在本氏烟中瞬时表达效应因子PsCRN127基因提高其对寄生疫霉的抗性

[目的]本研究对一个具有植物细胞死亡抑制活性的大豆疫霉效应因子Ps CRN127进行功能分析,为认识疫霉菌的致病机制和利用效应因子来提高植物抗病性提供参考。[方法]利用农杆菌介导的瞬时表达技术,分析Ps CRN127的细胞死亡调控活性;利用寄生疫霉游动孢子接种本氏烟离体叶片评估Ps CRN127对植物防卫反应的影响;利用实时定量RT-PCR检测本氏烟中激素抗病信号途径标记基因的表达;利用DAB染色检测本氏烟接种叶片中过氧化氢的积累;利用与GFP融合的方法观察Ps CRN127的亚细胞定位。[结果]在本氏烟中表达Ps CRN127可以抑制由INF1、Psoj NIP、Ps CRN63、Bax和Avh241诱导的植物细胞死亡,并且可以提高其对寄生疫霉的抗性;Ps CRN127可能通过提高激素抗性信号途径相关基因的表达和过氧化氢的积累来提高植物抗病性;Ps CRN127定位于植物的细胞质和细胞核中。[结论]大豆疫霉可能通过分泌具有广泛细胞死亡抑制活性的CRN效应因子Ps CRN27来调控植物的细胞死亡和防卫反应;可以直接应用这些疫霉菌效应因子提高植物的抗病性。

桑树皱叶病毒外壳蛋白基因的原核表达和抗体制备及应用

桑树皱叶病毒(mulberry crinkle leaf virus,MCLV)是近年从感病桑树中分离鉴定的一种新的桑树病毒,该病毒属于双生病毒科。由于MCLV外壳蛋白基因(cp)序列中含有较多大肠埃希菌(Escherichia mori)BL21(DE3)的稀有密码子而限制了其在大肠埃希菌中的表达。通过人工合成DNA的方法对MCLV cp基因序列进行优化,将其中40个大肠埃希菌稀有密码子变换成同义偏爱密码子,构建优化后的MCLV cp基因的原核表达载体p GEX4T-MCLV CP并转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经0.1 mmol/L IPTG诱导及SDS-PAGE电泳鉴定,实现了融合蛋白GST-MCLV CP在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达。通过SDS-PAGE纯化后切胶回收原核表达的融合蛋白GST-MCLV CP,以其为抗原免疫新西兰大白兔制备MCLV CP的多克隆抗体,经间接ELISA法测定该抗血清的效价为1∶4 096,Western blot检测其能与MCLV发生特异性反应。用制备的抗血清对MCLV感染阳性的桑叶样品进行间接ELISA检测,其检出率仅为25%,但将桑叶样品的粗汁液煮沸处理后能显著提高MCLV的检出率,检出率达83.3%。

大豆蛋白/超细涤纶特高支抗皱纱的开发

大豆蛋白纤维具有许多优良的服用性能,但存在抗皱性和尺寸稳定性差的缺陷。文章介绍了开发大豆蛋白/超细涤纶高档特高支抗皱纱线的纺纱工艺流程和工艺参数。

辣椒疫霉PcCRN20-C蛋白的表达纯化及结晶

CRN(crinkling and necrosis-inducing protein)为疫霉菌在与寄主互作过程中分泌的一类特有胞质效应因子,干扰寄主细胞正常的生理代谢和功能。采用PCR法从辣椒疫霉LT1534菌株c DNA中克隆PcCRN20-C基因。该基因序列长783bp,编码261个氨基酸。构建重组表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。在优化条件下诱导表达重组蛋白,利用Ni-NTA金属螯合层析、离子交换层析、分子筛层析和胰蛋白酶酶解技术获得高纯目的蛋白,SDS-PAGE分析表明,蛋白质分子量约为25kDa。采用座滴气相扩散法进行晶体制备和筛选,成功获得了蛋白质晶体,并通过X-射线衍射仪收集了晶体衍射花样。结合蛋白质晶体学方法,获得了有衍射的辣椒疫霉PcCRN20-C蛋白晶体,为进一步研究CRN蛋白的结构与病原菌致病机制提供参考资料。