牡蛎过敏原Crag1蛋白的结构分析

通过生物信息学方法,分析牡蛎过敏原Crag1蛋白的理化性质和各级结构。结果显示,牡蛎Crag1蛋白由284个氨基酸组成,其酸性氨基酸和亲水性氨基酸较多; Crag1蛋白氨基酸序列与角蝾螺、九孔螺原肌球蛋白(Tropomyosin, Tm)的同源性较高,亲缘关系较近,亲疏水性区域相似; DNA Star分析可知α-螺旋是Crag1蛋白二级结构的主要部分; Swiss-Model建模的结果表明,模拟形成的Crag1三维构象有较高的稳定性和合理性,且空间结构比较简单,没有复杂的三四级结构;此次试验为研究牡蛎Crag1蛋白结构和过敏性的关系及不同物种过敏原间的交叉反应提供了理论依据。

牡蛎主要过敏原原肌球蛋白的重组表达及鉴定

牡蛎的主要过敏原是Crag 1蛋白(属于一种原肌球蛋白),克隆牡蛎原肌球蛋白Crag 1基因,导入大肠杆菌(BL21)中,然后筛选重组菌株。通过SDS-PAGE探究了重组菌株中Crag 1蛋白的最佳诱导表达条件,15℃下诱导16h。然后通过Western印迹、SDS-PAGE、质谱(MALDI-TOF-MS)、圆二色(CD)光谱等方法从His-tag、相对分子量、肽段比对以及二级结构上综合鉴定了重组Crag 1蛋白的准确性。本实验成功重组表达并鉴定了牡蛎主要过敏原Crag 1蛋白,为接下来的牡蛎脱敏实验以及牡蛎过敏的临床诊断和治疗奠定了良好的生物学基础。