聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异

目的 :检测与分析淋病奈瑟菌 L 型的 cpp B基因 ,探讨细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌 cpp B基因的影响。方法 :用青霉素诱导淋病奈瑟菌成为 L 型并获得稳定 L 型纯培养物 ,用 cpp B基因特异性引物以聚合酶链反应 (PCR)检测稳定 L型纯培养物的 cpp B基因和进行单链构型多态性 (SSCP)分析。结果 :淋病奈瑟菌的细菌型及其 L型都具有 cpp B基因扩增产物 ,但 PCR-SSCP分析可见异常泳动 DNA带型 (细菌型有 2条带、L型有 3条带 )。结论 :细胞壁缺陷淋病奈瑟菌仍然具有 cpp B基因 。

慢性呼吸道感染患者呼吸道分泌物分离奈瑟菌的cppB与pJD1基因检测

目的检测慢性呼吸道感染患者分离奈瑟菌属菌种的cppB、pJD1,探讨cppB与pJD1检测对奈瑟菌属菌种鉴定及奈瑟菌感染诊断的意义。方法用常规聚合酶链反应(PCR)和real-time PCR方法,分别检测慢性呼吸道感染患者呼吸道分离的209株不同菌种奈瑟菌cppB以及pJD1基因。结果分离菌种的43株可检出cppB(阳性率20.6%),29株对检测pJD1的淋球菌核酸扩增荧光检测试剂呈阳性反应(阳性率13.9%),其中4株的cppB及pJD1检测均为阳性反应(阳性率1.9%)。结论引起慢性呼吸道感染的奈瑟菌属许多菌种具有淋球菌隐蔽质粒cppB,可与检测pJD1的淋球菌核酸扩增荧光检测试剂呈阳性反应。

细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因的检测

目的 :了解细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌隐蔽性质粒B基因 (cppB)的影响。方法 :用青霉素诱导淋病奈瑟菌成L型 ,以非高渗液体培养基传代培养并获得L型纯培养物 ,用cppB基因特异性引物以聚合酶链反应 (PCR)检测不同代次稳定L型纯培养物的cppB基因。结果 :淋病奈瑟菌细菌型及其传 1～ 4代的L型培养物具有cppB基因 ,传 5代后的L型培养物不能检出cppB基因。结论 :细胞壁缺陷可造成淋病奈瑟菌隐蔽性质粒丢失 ,导致cppB基因PCR检测漏诊。

cppB基因PCR检测淋病奈瑟菌稳定L型的评价

目的对淋病奈瑟菌隐蔽性质粒B(crypticplasmidB ,cppB)基因用于淋病奈瑟菌稳定L型基因诊断的评价。方法用非高渗液体培养基培养青霉素诱导形成和自发形成的淋病奈瑟菌稳定L型 ,获得纯培养物以特异性cppB基因引物进行聚合酶链反应 (PCR)检测。结果淋病奈瑟菌细菌型可检出cppB基因 ,但不论诱导形成还是自发形成的稳定L型传 5代后纯培养物cppB基因检测均为阴性反应。结论细胞壁缺陷可导致淋病奈瑟菌cppB基因丢失 。

淋球菌隐蔽性质粒CppB基因的克隆研究

利用ｐＧＥＭ－Ｔ载体对ＣｐｐＢ基因ＰＣＲ扩增产物进行直接克隆，除常规方法中的限制性内切酶可以节省外，发现该方法不仅过程简便，操作易行，而且可以用ＰＣＲ方法筛选重组子，克隆的阳性率较常规方法高。ＤＮＡ序列测定结果证明在ＰＣＲ产物３′末端的确出现了一个不与模板互补的“Ａ”末端，它可以与ＰＧＥＭ－Ｔ载体Ｔ结合。ＰＣＲ方法筛选重组，克隆的阳性率较常规方法高。ＤＮＡ序列测定结果证明在ＰＣＲ产物克隆片段的基因序列与文献报道相一致，这为获得淋球菌隐蔽性质粒ＣｐｐＢ基因ＰＣＲ诊断标准阳性模板，了解ＣｐｐＢ基因功能奠定了基础。

细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因酶切图谱分析

目的探讨细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌隐蔽性质粒B(cppB)基因的影响以及细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB的变异特点。方法用青霉素诱导淋病奈瑟菌成为细胞壁缺陷型并获得其纯培养物,cppB基因特异性引物PCR检测细胞壁缺陷型纯培养物的cppB基因,并对其cppB基因PCR扩增产物进行限制性核酸内切酶图谱分析。结果细菌型和细胞壁缺陷型均具有cppB基因扩增产物,经过限制性内切酶HindⅢ、HinfⅠ、HpaⅡ和MspⅠ消化和电泳,在5%PAGE凝胶电泳中,呈现出相同的电泳条带。结论淋病奈瑟菌细菌型及其细胞壁缺陷型对cppB基因限制性核酸内切酶(HindⅢ、HinfⅠ、MspⅠ、HpaⅡ)的分析没有发现淋病奈瑟菌L型具有与其亲代细菌型不同的图谱,提示细胞壁缺陷没有导致淋病奈瑟菌的cppB基因发生这些核酸酶切位点中核苷酸序列的改变。

淋球菌隐蔽性质粒cppB基因探针制备及初步应用的研究

应用碱变性法从淋球菌Ｄ参考菌株获得４．２ｋｂ隐蔽性质粒ＤＮＡ，通过ＰＣＲ方法扩增该质粒６３３ｂｐｃｐｐＢ基因。采用ＤＮＡ直接酶标─化学发光自显影技术标记ｃｐｐＢ基因探针，通过斑点及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交加以鉴定并初步应用于临床标本检测。旨在为临床淋病实验室诊断提供一个简便、快速方法。

慢性呼吸道感染患者呼吸道分泌物分离奈瑟菌的cppB与pJD1基因检测

目的探究对慢性呼吸道感染患者呼吸道分泌物分离奈瑟菌的cppB与pJD1基因检测进行检测的临床诊断意义。方法将2018年5月-2019年5月在我院治疗的98例慢性呼吸道感染患者作为菌株来源,对患者进行痰标本菌株分离,共分离出奈瑟菌株368株,菌种9种,其中浅黄色奈瑟菌25株,微黄奈瑟菌46株,干燥奈瑟菌37株,嗜乳糖奈瑟菌48株,黏液奈瑟菌26株,多糖奈瑟菌52株,灰色奈瑟菌65株,脱氨奈瑟菌49株以及淋病奈瑟菌20株。分析所分离菌株中的cppB与pJD1基因检测结果差异。结果对分离出的奈瑟菌属菌种进行cppB及pJD1基因检测,共有90株奈瑟菌检出cppB阳性占比为24.46%,51株检出pJD1阳性,占比为13.86%。其中cppB检测干燥奈瑟菌与黏液奈瑟菌检出率均为100%,淋病奈瑟菌cppB与pJD1检测均表现为阳性反应。结论慢性呼吸道感染患者呼吸道中存在的正常奈瑟菌群也会引起患者泌尿生殖系统感染,可能引起尿道炎等疾病。对正常奈瑟菌进行cppB及pJD1检测时也会出现较为明显的反应,因此在临床诊断中需要对患者进行病原体分析联合常规细菌检测提高诊断的准确性。

淋球菌膜抗原CppB基因的克隆及在大肠杆菌和减毒鼠伤寒沙门菌中的表达

将PCR扩增的淋球菌CppB膜蛋白基因区段,分别克隆在游离蛋白表达载体pKK223-3和融合蛋白表达载体pWR450-1上,以点杂交证实了克隆子。控制合适表达条件,在大肠杆菌中获高效表达,免疫印迹证实其可被淋病患者血清特异识别,将融合蛋白表达质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌中也获表达,为淋病口服活疫苗的制备奠定了基础。

淋球菌临床分离株青霉素耐药性与β-内酰胺酶基因相关性探讨

目的了解淋球菌临床分离株青霉素耐药性与β-内酰胺酶基因存在的相关性.方法对2003年2～12月分离的128株淋球菌临床分离株用PCR法检测其特异的隐蔽质粒CPPB基因和青霉素耐药菌的β-内酰胺酶基因;用琼脂稀释法测定其对青霉素的最小抑菌浓度(MIC).结果 128株临床分离菌中CPPB基因阳性者125株,占97.7%.其中MIC≥1 mg/L的青霉素耐药菌86株,占CPPB基因阳性者的68.8%;MIC≥8 mg/L的高耐药菌59株,占耐药菌株总数的68.6%.86株耐药菌中β-内酰胺酶基因PCR扩增阳性者62株,占72.1%,其中58株(67.4%)为高耐药菌.结论研究表明,目前淋球菌临床分离株耐药情况较为严重,如果用青霉素治疗淋病需首先进行耐药检测.用PCR技术扩增CPPB基因有助于淋病的确诊.淋球菌的耐药性与β-内酰胺酶基因存在一定关系.β-内酰胺酶基因的检测对快速判断淋球菌是否高度耐受青霉素有临床指导意义.

聚合酶链反应技术诊断慢性淋病性前列腺炎

随着分子遗传学的深入发展,聚合酶链反应(PCR)药盒的商品化,近年来国内许多医院已用PCR检测淋病球菌。据报道,淋球菌感染的占男性泌尿系感染的30.1％。但慢性淋病性前列腺炎诊断颇困难。为提高其诊断率。

淋球菌重组与减毒鼠伤寒沙门氏菌活疫苗口服免疫的初步研究

在克隆淋球菌膜抗原CppB基因并在大肠杆菌和减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得高效表达的基础上,用表达CppB-LacZ融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌口服免疫Balb/c小鼠。ELISA检测表明被免疫小鼠血清中特异性抗体滴度可达1:160,并诱发了DTH反应,说明产生了特异的免疫反应。重组菌可在肠道中较持久地寄生,对小鼠未见有明显的毒副反应。