一种新型Cry1Bd蛋白及其原核表达

Cry1B对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有特异的杀虫活性,但是目前对其研究相对较少。不断发掘新的Cry1B蛋白并研究其杀虫机制能够为农业害虫的生物防治提供依据。前期鉴定出一种新的cry1Bd基因,将其命名为new-cry1Bd。首先,将new-Cry1Bd蛋白与其他Cry1B家族蛋白进行亲缘关系对比,确定其所属分支,然后,把该基因克隆至pHT304载体,由cry1Ac基因启动子和终止子调控其在Bt菌株中的表达;另外,为了研究new-Cry1Bd蛋白N端杀虫活性区域的表达稳定性,把其N端编码序列单独克隆至pHT304中,构建类似的表达框架,用于蛋白表达分析。结果发现,new-Cry1Bd蛋白与Cry1Bd分支最为接近;序列比对结果显示,new-Cry1Bd蛋白与Cry1Bd1蛋白仅相差3个氨基酸(S572、E1147和L1227),其中,只有第一个差异位点位于N端活性区域,该蛋白及其N端部分(new-Cry1Bdhalf)均能在Bt菌株中表达,但其表达产物的可溶性差异较大,约有1/2的new-Cry1Bd蛋白表达产物可以溶解于Na2CO3溶液,而大部分new-Cry1Bdhalf蛋白无法溶解。结果表明,new-Cry1Bd蛋白是一种新型的Cry1Bd蛋白,这是对Cry1B蛋白家族成员的补充;同时,该蛋白的成功表达,可为后期研究其杀虫活性和机制奠定基础。