金属离子和变性条件对野花生豆凝集素活性和构象的影响

野花生豆凝集素在pH7.0和pH5.0缓冲体系中,用EDTA去除其金属离子,CML凝血活性下降.Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+可使去除金属离子CML活性基本恢复到天然水平,表明这些二价金属离子为CML活性所必需.研究不同温度和不同浓度盐酸胍条件下CML的圆二色谱、荧光光谱及其凝血活性的变化,结果表明CML含有较多β 折叠,具有较强的抗变性能力;脲变性的时间扫描荧光光谱证实了CML变性过程的阶段性.

野花生豆凝集素半胱氨酸残基的研究

将野花生豆经浸取、硫酸铵分级沉淀、猪胃粘蛋白 Sepharose 4B亲和层析和SephacrylS 2 0 0HR分子筛层析后 ,可得到对人类A型血专一凝集的野花生豆凝集素 (CrotalariamucronataLectin ,CML) .纯化的CML在PAGE和SDS PAGE中均显示单一蛋白带 .在含 8mol/L脲和不含脲的缓冲体系中 ,分别用NEM修饰CML中的半胱氨酸残基 ,经计算被修饰巯基数目分别为 3 1个和 3 2个 ,且修饰后的CML的活性仍不丧失 .通过NR/R单向SDS PAGE和NR/R双向对角线SDS PAGE研究 ,发现CML不含二硫键 ,表明CML中的半胱氨酸残基既与CML的凝集活性无关 。

野花生豆凝集素寡糖链的结构研究

为了探讨凝集素的分子识别机制，对Ａ型血专一性凝集素———野花生豆凝集素的寡糖链结构进行了研究。纯化的野花生豆凝集素（ＣＭＬ）用肼解法释放出肽链上的寡糖链，经离子交换层析和纸层析去除肽链和其它小分子物质后，再用ＮａＢＨ４还原寡糖链的还原末端残基，经ＢｉｏＧｅｌＰ４凝胶柱过滤可分离出ＣＭＬ分子上的４个主要寡糖链。将其分别进行甲醇解反应，最后制成三甲基硅醚衍生物，用气相色谱法分析其糖基组成。结果表明，ＣＭＬ分子中含４种寡糖链，其糖基组成分别为，寡糖Ⅰ：Ｇａｌ８Ｇｌｃ５ＧａｌＮＡｃ２，寡糖Ⅱ：Ｇａｌ４Ｇｌｃ３ＧａｌＮＡｃ２，寡糖Ⅲ：Ｍａｎ２Ｇａｌ６Ｇｌｃ４ＧａｌＮＡｃ２ＧｌｃＮＡｃ２，寡糖Ⅳ：Ｍａｎ２Ｇａｌ６Ｇｌｃ４ＧａｌＮＡｃ２。