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利用Cre-Loxp技术构建标记肝星状细胞的小鼠模型 被引量:1
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作者 黄紫薇 赵殿元 +1 位作者 徐龙 唐丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第7期1065-1070,共6页
目的通过Cre-Loxp技术构建转基因小鼠,应用Lrat^(Cre)工具鼠示踪肝星状细胞分布。方法将Lrat^(Cre)小鼠与H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠交配,通过PCR鉴定得Lrat^(Cre)H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告... 目的通过Cre-Loxp技术构建转基因小鼠,应用Lrat^(Cre)工具鼠示踪肝星状细胞分布。方法将Lrat^(Cre)小鼠与H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠交配,通过PCR鉴定得Lrat^(Cre)H11^(LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)报告基因小鼠。固定小鼠肝脏切片,借助免疫荧光标记肝脏非实质细胞抗体,通过Imaris 3D还原分析肝星状细胞和其他肝脏非实质细胞间的表达与分布,以及进行肝星状细胞的自定位检验。结果Lrat^(Cre)介导的红色荧光蛋白tdTomato的表达可以特异性标记肝星状细胞,并通过肝星状细胞与肝脏巨噬细胞、肝窦内皮细胞的免疫荧光定位为细胞间相互作用分析提供了途径。结论Lrat^(Cre)可以介导tdTomato对肝星状细胞进行示踪,同时可用做肝星状细胞特异性的报告基因工具鼠。 展开更多
关键词 肝星状细胞 肝脏巨噬细胞 肝窦内皮细胞 报告基因小鼠 cre-loxP
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基于Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性突变NLRP3转基因小鼠模型
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作者 杨熙玥 周永婷 +1 位作者 叶菜英 朱蕾 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期594-598,共5页
目的应用Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性NLRP3点突变转基因小鼠模型并对其进行鉴定。方法利用Cre-LoxP技术,构建NLRP3基因T346M点突变的flox杂合子(NLRP3^(flox)/+)小鼠。将该小鼠与广谱表达Cre重组酶工具鼠(CAG-Cre/ERT2,CreT)杂... 目的应用Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性NLRP3点突变转基因小鼠模型并对其进行鉴定。方法利用Cre-LoxP技术,构建NLRP3基因T346M点突变的flox杂合子(NLRP3^(flox)/+)小鼠。将该小鼠与广谱表达Cre重组酶工具鼠(CAG-Cre/ERT2,CreT)杂交繁育,获得基因型NLRP3^(flox)/+CreT^(+/-)小鼠,后者与NLRP3 T346M的flox纯合子(NLRP3^(flox)/flox)小鼠进一步交配获得NLRP3^(flox)/flox CreT^(+/-)(KI/KI)和NLRP3^(flox)/+CreT^(+/-)(KI/WT)小鼠,于6~8周时经他莫昔芬的诱导实现NLRP3 T346M突变基因的时间特异性敲入。小鼠繁育和鉴定过程中,用PCR方法检测鼠尾基因组DNA。采用Western blot法检测小鼠肝脏和心脏中NLRP3、pro-Caspase-1和Caspase-1的蛋白质表达水平。结果小鼠给予他莫昔芬后,NLRP3 T346M突变基因被诱导敲入。Western blot结果显示,KI/KI小鼠肝脏和心脏组织以及KI/WT小鼠心脏中NLRP3炎性小体效应蛋白Caspase-1的表达水平较同窝野生型小鼠显著上调。结论本研究基于Cre-LoxP技术成功构建了NLRP3 T346M突变转基因小鼠模型,该模型小鼠在他莫昔芬诱导后可出现自发性的NLRP3炎症小体活化,这为探究NLRP3炎症小体活化机制以及筛选和评价NLRP3炎症小体抑制剂提供了新的时间特异性的实验动物模型。 展开更多
关键词 NLRP3突变 cre-loxP系统 转基因小鼠 时间特异性 基因型鉴定 表型鉴定
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CRISPR/Cas9联合Cre-Loxp系统建立VASN条件敲除的小鼠肝细胞系
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作者 甘暨 杨丽超 +3 位作者 张起 孙俊铭 张俊 何敏 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第2期173-181,共9页
目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株。方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同... 目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株。方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同源序列的供体载体donor DNA质粒;将3个质粒共转染至小鼠肝细胞AML12中,分离单克隆,提取基因组DNA,经PCR及测序鉴定获得稳定敲入Loxp序列的单克隆细胞株AML12-Loxp;将pALB-Cre质粒转染至AML12-Loxp,筛选建立敲除VASN基因的细胞系。结果:成功构建2个靶向敲除VASN基因的pX459-gRNA-VASN-1和pX459-gRNAVASN-2重组载体及一个供体载体;转染药筛后获得12个单细胞克隆,经测序,5个单克隆细胞实现VASN基因上下游精确敲入Loxp序列;同源重组敲入效率为41.6%;pALB-Cre质粒转染后获得20个单细胞克隆,经PCR和测序获得12个VASN基因敲除的单克隆细胞,敲除效率为60%。结论:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统成功构建了VASN基因敲除的AML12细胞,为后续体外研究VASN在肝细胞中的功能及在动物体内实现VASN的条件性敲除奠定了分子基础。 展开更多
关键词 VASN CRISPR/Cas9 cre-loxp系统 条件性敲除 AML12细胞
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Cre/loxP系统应用于毕赤酵母基因敲除的研究进展
4
作者 王未鲜 韩铭海 《安徽农业科学》 CAS 2023年第15期10-13,17,共5页
毕赤酵母是重组蛋白最常用的表达系统之一,蛋白高水平表达策略一直是领域内最重要的研究课题之一。在后基因组时代,高效而便捷的基因改造是一种有效提高毕赤酵母蛋白表达能力的手段,其中由Cre/loxP系统介导的基因改造技术受到了科研人... 毕赤酵母是重组蛋白最常用的表达系统之一,蛋白高水平表达策略一直是领域内最重要的研究课题之一。在后基因组时代,高效而便捷的基因改造是一种有效提高毕赤酵母蛋白表达能力的手段,其中由Cre/loxP系统介导的基因改造技术受到了科研人员的广泛关注。综述了Cre/loxP系统的基本原理、应用于毕赤酵母基因敲除的技术路线及其关键的技术问题。 展开更多
关键词 毕赤酵母 cre/loxP 基因敲除
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基于5-LOX/LTB4信号通路探讨黄芩苷/栀子苷对PM_(2.5)暴露致血管内皮功能障碍的干预作用及其机制
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作者 孙欠欠 张行行 +5 位作者 赵麓 赵安东 史永恒 王川 刘继平 王斌 《中南药学》 CAS 2024年第2期307-314,共8页
目的基于5-LOX/LTB4信号通路探究黄芩苷/栀子苷(BC/GD)对PM_(2.5)诱导的血管内皮功能障碍的改善作用及其机制。方法利用离体肌张力描记技术测定BC/GD对不同状态下血管环张力的影响。将32只大鼠随机分为对照组、PM_(2.5)组、30 mg·k... 目的基于5-LOX/LTB4信号通路探究黄芩苷/栀子苷(BC/GD)对PM_(2.5)诱导的血管内皮功能障碍的改善作用及其机制。方法利用离体肌张力描记技术测定BC/GD对不同状态下血管环张力的影响。将32只大鼠随机分为对照组、PM_(2.5)组、30 mg·kg^(-1)BC/GD组和60 mg·kg^(-1)BC/GD组,利用气管滴注法构建PM_(2.5)暴露模型,持续2个月,造模1个月后灌胃给予对应药物,持续1个月,末次给药后,HE染色观察肠系膜动脉血管内皮状态;化学发光法检测肠系膜动脉活性氧(ROS)水平;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)水平;ELISA法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白三烯B4(LTB4)水平;Western blot法检测5-脂氧酶(5-LOX)、内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达。结果BC/GD对基础状态的肠系膜动脉血管环张力无明显影响,但能明显舒张由5-HT预收缩的血管环;一氧化氮合酶抑制剂L-NAME、环氧合酶抑制剂INDO或L-NAME+INDO均能明显抑制BC/GD的血管舒张作用,但L-NAME的抑制作用更明显;50、100 mg·mL^(-1)PM_(2.5)能降低血管环对乙酰胆碱(ACh)的舒张血管效应,而BC/GD能明显改善PM_(2.5)诱导的舒张效应减弱。与对照组相比,PM_(2.5)组大鼠肠系膜动脉内皮完整性严重受损、内皮皱缩,大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、LTB4水平显著升高、TGF-β1水平显著降低,肠系膜动脉组织中5-LOX、iNOS蛋白表达明显增加,eNOS蛋白表达降低,ROS水平升高,NO水平降低。与PM_(2.5)组相比,BC/GD能改善内皮损伤程度和完整性,可显著降低血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、LTB4水平,升高TGF-β1水平;明显降低肠系膜动脉5-LOX、iNOS表达,升高eNOS蛋白表达;降低ROS水平,升高NO水平。结论BC/GD可通过抑制5-LOX/LTB4信号通路表达,从而降低ROS水平,抑制炎性损伤,上调eNOS表达,下调iNOS表达,升高血管中NO水平,改善PM_(2.5)诱导的血管内皮功能障碍。 展开更多
关键词 PM_(2.5) 黄芩苷 栀子苷 内皮功能障碍 5-lox/LTB4信号通路
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基于Cre-LoxP系统的B细胞特异性荧光报告基因小鼠模型的构建及鉴定
6
作者 吴孟瑶 张雪婷 +1 位作者 程倩倩 张纪岩 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期361-367,共7页
目的应用Cre^(-)LoxP重组酶系统构建B细胞特异性表达tdTomato蛋白的荧光报告基因小鼠。方法在Gt(ROSA)26Sor(Rosa26)位点插入1个由CAG启动子驱动的报告基团,其LoxP侧翼设计有STOP盒,可阻止tdTomato荧光蛋白表达,经与CD19-Cre工具小鼠交... 目的应用Cre^(-)LoxP重组酶系统构建B细胞特异性表达tdTomato蛋白的荧光报告基因小鼠。方法在Gt(ROSA)26Sor(Rosa26)位点插入1个由CAG启动子驱动的报告基团,其LoxP侧翼设计有STOP盒,可阻止tdTomato荧光蛋白表达,经与CD19-Cre工具小鼠交配繁殖获得tdTomato^(CD19-Cre)小鼠,Cre重组酶特异性识别LoxP序列,删除STOP盒,从而使B细胞特异性表达tdTomato荧光蛋白。利用PCR进行基因型鉴定。通过流式细胞术和脑膜免疫荧光分别检测野生型对照组小鼠和tdTomato^(CD19-Cre)荧光报告基因小鼠脾和脑膜B细胞中tdTomato红色荧光蛋白表达。结果基因型为tdTomato^(F/-)CD19-Cre^(+)或tdTomatoF/FCD19-Cre^(+)的小鼠为B细胞特异性表达tdTomato天然红色荧光蛋白的荧光报告基因小鼠。而对照组小鼠基因型为tdTomato^(F/-)CD19-Cre^(-)或tdTomatoF/FCD19-Cre^(-)。流式细胞术测定结果表明,与野生型对照组小鼠相比,tdTomato^(CD19-Cre)荧光报告基因小鼠脾中表达tdTomato荧光蛋白的B细胞百分比均显著增加(P<0.01);在非B细胞群中仅检测到少量的tdTomato+细胞。且在滤泡型B细胞、边缘区B细胞、T1 B细胞、T2 B细胞和成熟B细胞等B细胞亚群细胞表面tdTomato荧光蛋白均能稳定表达(P<0.01),百分比分别为(88±8)%,(80±9)%,(86±9)%,(92±6)%和(89±7)%。通过与CD45共定位,在tdTomato^(CD19-Cre)荧光报告基因小鼠脑膜中也检测到tdTomato红色荧光蛋白表达。结论成功构建B细胞特异性表达tdTomato荧光蛋白的荧光报告基因小鼠模型,且tdTomato荧光蛋白可在外周免疫器官和中枢神经系统稳定表达。 展开更多
关键词 cre-loxP系统 tdTomato荧光蛋白 B细胞
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CgLOX4基因在长牡蛎幼虫发育中的表达特征
7
作者 胡悦 冷金源 +2 位作者 孙洁洁 王玲玲 宋林生 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期38-47,共10页
为研究长牡蛎(Crassostrea gigas)LOX4基因(CgLOX4)在幼虫发育中的表达特征,采用PCR技术扩增CgLOX4的全长cDNA序列,利用荧光定量PCR和整体免疫荧光技术检测CgLOX4在幼虫不同发育时期的表达特征。结果表明:CgLOX4的cDNA全长为1 862 bp,... 为研究长牡蛎(Crassostrea gigas)LOX4基因(CgLOX4)在幼虫发育中的表达特征,采用PCR技术扩增CgLOX4的全长cDNA序列,利用荧光定量PCR和整体免疫荧光技术检测CgLOX4在幼虫不同发育时期的表达特征。结果表明:CgLOX4的cDNA全长为1 862 bp,开放阅读框为834 bp,可编码277个氨基酸,等电点为8.36,预测其氨基酸序列只含有一个保守的HOX结构域;CgLOX4在长牡蛎成体各组织中均有表达,其中在闭壳肌中的表达量显著高于肝胰腺、鳃、血淋巴、性腺和唇瓣组织(P<0.05);CgLOX4在所检测的早期胚胎中均有表达,其中在受精卵和4细胞期的表达量相对较高;CgLOX4阳性信号主要分布在担轮幼虫壳形成区、D型幼虫内脏团和壳顶幼虫消化腺中。研究表明,CgLOX4是长牡蛎早期发育过程中较早激活的转录因子之一,可能在调控幼虫壳形成和消化器官形成等方面发挥重要作用。 展开更多
关键词 长牡蛎 lox4 幼虫发育 分布特征
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JA-mediated MYC2/LOX/AOS feedback loop regulates osmotic stress response in tea plant
8
作者 Junyan Zhu Hongrong Chen +5 位作者 Lu Liu Xiaobo Xia Xiaomei Yan Xiaozeng Mi Shengrui Liu Chaoling Wei 《Horticultural Plant Journal》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期931-946,共16页
Osmotic stress caused by low-temperature,drought and salinity was a prevalent abiotic stress in plant that severely inhibited plant development and agricultural yield,particularly in tea plant.Jasmonic acid(JA)is an i... Osmotic stress caused by low-temperature,drought and salinity was a prevalent abiotic stress in plant that severely inhibited plant development and agricultural yield,particularly in tea plant.Jasmonic acid(JA)is an important phytohormone involving in plant stress.However,underlying molecular mechanisms of JA modulated osmotic stress response remains unclear.In this study,high concentration of mannitol induced JA accumulation and increase of peroxidase activity in tea plant.Integrated transcriptome mined a JA signaling master,MYC2 transcription factor is shown as a hub regulator that induced by mannitol,expression of which positively correlated with JA biosynthetic genes(LOX and AOS)and peroxidase genes(PER).CsMYC2 was determined as a nuclei-localized transcription activator,furthermore,ProteinDNA interaction analysis indicated that CsMYC2 was positive regulator that activated the transcription of CsLOX7,CsAOS2,CsPER1 and CsPER3via bound with their promoters,respectively.Suppression of CsMYC2 expression resulted in a reduced JA content and peroxidase activity and osmotic stress tolerance of tea plant.Overexpression of CsMYC2 in Arabidopsis improved JA content,peroxidase activity and plants tolerance against mannitol stress.Together,we proposed a positive feedback loop mediated by CsMYC2,CsLOX7 and CsAOS2 which constituted to increase the tolerance of osmotic stress through fine-tuning the accumulation of JA levels and increase of POD activity in tea plant. 展开更多
关键词 Camellia sinensis Jasmonic acid(JA) MYC2 transcription factor Lipoxygenase(lox) Osmotic stress Peroxidase(POD) Reactive oxygen species(ROS)
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因为小,而而错过它?CREEK朗泉4040A紧凑型解码合并式功放
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作者 小路(图/文) 《视听前线》 2024年第2期66-70,共5页
这应该是英国CREEK(朗泉)有史以来体积最小的合并式功放,其摆放面积还不及一张A4纸,如果光看照片而不看实物的话,你想象不到它是如此之小。但就是这么小的一台合并式功放,却集合了多种功能。如果是老一代发烧友,一定对4040这组数字很熟... 这应该是英国CREEK(朗泉)有史以来体积最小的合并式功放,其摆放面积还不及一张A4纸,如果光看照片而不看实物的话,你想象不到它是如此之小。但就是这么小的一台合并式功放,却集合了多种功能。如果是老一代发烧友,一定对4040这组数字很熟悉。早期,CREEK就有这样一台合并式功放,它具有纤细的机身,黑色的面板,具有木纹的顶板和侧板,面板上还有为数不少的按键和旋钮,它就是CREEK在1982年推出的CAS4040合并式功放。 展开更多
关键词 cre 解码 CAS EK 紧凑型 按键 多种功能 面板
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Cre/lox位点特异性重组系统在高等真核生物中的研究进展 被引量:11
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作者 龙定沛 谭兵 +2 位作者 赵爱春 许龙霞 向仲怀 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期177-189,共13页
来自于P1噬菌体的Cre/lox系统通过位点特异性重组可以迅速而有效地实现各种生理环境下的基因定点插入、删除、替换和倒位等操作。Cre/lox系统作为目前基因打靶技术的核心工具,已被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、斑马鱼等高等真... 来自于P1噬菌体的Cre/lox系统通过位点特异性重组可以迅速而有效地实现各种生理环境下的基因定点插入、删除、替换和倒位等操作。Cre/lox系统作为目前基因打靶技术的核心工具,已被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、斑马鱼等高等真核模式生物。文章较为全面地介绍了Cre/lox系统的基本概况及其在高等真核生物中的应用,讨论了Cre/lox系统在研究中存在的主要问题和今后的发展方向,为利用该系统在不同高等生物中进行基因操作提供有用的参考。 展开更多
关键词 cre/lox重组系统 基因操作 位点特异性重组 基因打靶
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利用Cre/lox定位重组系统获得无选择标记GFP转基因烟草 被引量:9
11
作者 宋洪元 任雪松 +2 位作者 司军 李成琼 宋明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期2973-2982,共10页
【目的】利用Cre/lox系统具有的特异重组特性,以绿色荧光蛋白GFP为目的基因,获得无选择标记的GFP转基因烟草。【方法】将Bar基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与GFP基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草后获得抗除草剂Bast... 【目的】利用Cre/lox系统具有的特异重组特性,以绿色荧光蛋白GFP为目的基因,获得无选择标记的GFP转基因烟草。【方法】将Bar基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与GFP基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草后获得抗除草剂Basta的GFP转基因植株。GFP转基因植株叶盘二次转化导入重组酶Cre基因后,实现与GFP基因连锁的Bar基因表达盒剔除,剔除Bar基因的植株开花后自交使重组酶Cre基因分离,获得无选择标记的GFP转基因烟草。【结果】将含Bar基因表达盒以及GFP基因表达盒的植物表达载体转化烟草Wisconsin38后获得了抗除草剂Basta以及GFP荧光表达的转基因植株。随机抽取5株转基因植株二次转化导入Cre基因,所获得的再生植株叶盘进行Basta的抗性检测,绝大多数单株对应叶盘在含8mg·L-1PPT(phosphinothricin)的筛选培养基上无法再生死亡,删除效率在76%~100%。对Bar基因删除后区域片段进行克隆测序分析显示,Bar基因表达盒已经被精确删除。Bar基因删除植株开花后自交,获得的自交后代进行NPTⅡ抗性检测,NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有GFP基因。【结论】利用Cre/lox系统获得烟草无选择标记的转基因植物是稳定可行的,可广泛应用于其它无选择标记转基因植物的培育。 展开更多
关键词 cre/lox定位重组系统 无选择标记转基因烟草 绿色荧光蛋白 转基因
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利用Cre/lox重组系统获得无选择标记的SKTI抗虫转基因烟草 被引量:6
12
作者 宋洪元 任雪松 +3 位作者 司军 李成琼 宋明 雷建军 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期21-29,共9页
将置于两个同向lox位点之间的Bar基因表达盒与大豆胰蛋白酶抑制剂SKTI基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草Wisconsin 38后获得对棉铃虫具有明显抗性的SKTI转基因植株。SKTI转基因植株通过叶盘二次转化法导入Cre基因,对再生... 将置于两个同向lox位点之间的Bar基因表达盒与大豆胰蛋白酶抑制剂SKTI基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草Wisconsin 38后获得对棉铃虫具有明显抗性的SKTI转基因植株。SKTI转基因植株通过叶盘二次转化法导入Cre基因,对再生植株叶盘进行Basta的抗性检测,检测Bar基因的删除情况。结果表明:绝大多数再生植株对应叶盘在含8 mg/L PPT的筛选培养基上无法再生,Bar基因被删除的效率在38%-100%之间。对Bar基因删除区域进行PCR及克隆测序后发现Bar基因表达盒被精确删除。对Bar基因删除植株开花自交获得的分离后代进行NPTⅡ抗性检测,5株NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有SKTI基因而无Cre基因存在,为无选择标记基因的SKTI转基因植株。 展开更多
关键词 cre/lox重组系统 SKTI基因 无选择标记 抗虫转基因烟草
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利用Cre/lox重组系统建立番茄基因工程雄性不育恢复系 被引量:3
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作者 宋洪元 任雪松 +3 位作者 司军 李成琼 宋明 雷建军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期3581-3591,共11页
【目的】利用Cre/lox重组系统具有的重组删除特性建立番茄工程恢复系,特异删除F1中的雄性不育基因恢复其育性。【方法】将TA29-Barnase雄性不育基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与NPTⅡ基因、Bar基因融合后获得植物表达载体pBinBarl... 【目的】利用Cre/lox重组系统具有的重组删除特性建立番茄工程恢复系,特异删除F1中的雄性不育基因恢复其育性。【方法】将TA29-Barnase雄性不育基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与NPTⅡ基因、Bar基因融合后获得植物表达载体pBinBarloxTABn,转化番茄获得雄性不育转基因植株。Cre基因在CaMV35S启动子的驱动下转入番茄获得工程恢复系。两者在开花时进行杂交,利用Cre重组酶删除F1中的TA29-Barnase不育基因表达盒使育性恢复。【结果】利用NPTⅡ作为转化筛选标记基因获得了番茄雄性不育转基因植株。转基因植株中的Bar基因能正常表达,真叶叶盘在含PPT3mg·L-1(phosphinothricin)分化培养基上能分化愈伤组织及芽;真叶具有抗PPT20mg·L-1浓度以上的能力。获得的TA29-Barnase转基因植株表现雄蕊退化、无花粉产生或产生少量形状畸形且无生活力的花粉。雄性不育植株自花授粉不能坐果,用非转基因保持系花粉授粉后,果实正常膨大结籽,杂交后代对除草剂Basta的抗性按1﹕1分离。不育植株与Cre转基因工程恢复系杂交后,果实也正常膨大结籽。对不育植株与Cre转基因工程恢复系杂交后代进行分子检测,结果发现同时含Bar基因和Cre基因F1植株中的TA29-Barnase雄性不育基因被精确删除。TA29-Barnase基因删除植株育性被恢复,能正常开花结果。【结论】利用Cre/lox重组系统建立的Cre工程恢复系成功将番茄F1代中的不育基因删除,恢复了F1的育性。该研究结果为植物基因工程雄性不育系的育性恢复提供了一条新的途径。 展开更多
关键词 cre/lox重组系统 工程不育系 cre工程恢复系 番茄
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cre/lox P系统介导的基因重组研究进展 被引量:3
14
作者 屈彦纯 邓昌彦 +1 位作者 刘建忠 刘桂兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第5期8-12,共5页
由于具有时间、组织和位点特异性 ,cre重组酶介导的DNA重组已成为基因靶位操作的一个重要工具。概述了cre/loxP系统的作用特点 ,cre重组酶的结构和重组机制 ,表达载体构建及重组个体检测等方面的问题 ,重点介绍了cre/loxP系统在基因重... 由于具有时间、组织和位点特异性 ,cre重组酶介导的DNA重组已成为基因靶位操作的一个重要工具。概述了cre/loxP系统的作用特点 ,cre重组酶的结构和重组机制 ,表达载体构建及重组个体检测等方面的问题 ,重点介绍了cre/loxP系统在基因重组研究中的应用及近来的发展与成就。 展开更多
关键词 cre/lox P系统 基因重组 基因靶位操作 介导
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Cre/lox系统介导的位点特异性重组技术及其应用 被引量:6
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作者 李卫 郭光沁 郑国锠 《生物技术通报》 CAS CSCD 2000年第1期33-37,共5页
 Cre/lox系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,它能导致在特定的DNA序列(loxP位点)处发生定点重组。该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除;这种定位重组系统在遗传操作中发挥了重要...  Cre/lox系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,它能导致在特定的DNA序列(loxP位点)处发生定点重组。该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除;这种定位重组系统在遗传操作中发挥了重要的作用。 展开更多
关键词 cre/lox 定点整合 特定基因删除 基因克隆 重组
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应用cre/lox植物表达载体的AtNHX1基因转化杨树研究 被引量:2
16
作者 杨阳 张艳丽 +2 位作者 王情 续晨 蔡小宁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第19期8874-8875,8921,共3页
[目的]研究Na^+/H^+逆向转运蛋白AtNHXl基因对杨树的转化。[方法]以杨树南林895杨的叶片作为外植体,采用根癌农杆菌介导法,构建cre/lox植物表达载体,并对3株转基因植株进行PCR分子检测。[结果]结果表明,较适合的转化条件为:外... [目的]研究Na^+/H^+逆向转运蛋白AtNHXl基因对杨树的转化。[方法]以杨树南林895杨的叶片作为外植体,采用根癌农杆菌介导法,构建cre/lox植物表达载体,并对3株转基因植株进行PCR分子检测。[结果]结果表明,较适合的转化条件为:外植体在分化培养基上经过2d预培养后于0D600nm值为0.3~0.4的菌液中浸泡7min,卡那抗性绿苗率可达43.9%;PCR分子检测表明,目的基因已经整合到杨树基因组中。[结论]该系统可以应用于杨树的基因工程研究。 展开更多
关键词 杨树 转化 ATNHX1 cre/lox植物表达载体
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Cre/lox介导剔除转双价抗虫sck+cryIAc基因籼稻恢复系明恢86材料的选择标记基因 被引量:2
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作者 陈松彪 刘翔 +4 位作者 彭海英 巩万奎 王锐 王锋 朱祯 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2004年第12期1416-1423,共8页
Cre/lox系统通过其Cre重组酶对lox序列进行切割和重新连接,介导lox序列发生特异性重组。利用重组报告基冈系统Pactin-lox-hpt-lox-gusA,对Cre/lox系统在水稻(Oryza saliva L.)中介导转基因的剔除进行了研究。Pactin-lox-hpt-lox-g... Cre/lox系统通过其Cre重组酶对lox序列进行切割和重新连接,介导lox序列发生特异性重组。利用重组报告基冈系统Pactin-lox-hpt-lox-gusA,对Cre/lox系统在水稻(Oryza saliva L.)中介导转基因的剔除进行了研究。Pactin-lox-hpt-lox-gusA系统中选择标记hpt基因侧翼含两个同向lox位点,并位于水稻actinl启动子和gusA基因之间。当hpt在Cre酶作用下被剔除时,actinl启动子可以和gusA基因融合在一起从而驱动GUS表达。通过农杆菌介导获得了分别转cre基因、Pactin—lox—hpt—lox—gusA结构和双价抗虫基因lox—hpt—lox—sck-cryIAc结构的水稻。利用有性杂交方法将cre基因导人列转化lox结构的植株中。在4个转Pactin—lox—hpt—lox-gusA T0植株×转cre T0植株所配组合的30个杂交F1植株中,12个植株表达GUS活性,9个表现潮霉素敏感,表明hpt基因被剔除。研究进一步通过Cre/lox介导剔除转双价抗虫sck+cryIAc基冈籼稻恢复系明恢86材料基冈组中的选择标记hpt基因。在9个转lox-hpt-lox-sck-cryIAc T2代纯合植株×转cre T2代纯合植株所配组合的77个杂交F1植株中,56个植株表现潮霉素敏感。分子分析证实在这些对潮霉素敏感的植株中hpt基因已经被剔除。 展开更多
关键词 cre/lox 基因剔除 转基因水稻 抗虫 sck cryIAc 无选择标记
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Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能评价 被引量:10
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作者 王志蕊 刘西梅 +4 位作者 周荆荣 郑新民 魏庆信 董发明 毕延震 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期194-201,共8页
选择标记的使用和残留可引起消费者对转基因生物环境安全和产品安全的担忧,建立消除选择标记的有效对策甚为必要.本研究的目标是评价Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能,为猪安全转基因研究提供实验依据和技术支撑.本文所用... 选择标记的使用和残留可引起消费者对转基因生物环境安全和产品安全的担忧,建立消除选择标记的有效对策甚为必要.本研究的目标是评价Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能,为猪安全转基因研究提供实验依据和技术支撑.本文所用的打靶载体ΔMSTN含有LoxP位点锚定的选择标记表达框(LoxP-CMV-NeoR-IRES-EGFP-LoxP).经电穿孔将该打靶载体导入猪肾PK15细胞,经G418筛选,获得稳定整合该载体、EGFP表达均一的单克隆细胞系.将Cre重组酶表达载体pTurbo-Cre导入该细胞系,借助流式分选(FACS)、终点PCR、荧光定量PCR、TA克隆与测序等手段,证明Cre-LoxP重组系统可在猪细胞内高效介导内源性选择标记基因的删除反应,EGFP水平的删除效率达到46.1%,DNA水平的删除效率则达到97%.本文的研究结果为消除选择标记的安全隐患提供了可靠的解决方案,为建立猪安全转基因技术提供了重要的科学依据. 展开更多
关键词 cre loxP 安全转基因 选择标记 绿色荧光蛋白 删除
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利用Cre/lox重组系统建立反义基因工程雄性不育恢复系 被引量:1
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作者 宋洪元 任雪松 +2 位作者 罗庆熙 雷建军 宋明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2198-2206,共9页
利用Cre/lox重组系统中的Cre重组酶能特异性识别并介导两个同向lox位点之间DNA序列发生重组删除的特点,将TA29驱动下的反义豌豆卷须肌动蛋白基因置于两个同向lox位点之间并与Bar基因连锁,转化烟草Wisconsin 38后获得抗除草剂Basta的转... 利用Cre/lox重组系统中的Cre重组酶能特异性识别并介导两个同向lox位点之间DNA序列发生重组删除的特点,将TA29驱动下的反义豌豆卷须肌动蛋白基因置于两个同向lox位点之间并与Bar基因连锁,转化烟草Wisconsin 38后获得抗除草剂Basta的转基因植株。将Cre基因导入烟草Wisconsin 38建立雄性不育工程恢复系。反义Actin转基因植株与Cre转基因植株杂交获得F1,通过Cre重组酶将F1中的反义肌动蛋白基因表达盒删除实现育性的恢复。结果显示:来自豌豆卷须的肌动蛋白基因在Wisconsin 38烟草绒毡层中反义表达但未能导致明显的雄性不育,转基因植株在花器官形态、花粉形状、活力、结实、结籽等方面与野生型植株间无明显的差异。而获得的烟草Cre转基因工程恢复系除少量植株出现叶片褪绿、结果少等异常外,绝大多数植株形态结构及开花结果习性与野生型一致;其中3个Cre转基因工程恢复系与Actin反义肌动蛋白转基因植株TAA-3杂交后,杂交后代中的绝大多数反义肌动蛋白基因表达盒均被精确删除,表明将Cre/lox重组系统用于建立基于反义基因工程雄性不育的恢复系是可行的。 展开更多
关键词 cre/lox重组系统 反义肌动蛋白基因 雄性不育 恢复系 烟草
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一种利用Cre/loxP系统进行标记基因删除与靶基因置换的细胞模型研究(英文) 被引量:2
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作者 崔文涛 任立明 +3 位作者 侯健 张颖 陈永福 安晓荣 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期650-660,共11页
Cre/lox系统可以介导DNA的定点插入和定点删除,可利用其实现转基因动物中'友好位点'的重复利用及标记基因的有效删除.为直观地评估该系统介导的以上两种重组反应的效果,通过标记基因并利用大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88进行了模型研究... Cre/lox系统可以介导DNA的定点插入和定点删除,可利用其实现转基因动物中'友好位点'的重复利用及标记基因的有效删除.为直观地评估该系统介导的以上两种重组反应的效果,通过标记基因并利用大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88进行了模型研究.首先构建了两个载体:a.整合载体pTE-lox2272-DsRed-loxP-GFP-loxP,含有红色荧光标记基因DsRed和绿色荧光标记基因GFP;b.置换载体pT-lox2272-neo-loxP,含有筛选标记基因neo,用以置换DsRed基因.然后,用整合载体转染SHZ-88细胞,并随机挑取了3个同时表达DsRed和GFP的稳定整合细胞克隆.随后用置换载体和Cre表达载体PBS185对以上每个克隆分别进行了3次共转染,通过G418筛选并扩增培养后,总共获得1070个克隆.通过分析标记基因DsRed和GFP在这些克隆中的表达情况:Cre介导的删除效率为91.1%,定点置换效率为29.3%.最后对部分克隆进行了PCR和DNA印迹鉴定,分子鉴定结果与发光的表型状况一致.这一方法为Cre/lox系统在转基因家畜生产中的进一步应用提供了实验依据. 展开更多
关键词 lox2272 loxP cre 标记基因删除 靶基因置换
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