体外透析两步酶解法测定菜粕粗蛋白消化适宜酶促反应条件的建立

通过建立体外透析胃蛋白酶 胰酶制剂两步酶解法测定菜粕粗蛋白消化率的标准测定步骤及适宜酶促反应条件 ,并研究在所建立条件下测得菜粕粗蛋白体外与体内消化率间的相关关系。结果表明 ,建立适宜酶促反应条件为 :1g菜粕在 10mL胃蛋白酶溶液 (10mg·mL-1)、pH2 .0、37℃条件下水解 1h ,调至中性后转入透析袋内 ,再加入 10mL胰酶溶液 (4mg·mL-1) ,在 0 .0 1mol·L-1、pH 7.5、37℃磷酸缓冲溶液中水解 2 4h ,期间更换 5次缓冲液。菜粕干物质和粗蛋白体外消化率与相应回肠表观 (真 )消化率之间显著相关 (r=0 .86～ 0 .99) ,粗蛋白体外消化率与赖氨酸、苏氨酸回肠表观 (真 )消化率与蛋氨酸回肠表观消化率之间显著相关 (r=0 .80～ 0 .87)。

荧光定量PCR法鉴定粗胰酶来源质控方法研究

通过基于荧光定量PCR方法鉴定粗胰酶种属来源,用于胰激肽原酶和弹性酶药品生产企业的原料验收和质量控制。该方法采用荧光定量PCR法,针对猪、牛、绵羊、山羊基因组特有的基因序列设计引物与探针,采用聚合酶链式反应对目标基因进行扩增,利用扩增曲线的Ct值绘制标准曲线,通过未知样品的Ct值对未知样品初始模板中的基因进行鉴定。结果显示,该方法在实验室条件下具有较好的专属性和耐用性,可保证被检基因的真实性、原始性、完整性。