以壳聚糖纳米微球为载体的Crisp1-DNA避孕疫苗的制备及体外表达

目的构建以壳聚糖纳米微球为载体的Crisp1DNA疫苗,对其物理学、生物学活性进行测定,并评估其在COS-7细胞中的表达情况及细胞毒性。方法采用本实验室前期构建的真核表达质粒pcDNA3.1-Crisp1,以复凝法制备载Crisp1DNA疫苗的壳聚糖纳米粒(CS/DNA NPs),用透射电镜以及凝胶阻滞分析对其相关物理学、生物学活性进行测定,然后将载Crisp1DNA疫苗的壳聚糖纳米粒转染至COS-7细胞,检测其细胞毒性,并用间接免疫荧光法鉴定其在细胞内的表达情况。结果透射电镜结果显示纳米粒形态较均一,平均粒径为189.3nm,Zeta电位约为+0.2mV。凝胶阻滞分析显示壳聚糖微粒可将DNA疫苗完全阻滞于加样孔中并保护DNA质粒不降解。MTT试验显示壳聚糖组细胞存活率显著高于脂质体组(P<0.01)。间接免疫荧光实验结果显示CS/DNA NPs能在COS-7细胞中有效表达Crisp 1抗原蛋白。结论由壳聚糖纳米微球介导的Crisp1DNA疫苗,可在真核细胞中有效地表达,且具有较小的细胞毒性,为进一步发展安全有效的DNA避孕疫苗打下了基础。

CRISP1在性腺中的定位和表达及其生殖调节功能的研究进展

富含半胱氨酸分泌蛋白1(CRISP1)已被证实参与了受精过程中的多个步骤,其在性腺中的定位及表达因物种不同而异。CRISP1有两种不同的形式,分别以不同的机制与精子结合进而参与了精子获能、精子-透明带结合及精卵融合的调控,还有研究发现CRISP1可能成为无精症诊断的标志物。目前CRISP1已成为避孕干预领域中具有前景的靶点。现就CRISP1在人及不同动物性腺中的定位、表达及其生殖调节功能的相关研究进展进行综述。

小鼠附睾小体特异性mRNA传递入N2a和TM4细胞的研究

目的:研究小鼠附睾小体特异性mRNA能否递入Neuro-2a(N2a)及TM4细胞中,为探讨附睾小体mRNA功能提供实验依据。方法:通过RT-PCR检测附睾特异性基因(Adam7、Crisp1、Defb22、Wfdc2、Wfdc9)在成年雄性BALB/c小鼠睾丸、附睾、附睾小体和精子中,以及在人睾丸、精浆小体和精子中的存在情况。通过低速离心、过滤、超速离心方法分离BALB/c小鼠附睾小体,通过PKH26进行荧光标记,与饥饿培养24 h的N2a和TM4细胞共孵育1 h,分别以未标记PKH26的附睾小体组、无附睾小体的加PKH26染料组、未加附睾小体和PKH26染料阴性组作为对照,观察附睾小体是否与N2a和TM4细胞融合并被摄取。通过RT-PCR对共孵育1 h后N2a和TM4细胞进行附睾特异性基因的检测。结果:Adam7和Crisp1在小鼠附睾、附睾小体和精子中存在,睾丸中无表达,在人精浆小体和精子中存在,睾丸中无表达。PKH26和hoechst33258荧光双标结果显示小鼠附睾小体与N2a和TM4细胞融合并被摄取,RT-PCR结果表明共孵育1 h后N2a和TM4细胞可以检测到Adam7和Crisp1基因的mRNA。Western印迹结果显示与附睾小体孵育后的N2a和TM4细胞可以检测到CRISP1蛋白。结论:附睾小体可传递附睾特异性mRNA Adam7和Crisp1进入到细胞中,其中Crisp1可能被翻译成蛋白,其功能和意义有待进一步研究。

基于数据挖掘的TQZ-1A故障诊断研究

为了解决惯性领域内"数据丰富知识贫乏"的问题,建立一个基于数据挖掘的智能故障诊断系统,并重点围绕其中的数据挖掘环节展开研究。以全姿态组合陀螺TQZ-1A为研究对象,运用Clementine12.0工具,借鉴CRISP-DM行业标准,构建了基于两阶段聚类并做改进的C5.0模型。经过模型评价指标的综合评估验证了模型良好的预测性能,说明所建立的模型是科学的,适用于工程实践。