番红花(Crocus sativus L.)组织培养的初步研究

目的初步探讨番红花组织培养的一些影响因素。方法采用组织培养技术,以番红花幼嫩的叶片为外植体对其愈伤组织及不定胚的诱导进行了研究结果MS+BA0.1mg/L+2,4-D2mg/L为诱导愈伤组织形成的最佳培养基,而诱导不定胚的最佳培养基为MS+BA1.5mg/L+2,4-D2mg/L。结论基本明确了番红花愈伤组织及不定胚诱导的最佳激素组合。

黄瓜（Cucumis sativus L．）组织培养与诱导四倍体再生植株

应用杨行黄瓜、长春密刺、农大秋光和杂种群丰、津研四号、津杂四号等黄瓜的子叶、真叶、茎段为外植体，离体培养诱导再生植株。比较了细胞分裂素（ＫＴ）与不同浓度的２，４－Ｄ和ＮＡＡ配比对诱导黄瓜愈伤组织的影响，及其所产生的愈伤组织分化培养的成苗率。所得结果表明：黄瓜在组织培养再生植株时，对生长激素极为敏感，只需极低浓度的２，４－Ｄ或ＮＡＡ即能诱导大量愈伤组织。激素浓度增高，出愈率提高，愈伤组织增殖加快，但分化能力下降。ＮＡＡ诱导成的愈伤组织比２，４－Ｄ诱导的易于分化。在诱导愈伤组织及胚性细胞发生时加入５００ｍｇ·Ｌ－１的秋水仙素经振荡液体培养４８，７２，９６ｈ再进行分化培养，出苗率分别为２５．６％、１８．５％、０．９％，对照为４６．８％。再生植株中３．５％～４．５％为四倍体，秋水仙素在分化培养中有抑制作用，处理９６ｈ的则很少分化再生植株。

藏红花的研究进展

藏红花是一名贵的中草药 ,论述了其国内外研究进展 ,分析了藏红花资源短缺的问题 ,提出了解决途径 ,并对藏红花的进一步研究进行了展望。

藏红花细胞悬浮培养体系的建立及优化

基于诱导的藏红花细胞系,通过摇瓶法,优化了其液体培养基、接种量和种龄等培养条件,以建立藏红花细胞悬浮培养体系。结果表明,将生长在固体培养基上的藏红花愈伤组织接种在MS液体培养基(添加了2mg/L2,4-D,1mg/L6-BA和300mg/LCH)中,于(22±0.3)℃,120r/min的摇床上,暗培养30d,便可获得藏红花的悬浮细胞系。经优化其培养基、接种量和种龄,将种龄为20d的细胞系,按照5%接种量接种在液体B5培养基(添加了2mg/LNAA,1mg/L6-BA和300mg/LCH)中,于(22±0.3)℃,120r/min的摇床上,培养36d,细胞生物量(13.4g/L)和藏红花素产量(0.91g/L)均达到最高。本研究建立的藏红花细胞悬浮培养体系为其生物反应器放大培养奠定了基础。

西红花高产栽培技术研究

崇明是沪郊西红花主要生产基地之一 ,但由于受繁殖系数、栽培技术、病害等因素的制约 ,发展速度缓慢。为此我们就西红花高产栽培中的几个关键问题进行了专门研究 ,并取得明显成效 ,对西红花不同大小球茎的产花量、播种期、留芽数、栽种密度以及病害防治等高产配套环节有了较充分的认识 。

西红花愈伤组织的诱导与花柱愈伤组织的继代、悬浮培养

以西红花的球茎、叶片和花柱为外植体诱导愈伤组织 .叶片诱导培养形成白色膨大组织 ,球茎培养得到松散型白色愈伤组织 ,诱导球茎愈伤的培养基为 5mg/L 6 BA +8mg/LNAA ,在球茎愈伤组织中的紫外部分没有检测到西红花甙、西红花醛和西红花苦甙 .在花柱愈伤组织中检测到西红花醛 ,适合于继代和悬浮培养 ,经悬浮培养后 ,在培养液中可检测到西红花醛和西红花苦甙 ,悬浮培养有利于次生代谢的积累 .

植物组培脱毒技术及其在药用植物藏红花中的应用

植物组培脱毒技术可以脱除患病毒病植株的病毒,起到植株复壮,提高产量及质量的作用。综述了植物组织培养脱毒的技术方法及其近几年的应用情况,同时针对药用植物藏红花脱毒球茎培育中应用的脱毒技术做了总结及探讨。

诱导子对藏红花悬浮培养细胞生产藏红花色素的影响

考察壳聚糖(chitosan)、壳寡糖(chitosan oligosaccharides,COS)、茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MJ)、水杨酸(salicylic acid,SA)和Cu2+等诱导子对藏红花悬浮培养细胞生长和藏红花色素合成的影响。结果表明:在实验考察浓度范围内,壳寡糖(1～500 mg/L)和较低浓度壳聚糖(≤10 mg/L)、MJ(≤10μmol/L)、SA(≤10μmol/L)和Cu2+(≤1μmol/L)对细胞生长无显著影响;较高浓度壳聚糖(≥100 mg/L)、MJ(≥100μmol/L)、SA(≥100μmol/L)和Cu2+(≥10μmol/L)显著抑制细胞生长。5种诱导子对藏红花色素合成的诱导效果不同,并且与诱导子作用浓度和添加时间有关。MJ诱导效果最好,在细胞培养第0天添加终浓度100μmol/L MJ,藏红花色素含量(以1克干细胞计)达到28.57 mg,比对照提高177.9%。其次是Cu2+,在细胞培养第4天添加终浓度500μmol/L Cu2+,色素含量达到19.82 mg,比对照提高108.2%。再次是壳聚糖和壳寡糖,在细胞培养第14天分别添加终质量浓度100mg/L壳聚糖和壳寡糖,色素含量分别达到18.33和17.39 mg,比对照提高69.1%和69.0%。最后是SA,在细胞培养第14天添加终浓度10μmol/L SA,色素含量达到14.65 mg,比对照提高45.4%。

离体培养下番红花花柱-柱头状物再生的研究

番红花(Crocus sativus L.)幼花被和幼花柱可以诱导花柱-柱头状物的再生,长度为24mm 的花芽上分离的花被具有最高的诱导频率(37.5%);花被外植体附加 K5 mg/L 和NAA 4mg/L 有利于再生花柱-柱头状物,频率达到35.3%;附加6-BAP 7 mg/L 和 NAA9mg/L 则有利于柱头状物的大量形成。

藏红花愈伤组织诱导及其细胞培养的研究

藏红花幼叶愈伤组织的诱导频率在ＭＳ，Ｂ５和Ｗｈｉｔｅ三种培养基上均高达９８％；幼叶和芽的诱导率差异不大，高达９９％；不同时期的叶片差异较大，以幼叶诱导为佳；球茎诱导率为近８０％；激素配比以２．４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡＰ０．１～０．５ｍｌ／Ｌ为宜。在继代培养阶段，ＭＳ比Ｂ５和Ｗｈｉｔｅ更适合细胞的快速生长繁殖；并且以叶片的愈伤组织生长较快，芽次之，球茎最慢，适合于细胞生长的激素配比为ＮＡＡ２．０～３．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡＰ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ为宜。

西红花对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究

目的:优化构建抗抑郁研究的细胞实验模型,探讨西红花对皮质酮(CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法:观察不同浓度(0、125、250、500、750、1 000μmol/L)皮质酮损伤PC12细胞24 h、36 h、48 h,CCK-8检测细胞活力,优化构建抑郁体外模型;不同浓度(2. 5、5、10μg/m L)西红花预处理PC12细胞24 h,CCK-8检测细胞活力,观察西红花对CORT(500μmol/L)细胞损伤后的保护作用;检测细胞培养上清中的LDH活性,判断药物对细胞膜的保护作用;使用Annexin V-FITC/PI双染色法检测药物对CORT诱导的PC12细胞凋亡的保护作用;检测细胞裂解液中Caspase-3活性,判断药物作用与Caspase蛋白通路相关性。结果:CORT(0～1 000μmol/L)作用PC12细胞,细胞存活率随药物浓度的增加而逐渐降低,依剂量呈线性关系;当西红花浓度> 100μg/m L时,对PC12细胞存活的影响出现统计学意义;西红花预处理后,细胞存活率由模型组(53. 31±4. 18)%,上升为(57. 46±2. 76)%、(60. 48±2. 73)%、(61. 99±3. 05)%、(61. 38±2. 26)%、(59. 46±2. 41)%、(58. 64±3. 74)%;西红花预处理组LDH释放量显著低于模型组(P <0. 05);西红花能够明显抑制CORT诱导的PC12细胞凋亡,西红花可抑制Caspase-3的表达。结论:西红花对CORT诱导的PC12细胞有一定保护作用。

西红花组织培养研究进展

为了研究人工繁育西红花种球的途径,笔者综述了国内外30多年以来的西红花组织培养研究进展,发现利用不同的外植体都有诱导形成小球茎或完整植株的报道,但是其诱导周期长、诱导率较低,未见进行大规模产业化生产的报道。因此,今后应该着重于研究如何缩短诱导周期,提高诱导率、增殖率,加快大球茎培育进程,并进行花器官和子房的组织培养研究,提高柱头状物诱导率,加强细胞大规模培养技术研究,推动次生代谢产物生产的规模开发。笔者就西红花组织培养的研究成果进行了归纳与综述,并对西红花组培进展进行了展望,以期为中国西红花种球规模化和产业化生产提供参考。

西红花花瓣化学成分研究

采用硅胶、制备HPLC等柱色谱方法对鸢尾科植物西红花(Crocus sativus L.)花瓣的化学成分进行分离,通过NMR、MS等波谱技术鉴定化合物结构,分离鉴定了9个化合物,分别为:苯乙醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1),苄醇-1-O-[6′-O-(S)-3′′-羟基-3′′-甲基戊二酸单酯]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2),苯乙醇-1-O-[6′-O-(S)-3′′-羟基-3′′-甲基戊二酸单酯]-β-D-吡喃葡萄糖苷(3),4-羟基苯甲酸-4-O-α-L-吡喃鼠李糖-1-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(4),4-羟基苯甲酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5),菠甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),山柰酚(7),山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8),山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)。其中,化合物4为新化合物,化合物1~3,5~6均为首次从该植物中分离得到。体外活性初步评价了化合物1~9对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用,化合物2~5具有中等神经保护作用。

离体培养藏红花细胞合成的藏红花色素稳定性

研究pH、温度、光照、氧化剂、还原剂、食品添加剂和金属离子对离体培养的藏红花细胞合成的藏红花色素稳定性的影响,并与藏红花柱头色素进行比较。结果表明:藏红花细胞合成的色素与柱头色素均为水溶性色素,呈亮黄色,对食品添加剂(食盐、柠檬酸、蔗糖、苯甲酸钠)和H2O2表现出良好的稳定性。与柱头色素相比,藏红花细胞合成的色素对强酸(pH1)、高温(80、100℃)和光照(日光灯光、紫外光)表现出更好的稳定性,对VC和Cu2+(0.001mol/L)的稳定性略差。稀碱溶液(0.47mol/LNa2CO3、0.1mol/LNaOH)、Na2SO3、Fe2+(0.050mol/L)和Fe3+能使细胞合成的色素色强增强。

磷对悬浮培养的西红花细胞生长和色素合成的影响

研究了磷对悬浮培养的西红花细胞生长、色素合成和主要营养物质吸收利用的影响。结果表明：不同初始磷浓度（低磷0.272 mmol/L、中磷0.544 mmol/L、高磷0.816 mmol/L）下西红花细胞均经历延滞期（0~3 d）、快速生长期（低、中磷3~15 d,高磷3~12 d）、稳定期（低、中磷15~21 d,高磷12~18 d）和衰亡期（低、中磷21~39 d,高磷18~39 d）这4个阶段,生长曲线呈S形。培养过程中比生长率呈下降趋势,磷对比生长率有一定影响。培养前9 d高磷下比生长率最高,中磷次之,9 d后高磷下的比生长率快速下降,中磷最高。进入快速生长期色素开始合成,到衰亡期色素仍继续合成,并且色素含量达到最高,随后色素开始降解,含量下降,色素合成期比细胞生长期长。因此,西红花细胞培养过程中色素合成与细胞生长不完全同步,属于部分耦联型。培养过程中色素比合成率呈上升趋势,磷对色素比合成率有一定影响。中磷浓度下色素比合成率最高。在快速生长期前期（6 d）质量分数95%蔗糖被降解为葡萄糖和果糖而被细胞吸收利用,培养18 d时质量分数85%葡萄糖被吸收利用,21 d时质量分数85%果糖被细胞吸收利用。培养3 d时胞外摩尔分数95%NH＋4被细胞迅速吸收利用,而NO-3吸收利用较为缓慢,21 d时摩尔分数80%NO-3被吸收利用。提高初始磷浓度,果糖和NO-3的吸收利用速率亦随之提高,同时发现提高NO-3的吸收利用速率是提高色素合成能力的关键,高磷条件下细胞对NO-3的吸收利用速率显著提高。稳定期后期80%以上的营养物质被吸收利用,碳、氮源的不足影响了细胞生长,但对色素合成影响不大。

西红花组织培养研究进展

西红花是一种名贵的中草药,其传统方法繁殖不能满足市场需求,近年来研究者们尝试以西红花作为外植体,探索其组织培养方法。该文从外植体、培养基、培养条件等不同方面论述西红花国内外研究进展,以期系统了解并科学指导该领域的研究。

正交优化西红花组培快繁优化

以西红花带芽的球茎切块为外植体,采用正交实验,通过极差分析、方差分析和多重比较,优选愈伤组织诱导条件、丛生芽增殖条件和球茎诱导条件。结果表明:适宜愈伤组织诱导培养基为1/2MS+NAA 2.0 mg/L+6-BA 0.4 mg/L;丛生芽增殖培养基为1/2MS+NAA 0.6mg/L+6-BA 2.0mg/L;球茎诱导培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+10%香蕉汁。