卫氏并殖吸虫环介导等温扩增检测方法的建立

2022年于卫氏并殖吸虫流行区湖北兴山县和保康县分别采集34只和27只溪蟹,捣碎后用NaOH消化法提取DNA。根据卫氏并殖吸虫5.8S核糖体RNA序列,使用Primer Explorer V5软件设计卫氏并殖吸虫环介导等温扩增(LAMP)特异引物,建立卫氏并殖吸虫LAMP检测方法,评价该方法的特异性、灵敏度、扩增效率及现场应用效果,并与沉淀镜检法比较。结果显示,建立的LAMP检出限可达1个卫氏并殖吸虫囊蚴,且与日本血吸虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫、肝毛细线虫、钩虫等虫种无交叉反应。检测4份卫氏并殖吸虫囊蚴DNA样品,出现浊度时间(Tt值)和浊度速率峰值(Df)均值为29.0 min和0.237。LAMP检出兴山和保康县卫氏并殖吸虫阳性溪蟹分别为24只和0只,阳性率分别为70.6%(24/34)和0(0/27);沉淀镜检法检出囊蚴阳性溪蟹分别为23只和0只,阳性率分别为67.6%(23/34)和0(0/27),两种方法结果差异无统计学意义(χ^(2)=0.2,P>0.05)。建立的卫氏并殖吸虫LAMP检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,可用于淡水蟹卫氏并殖吸虫流行区现场调查或筛查。

雅鲁藏布江大峡谷缝合带墨脱近溪蟹的群体遗传结构分析

本研究为明确雅鲁藏布江缝合带下游墨脱近溪蟹(Potamiscus motuoense)的遗传多样性及种群结构,提取采自西藏林芝墨脱县5个地理群体合计128个个体的墨脱近溪蟹样本总DNA,并获取其16S r RNA、28S rRNA及ITS23个基因片段序列。结果表明,墨脱近溪蟹两基因联合片段共计981 bp,5个地理群体合计128个个体共检出18个多态性位点及17种单倍型,总群体的单倍型多样性(h)及核苷酸多样性(π)指数分别为(0.857±0.014)和(0.00277±0.00016),表明墨脱近溪蟹群体遗传多样性低。群体间遗传分化系数(Fst)为0.49062~0.90093之间,基因流(Nm)值在0.00550~0.51912之间,显示墨脱近溪蟹5个地理群体间出现明显的遗传分化,基因交流匮乏。Mantel检验分析表明,群体间的遗传距离与地理距离之间无显著相关性;AMOVA分析表明,其遗传变异主要来自群体间。本研究为研究雅鲁藏布江缝合带下游墨脱近溪蟹的遗传多样性及种群结构提供基本数据。