凝血酶在体外血栓制作中的应用:对降解时间的影响及其机制

目的观察体外在血栓制作中应用凝血酶对血栓溶解性的影响及其机制;对血浆纤维蛋白原水平与血栓中交联纤维蛋白含量进行相关分析,预测血栓溶解性的价值。另外,提出一种精确测定血栓中交联纤维蛋白含量的方法。方法 (1)红细胞比容35%～45%的健康人新鲜静脉血10 ml,平分为5份,取其中4份,3份分别加入高(75 u/ml)、中(50 u/ml)、低浓度(25 u/ml)凝血酶,1份加入生理盐水作为对照,摇匀,置于37℃水浴箱中3 h,使其凝固形成血栓。(2)剩余的1份血标本,应用Clauss法检测人血纤维蛋白原水平。(3)观察4组血栓之间机械性能的差别,包括弹性和塑性。(4)每个血栓分别切取一部分,修剪成重量为150 mg的正方体,磷酸缓冲液冲洗后,置于纤溶酶溶液中,在37℃水浴箱中孵育振荡,肉眼观察血栓降解过程。(5)记录血栓降解时间(包括血栓块消失时间和交联纤维蛋白絮状物消失时间),离心,取上清液,保存于-20℃。(6)解冻上清液,用蒸馏水稀释,应用酶联免疫法检测D二聚体浓度。(7)根据D二聚体浓度计算血栓中交联纤维蛋白含量。(8)对4组血栓交联纤维蛋白含量进行方差分析并两两比较;对4组血栓降解时间进行秩和检验并两两比较;对血浆纤维蛋白原水平与高凝血酶组血栓中的交联纤维蛋白含量进行相关分析。结果无凝血酶组血栓韧性差,易碎;应用凝血酶的3组血栓均具有良好的韧性。与无凝血酶组相比,高、中、低浓度凝血酶组血栓的降解时间和交联纤维蛋白含量均显著增加(P均<0.01);高、中浓度凝血酶组与低浓度凝血酶组相比,血栓的降解时间和交联纤维蛋白含量均显著增加(P均<0.01);高浓度凝血酶组与中浓度凝血酶组之间相比,血栓降解时间和纤维蛋白含量差异无统计学意义(P均>0.05)。血浆纤维蛋白原水平与高浓度凝血酶组血栓的交联纤维蛋白含量呈直线相关(r=0.681,P<0.001)。结论在体外溶栓实验中,应用凝血酶能通过增加血栓交联纤维蛋白含量延长血栓降解时间;在制作血栓时,凝血酶浓度的适宜范围为25 u/ml～50 u/ml,高于此浓度不能使血栓的韧性和降解时间进一步增加。血浆纤维蛋白原浓度越高,形成的血栓所含交联纤维蛋白含量越多,因此,血浆纤维蛋白原水平可作为预测血栓溶解性的指标。