 mRNA及蛋白质。与对照组比较,TPX2过表达组的HeLa细胞凋亡率明显减少(P<0.05),穿过Transwell小室基底膜细胞明显增加(P<0.01)。LV11-TPX2感染组HeLa细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显上调(P<0.05),Caspase-3及Bax的表达明显下调(P<0.05);侵袭相关蛋白质nm23-H1及TIMP-1水平明显下调(P<0.05),MMP-9水平明显上调(P<0.05)。结论在宫颈癌细胞过表达TPX2基因后,能抑制细胞凋亡,增强其侵袭能力,可能的机制为在宫颈癌细胞过表达TPX2能诱导凋亡和侵袭相关蛋白Caspase-3、Bax、nm23-H1及TIMP-1水平下调,Bcl-2及MMP-9水平上调。

阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相关机制

目的研究阿司匹林诱导宫颈瘤Hela细胞凋亡的机制。方法培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养。应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变。结果与对照组(4.13%±0.76%)相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率(11.71%±0.86%,18.15%±0.46%,30.81%±0.46%)明显增高(P<0.05);随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,两种基因表达较对照组均有统计学意义(P<0.05)。结论阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关。

减毒水泡性口炎病毒诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡及其作用机制

目的:研究减毒水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)对宫颈癌HeLa细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的机制。方法:将减毒VSV以1.0 MOI的接种密度感染HeLa细胞,在6、12、18、24和30 h后收集细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色观察HeLa细胞凋亡形态学变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测HeLa细胞早期凋亡率,流式细胞术分析HeLa细胞sub-G1凋亡峰,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,caspase试剂盒检测HeLa细胞caspase-3、caspase-8及caspase-9的活性。结果:减毒VSV感染HeLa细胞12和24 h后,HeLa细胞增殖活力分别为(78.4±1.9)%和(63.1±5.6)%(P<0.01);早期凋亡细胞率分别为(16.88±2.48)%和(31.9±4.24)%(P<0.01),sub-G1凋亡峰分别为(14.85±1.48)%和(21.05±2.28)%(P<0.01)。随着减毒VSV感染时间的增加,HeLa细胞线粒体跨膜电位逐渐降低(P<0.05),caspase-9和caspase-3的活性显著升高(均P<0.05)。结论:减毒VSV能够抑制HeLa细胞的增殖,并通过caspase-9和caspase-3依赖的途径诱导HeLa细胞凋亡。

LKB1协同二甲双胍影响宫颈癌HeLa细胞的增殖与凋亡及其可能的机制

目的:探索肝脏激酶B1(liver kinase B1,LKB1或serine-threonine kinase 11,STK11)基因协同二甲双胍对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法:构建含有LKB1基因的重组质粒LKB1-pEGFP-n1并转染HeLa细胞,MTT检测LKB1基因对经二甲双胍处理的HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响,Western blotting检测对LKB1-AMPK信号通路相关蛋白AMPK、ACC和Rb磷酸化水平的影响。结果:LKB1-pEGFP-n1和空载体pEGFP-n1成功转染HeLa细胞,LKB1-pEGFP-n1转染细胞内稳定表达LKB1。二甲双胍处理LKB1-pEGFP-n1转染细胞的IC50显著低于pEGFP-n1转染细胞[(2.9±0.4)vs(7.8±1.3)mmol/L;t=-6.9921,P=0.002 2]及野生型HeLa细胞[(2.9±0.4)vs(9.6±1.5)mmol/L;t=-7.527 1,P=0.001 7]。经二甲双胍处理后,LKB1-pEGFP-n1转染细胞周期阻滞于G1期,而pEGFP-n1转染和野生型细胞周期无显著变化。二甲双胍作用剂量为15 mmol/L时,LKB1-pEGFP-n1转染细胞凋亡率较pEGFP-n1转染及野生型HeLa细胞显著增多[(28.6±2.3)%vs(9.6±1.6)%、(17.8±1.9)%,均P<0.05]。LKB1-pEGFP-n1转染细胞内AMPKα和ACC的磷酸化水平较pEGFP-n1转染和野生型细胞升高,Rb磷酸化水平降低。结论:LKB1能够协同二甲双胍影响HeLa细胞的增殖与凋亡,其可能通过LKB1-AMPK信号通路发挥作用。