巴豆叶对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区JNK蛋白表达的影响

目的探讨巴豆叶对脑缺血再灌注模型大鼠海马CA1区c-Jun-氨基末端激酶(JNK)通路的影响。方法将216只SD雄性大鼠按随机数表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组、巴豆叶低、中、高浓度组,各组按取材时间点不同又分为1 d、3 d和7 d亚组,尼莫地平组灌胃尼莫地平混悬液1.08 g·L^(-1),巴豆叶低、中、高浓度组灌胃药物浓度分别为60 g·L^(-1)、120 g·L^(-1)、180 g·L^(-1),假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,2次/d。以Garcia JH评分法进行神经功能评测,HE观察神经元形态;TUNEL法检测大鼠海马CA1区细胞凋亡;Western blot检测蛋白表达。结果1)神经功能评分:同一处理时间下,模型组和各干预组评分较假手术组均降低(P均<0.01);各干预组评分较模型组均升高,随着干预浓度的增加,评分也逐渐升高,尼莫地平组评分高于低、中浓度组(P均<0.01);除假手术组外,各组评分均随着干预时间的延长升高(P均<0.01)。2)HE染色:模型大鼠神经细胞出现不同程度的损伤;各药物干预组均能不同程度改善损伤;随着干预浓度的增加,修复程度也逐渐明显,尼莫地平组效果优于中、低浓度组;各干预组细胞形态均随着干预时间的延长明显改善。3)凋亡细胞计数:在各干预时间下,模型组及各干预组凋亡计数较假手术组均升高(P均<0.01);各干预组较模型组,计数均下降(P均<0.01);随着巴豆叶浓度的增加凋亡计数下降,且尼莫地平组高于中浓度组(P均<0.01)。4)Western blot检测:在各干预时间下,模型组及各干预组蛋白表达较假手术组均显著升高(P均<0.01);各干预组较模型组,蛋白表达下降(P均<0.01);随着浓度的增加蛋白表达下降,尼莫地平组低于中浓度组(P均<0.01);除假手术组外,各组大鼠蛋白表达均随着时间变化在1~7 d逐渐降低(P<0.01),且各时间点差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论巴豆叶能下调JNK通路蛋白的表达,有效改善大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损、抗海马CA1区细胞凋亡。

巴豆叶对缺血性脑卒中的防治

巴豆叶的药用记载及现代药理研究均表明巴豆叶有助于防治缺血性脑卒中,且毒性小于巴豆种仁。故详细梳理巴豆叶与缺血性脑卒中的关联,为进一步探究巴豆叶对缺血性脑卒中的影响及作用机制提供理论基础,以期拓宽大戟科植物——巴豆在缺血性脑卒中的应用价值。

巴豆叶提取物在人肠道菌群中的体外代谢研究

目的:分析巴豆叶提取物中的成分在正常人体肠道菌群中的代谢变化。方法:运用超高效液相色谱分离与电喷雾(ESI)质谱技术对巴豆叶提取物的代谢产物进行分析鉴定。结果:通过质谱分析,巴豆叶提取物中3-Deoxo-3-hydroxyphorbol-12,13,20-triacetate,12-O-Tiglylphorbol-13-isobutyrate,Crotignoid K,Crotignoids J等佛波醇酯类化合物被肠道菌群代谢比较明显。结论:研究结果为探索巴豆叶提取物的体内代谢过程奠定了较好的基础。

巴豆叶对脑缺血再灌注模型大鼠海马CA3/DG区ERK5通路的影响

目的:探讨巴豆叶对脑缺血再灌注模型大鼠海马CA3/DG区ERK5通路的影响。方法:将216只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组(0.01 g·kg^(-1))及巴豆叶低(0.6 g·kg^(-1))、中(1.2 g·kg^(-1))、高(1.8 g·kg^(-1))剂量组,除假手术组外,其余组大鼠采用Longa线栓法制备缺血再灌注损伤模型,并分别于造模前30 min及造模后的6 d给予相应药物干预,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每天2次,Garcia JH评分法对大鼠的神经功能进行评测;HE染色观察神经元形态;TUNEL法检测大鼠海马CA3/DG区细胞凋亡情况;Western Blot检测海马组织细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)、p-ERK5、p-ERK5/ERK5蛋白表达水平;免疫组织化学法检测大鼠脑组织ERK5蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著降低(P<0.01),海马CA3/DG区细胞凋亡显著增加(P<0.01),ERK5、p-ERK5蛋白表达水平及ERK5阳性细胞计数显著上调(P<0.01);与模型组比较,各干预组大鼠神经功能评分均显著升高(P<0.01),海马CA3/DG区细胞凋亡显著降低(P<0.01),而ERK5、p-ERK5蛋白表达水平及ERK5阳性细胞计数进一步显著上调(P<0.01),且呈剂量依赖性。除假手术组外,随着干预时间延长,各组大鼠神经功能评分显著升高(P<0.01),海马CA3/DG区细胞凋亡显著降低(P<0.01),ERK5、p-ERK5蛋白表达水平及ERK5阳性细胞计数在第1天至第3天呈上升趋势,第3天至第7天呈下降趋势。模型组大鼠神经细胞均出现不同程度的核固缩、核体不规则、细胞间隙增大、间质水肿、核质排列不清等细胞损伤,给予药物治疗后得到不同程度的改善,尤以巴豆叶高剂量干预7 d时效果最明显。结论:巴豆叶能上调ERK5通路蛋白的表达,有效改善大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损及海马CA3/DG区细胞凋亡。

巴豆叶对脑缺血再灌注大鼠海马组织ERK1/2蛋白表达的影响

目的探讨巴豆叶对脑缺血再灌注模型大鼠海马组织ERK1/2蛋白表达的影响。方法将216只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组及巴豆叶低、中、高剂量组,每组36只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MACO)模型。巴豆叶高、中、低剂量组灌胃巴豆叶水煎液0.06、0.12、0.18 g/ml,尼莫地平组灌胃尼莫地平混悬液1.08 g/L,假手术组和模型组灌胃等体积的生理盐水。连续给药7 d后,以Garcia JH评分法进行神经功能评分,HE染色观察海马神经元形态,TUNEL法检测海马CA3/DG区细胞凋亡,Western Blot检测海马ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达。结果与同时点模型组比较,巴豆叶低、中、高剂量组神经功能评分升高(P<0.01),凋亡细胞数降低(P<0.01),海马p-ERK1/2/ERK1/2[1 d:(0.22±0.03)、(0.34±0.02)、(0.46±0.01)比(0.19±0.02);3 d:(0.38±0.02)、(0.50±0.02)、(0.68±0.02)比(0.27±0.02);7 d:(0.29±0.03)、(0.43±0.02)、(0.59±0.02)比(0.21±0.03)]蛋白表达上调(P<0.01)。结论巴豆叶可上调ERK1/2通路蛋白表达,有效改善MCAO大鼠神经功能损伤,减少海马CA3/DG区细胞凋亡。