双组分信号转导系统CpxAR对沙门菌耐药性调控作用的研究进展

沙门菌中存在多种双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCS),它们能够感应外界环境信号的变化,调控细菌的生物学特性。CpxAR系统是革兰阴性菌中普遍存在的TCS之一,近年来的研究证实CpxAR与沙门菌对多种药物耐药性的形成密切相关,且越来越多的研究试图阐明CpxAR调控沙门菌耐药性的调控机制。本文就CpxAR对沙门菌耐药性的调控作用的研究进展作以综述,旨在为科研人员更深入的研究提供思路和理论指引。

大肠杆菌cpxR和hns双基因缺失株的构建

为构建调节蛋白H-NS及双组分信号转导系统CpxAR的单、双基因缺失株,本研究以大肠杆菌ATCC25922为研究对象,以pKD4质粒为模板,分别扩增出含kan^r基因的线性打靶片段,在pKD46质粒的辅助及L-阿拉伯糖的诱导下进行Red同源重组,使线性打靶片段替换大肠杆菌ATCC25922中的cpxR、hns基因,再用pCP20质粒消除FRT位点间的kan^r基因,构建单基因缺失株△cpxR和△hns。接着以△cpxR为研究对象,用同样方法敲除hns基因,构建双基因缺失株△cpxR△hns。最后将重组表达质粒cpxR-pBAD/HisA、hns-pBAD/HisA电转入上述3种缺失株中,制备回补菌株△cpxR/pcpxR、△hns/phns、△cpxR△hns/pcpxR和△cpxR△hns/phns。结果表明,利用该重组系统成功敲除了大肠杆菌ATCC25922中cpxR、hns基因,构建了单、双基因缺失株△cpxR、△hns和△cpxR△hns以及它们的回补菌株,为研究H-NS及CpxAR互作调控IncFⅡ质粒接合作用的分子机制提供了有力的工具。