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转基因抗虫耐除草剂玉米瑞丰125 Cry1Ab/Cry2Aj杀虫蛋白的时空表达分析 被引量:3
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作者 李东阳 肖冰 +3 位作者 王晨尧 杨现明 梁晋刚 吴孔明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期31-39,共9页
玉米是我国最重要的粮食作物之一,虫害会造成严重的品质和产量损失,转Bacillus thuringiensis(Bt)基因抗虫玉米为玉米害虫的防治提供了新途径。转Bt基因抗虫玉米的抗虫性与外源杀虫蛋白表达量具有密切的关系,明确Bt杀虫蛋白在不同生育... 玉米是我国最重要的粮食作物之一,虫害会造成严重的品质和产量损失,转Bacillus thuringiensis(Bt)基因抗虫玉米为玉米害虫的防治提供了新途径。转Bt基因抗虫玉米的抗虫性与外源杀虫蛋白表达量具有密切的关系,明确Bt杀虫蛋白在不同生育期和不同器官中的表达量,对害虫的综合防治和农业转基因生物安全管理具有重要意义。连续两年采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定了9个地点种植的瑞丰125不同器官中Cry1Ab/Cry2Aj杀虫蛋白表达量,对比分析了玉米拔节期(V6-V8)叶片、抽雄期(VT)雄穗、吐丝期(R1)叶片和花丝、成熟期(R4)叶片和籽粒的Bt杀虫蛋白含量,结果表明Bt杀虫蛋白表达量在不同玉米器官中差异较大。2年9个地点的数据整体上呈现出叶片中Cry1Ab/Cry2Aj杀虫蛋白表达量较高,而籽粒中Cry1Ab/Cry2Aj杀虫蛋白表达量较低的规律。9个地点种植的瑞丰125的Cry1Ab/Cry2Aj杀虫蛋白表达量有所差异,但差异整体较小。 展开更多
关键词 转基因抗玉米 瑞丰125 Cry1ab/cry2Aj蛋白 时空表达
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Cry2Ab杀虫蛋白对小地老虎幼虫致死效果及体内酶活性的影响 被引量:15
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作者 陆琼 张永军 +3 位作者 于洪春 曹广春 陆宴辉 郭予元 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期16-20,共5页
为治理小地老虎的危害,研究了Bt杀虫蛋白对小地老虎幼虫的控制作用。室内生物测定结果表明,Cry2Ab杀虫蛋白对小地老虎初孵幼虫的致死效果高于Cry1Ac杀虫蛋白。取食含有Cry2Ab杀虫蛋白人工饲料的小地老虎幼虫体内的中肠总蛋白酶和类胰凝... 为治理小地老虎的危害,研究了Bt杀虫蛋白对小地老虎幼虫的控制作用。室内生物测定结果表明,Cry2Ab杀虫蛋白对小地老虎初孵幼虫的致死效果高于Cry1Ac杀虫蛋白。取食含有Cry2Ab杀虫蛋白人工饲料的小地老虎幼虫体内的中肠总蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性高于对照,当人工饲料中Cry2Ab杀虫蛋白含量达到12μg/g时,小地老虎幼虫中肠氨肽酶活性显著升高;而取食含有Cry1Ac杀虫蛋白人工饲料的小地老虎幼虫中肠蛋白酶活性无显著变化。此外,小地老虎幼虫取食含有Cry2Ab杀虫蛋白的人工饲料后,体内谷胱甘肽-S-转移酶活性显著升高,而取食含有Cry1Ac杀虫蛋白的人工饲料后其变化不明显。 展开更多
关键词 小地老虎 cry2ab杀虫蛋白 中肠蛋白
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Cry1Ac和Cry2Ab杀虫蛋白对粘虫幼虫生长发育的影响 被引量:1
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作者 王雪丽 路子云 +3 位作者 李建成 李贞 董杰 刘小侠 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期875-881,共7页
【目的】为探究Bt杀虫蛋白对次要靶标害虫粘虫Mythimna separata (Walker)(鳞翅目:夜蛾科)的杀虫活性及对其生长发育的影响。【方法】本文通过浸叶法饲喂初孵及2龄末粘虫不同剂量的Cry1Ac及Cry2Ab杀虫蛋白后,观察其死亡率,称量幼虫重,... 【目的】为探究Bt杀虫蛋白对次要靶标害虫粘虫Mythimna separata (Walker)(鳞翅目:夜蛾科)的杀虫活性及对其生长发育的影响。【方法】本文通过浸叶法饲喂初孵及2龄末粘虫不同剂量的Cry1Ac及Cry2Ab杀虫蛋白后,观察其死亡率,称量幼虫重,并统计了幼虫历期、化蛹率、蛹重、蛹期、蛹的羽化率、畸形率等指标。【结果】初孵幼虫取食浸泡含16、64、128μg/mLCry1Ac及Cry2Ab的玉米叶片后,随着时间的延长及浓度的增加,死亡率逐渐增加,且Cry1Ac杀虫蛋白对粘虫的生物活性高于Cry2Ab蛋白,在128μg/mL浓度下,取食Cry1Ac和Cry2Ab蛋白13d时的死亡率分别达到了65%及60%。取食两种蛋白后,初孵幼虫和2龄末幼虫重量均受到显著抑制,短期取食两种蛋白对幼虫历期、化蛹率、蛹重、蛹期、蛹的羽化率、畸形率没有影响。【结论】取食Cry1Ac和Cry2Ab杀虫蛋白后,对初孵幼虫有很好的杀虫活性,且Cry1Ac杀虫活性高于Cry2Ab杀虫蛋白;短期饲喂两种杀虫蛋白时,对2龄粘虫后期生长影响不大。本文结果为转Bt基因作物更好的应用于粘虫的防治提供了理论基础。 展开更多
关键词 Cry1Ac蛋白 cry2ab蛋白 活性 生长发育
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1 Ab22的克隆与表达
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作者 伍金元 冯纪年 张兴 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第1期151-154,共4页
【目的】克隆并表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiens,Bt)杀虫晶体蛋白cry1Ab22基因,为解决昆虫抗性问题提供有效途径,并为构建新型转基因工程菌和转基因植物提供基因材料。【方法】根据GenBank中cry1Ab型基因序列设计1对引物,并加... 【目的】克隆并表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiens,Bt)杀虫晶体蛋白cry1Ab22基因,为解决昆虫抗性问题提供有效途径,并为构建新型转基因工程菌和转基因植物提供基因材料。【方法】根据GenBank中cry1Ab型基因序列设计1对引物,并加入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点。用全长基因PCR产物粘端定向克隆的方法,从苏云金芽孢杆菌S249菌株中扩增到1个苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白cry1Ab型基因cry1Ab22,将其克隆到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌TB1,进行诱导表达,并对表达产物的杀虫活性进行检测。【结果】cry1Ab22基因长度约为3.5 kb;其与已知的cry1Ab3型基因同源性最高,所编码的蛋白质存在5个氨基酸差异。cry1Ab22基因已在GenBank中登录,登录号为EU220269,并被Bt毒素基因国际命名委员会正式命名为cry1Ab22。SDS-PAGE电泳结果表明,cry1Ab22基因表达了170 ku左右的融合蛋白。cry1Ab22蛋白对小菜蛾(Plutella xylostella)的LC50为225.1μg/mL。【结论】S249菌株含有新型的cry1Ab基因,且该基因表达的蛋白具有较强的杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白基因cry1ab22 生物活性
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苏云金芽孢杆菌B-Pr-88菌株中cry2Ab4基因的表达和杀虫活性研究 被引量:18
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作者 李长友 张杰 +3 位作者 宋福平 韩岚岚 李国勋 黄大昉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期634-638,共5页
以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的... 以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的70.7kD蛋白,氨基酸同源性与已公布的cry2Ab基因同源性均为99.8%,经Bt基因国际命名委员会正式命名为cry2Ab4。根据cry2Ab4基因开放阅读框架(ORF)两端序列,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3,PCR扩增获得cry2Ab4完整ORF,与大肠杆菌表达载体pET-21b连接,构建了重组表达质粒pET-2Ab4,质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳证实该基因表达了60kD的蛋白,生物测定表明,Cry2Ab4对棉铃虫和大豆食心虫具有高毒力,同时对小菜蛾和二化螟有一定的杀虫活性,而对亚洲玉米螟和甜菜夜蛾没有杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry2ab4基因 基因克隆 蛋白表达 活性
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Cry1Ab杀虫蛋白在水稻-褐飞虱-拟水狼蛛食物链中转移与富集 被引量:33
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作者 陈茂 叶恭银 +4 位作者 卢新民 胡萃 彭于发 舒庆尧 Illimar ALTOSAAR 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期208-213,共6页
采用ELISA方法检测了2个转 cry1Ab 基因水稻 (Bt水稻) 品系KMD1和KMD2不同生育期叶鞘内Cry1Ab杀虫蛋白的含量及其通过褐飞虱和拟水狼蛛的转移和富集情况。结果表明, 这2个品系中抽穗期和黄熟期叶鞘内Cry1Ab的含量均显著低于苗期、分蘖... 采用ELISA方法检测了2个转 cry1Ab 基因水稻 (Bt水稻) 品系KMD1和KMD2不同生育期叶鞘内Cry1Ab杀虫蛋白的含量及其通过褐飞虱和拟水狼蛛的转移和富集情况。结果表明, 这2个品系中抽穗期和黄熟期叶鞘内Cry1Ab的含量均显著低于苗期、分蘖期和孕穗期, KMD1和KMD2中Cry1Ab杀虫蛋白可以通过食物链转移到Bt水稻非靶标害虫褐飞虱及其天敌拟水狼蛛体内。褐飞虱在KMD1或KMD2上取食2 d后, 体内均含有 Cry1Ab杀虫蛋白, 但连续取食2、4、6、8和10 d后,其体内含量并未因取食时间的延长而呈现明显增加的趋势。当拟水狼蛛捕食以KMD1或KMD2为食的褐飞虱时, 在捕食2、4、6、8和10 d后, 其体内均可检测到Cry1Ab杀虫蛋白, 其含量并未随捕食时间的延长而明显上升, 但均显著高于相应时间褐飞虱体内的含量。可见, 该蛋白可通过水稻转移至褐飞虱, 再转移至拟水狼蛛, 并存在明显的富集现象, 而这种富集并不随蜘蛛捕食时间的延长而加强。拟水狼蛛捕食以KMD1或KMD2为食的褐飞虱时, 其捕食量未受到显著影响, 其中肠酶粗提物对Cry1Ab杀虫蛋白具有明显的降解作用。 展开更多
关键词 BT水稻 CRY1ab蛋白 褐飞虱 拟水狼蛛 食物链 生物富集 解毒
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Bt水稻Cry1Ab杀虫蛋白表达的时间动态及其在水稻土中的降解 被引量:25
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作者 白耀宇 蒋明星 程家安 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1583-1590,共8页
采用ELISA技术检测了Bt水稻克螟稻1号(KMD1)和克螟稻2号(KMD2)不同生育期茎和叶片中cry1Ab基因的表达水平,以及植株组织(茎和叶片)室内埋于不同稻田土壤中其Cry1Ab杀虫蛋白的降解动态。结果表明,不论是KMD1还是KMD2,茎和叶片中cry1Ab基... 采用ELISA技术检测了Bt水稻克螟稻1号(KMD1)和克螟稻2号(KMD2)不同生育期茎和叶片中cry1Ab基因的表达水平,以及植株组织(茎和叶片)室内埋于不同稻田土壤中其Cry1Ab杀虫蛋白的降解动态。结果表明,不论是KMD1还是KMD2,茎和叶片中cry1Ab基因的表达量为3.7~9.1μg/g鲜重,均以拔节期和孕穗期相对较低,灌浆初期显著升高,黄熟期又明显下降(但仍然维持在较高的表达量)。KMD1茎和叶片中Cry1Ab蛋白在3种水稻土即青紫泥田、黄松田和黄筋泥田中的降解,均以前期(处理后12d内)较快,但中后期明显较慢;处理后42d,这两种组织中的Cry1Ab残留量均稳定在μg级水平,分别仅有0.20~0.85μg/g干重和0.35~1.81μg/g干重。KMD1茎和叶片中Cry1Ab蛋白降解动态与土壤类型密切相关,青紫泥田中降解最快,黄筋泥田中次之,黄松田中最慢。淹水可加快土壤中茎和叶的腐解,从而促进其中Cry1Ab蛋白的降解。KMD2粉碎叶中Cry1Ab蛋白在有菌水稻土中的降解快于无菌土中,表明土壤微生物存在可加快Cry1Ab蛋白的降解。在各种土壤淹水与非淹水、灭菌与非灭菌处理条件下的Cry1Ab蛋白降解过程均可用指数方程进行拟合,算得其消减半衰期为2.2~11.6d不等。讨论了土壤类型、淹水等影响Cry1Ab蛋白降解的可能机制,认为土壤微生物是其中起关键作用的一个因子。 展开更多
关键词 BT水稻 CRY1ab蛋白 表达 水稻土 降解
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转Bt基因玉米幼苗残体中Cry1Ab杀虫蛋白田间降解动态 被引量:21
8
作者 邢珍娟 王振营 +1 位作者 何康来 白树雄 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期412-416,共5页
【目的】研究间苗后留在田间地表的转Bt基因玉米幼苗残体中Cry1Ab杀虫蛋白的降解规律,比较两种Bt玉米幼苗残体中Cry1Ab杀虫蛋白的降解速度。【方法】以两种表达Cry1Ab杀虫蛋白的转Bt基因抗虫玉米MON810和Bt11为材料,采用ELISA方法测定... 【目的】研究间苗后留在田间地表的转Bt基因玉米幼苗残体中Cry1Ab杀虫蛋白的降解规律,比较两种Bt玉米幼苗残体中Cry1Ab杀虫蛋白的降解速度。【方法】以两种表达Cry1Ab杀虫蛋白的转Bt基因抗虫玉米MON810和Bt11为材料,采用ELISA方法测定各取样时期中幼苗残体中Cry1Ab杀虫蛋白残留量。【结果】转Bt基因玉米幼苗残体中杀虫蛋白降解是逐渐的,且降解速度较快,到50d时幼苗残体已经完全腐烂,Bt11幼苗残体中的杀虫蛋白已经完全降解,在MON810中还能检测到微量的杀虫蛋白。两种转基因玉米幼苗残体中的Bt杀虫蛋白的初始含量差异不显著,但在同一时间段的Bt杀虫蛋白降解速度存在差异均显著,在30d前MON810幼苗残体中Bt杀虫蛋白降解速度比Bt11降解的快,30d后,则降解趋势相反,到50d取样结束时MON810和Bt11分别降解了初始含量的99.81%和100%。【结论】两种转Bt基因玉米间苗后留在田间的幼苗残体中的Cry1Ab杀虫蛋白降解速度不同,在50d完全腐烂时,其中的杀虫蛋白完全降解或仅有微量残留。 展开更多
关键词 转BT基因玉米 幼苗残体 CRY1ab蛋白 降解
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苏云金芽孢杆菌沉默基因cry2Ab3在大肠杆菌中表达及杀虫活性研究 被引量:10
9
作者 陈中义 李长友 +2 位作者 刘加宝 张杰 黄大昉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期561-566,共6页
对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。... 对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。根据大肠杆菌T7表达载体pET 2 1b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架 (ORF)两端序列 ,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3 ,高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF ,经酶切、连接构建了重组表达质粒pET 2Ab3。表达质粒导入大肠杆菌BL2 1 (DE3 ) ,IPTG诱导后 ,SDS PAGE电泳证实了cry2Ab3的表达。生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性 ,能明显抑制二化螟二龄幼虫生长 ,但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性。进一步提取Cry2Ab3蛋白 ,生测结果表明其对棉铃虫LC50 为 3 2 5 5 μg g。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 沉默基因 cry2ab3 大肠杆菌 表达 活性
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转Bt基因抗虫玉米植株叶腋处花粉中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态 被引量:7
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作者 邢珍娟 王振营 +1 位作者 何康来 白树雄 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期163-166,共4页
以表达Cry1Ab杀虫蛋白的两种转Bt基因抗虫玉米MON810和Bt11为材料,采用ELISA方法研究了玉米散粉时沉积在植株叶腋处Bt玉米花粉中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态,比较了两种Bt玉米花粉中Cry1Ab杀虫蛋白的降解速度.结果表明,Bt玉米花粉中Cr... 以表达Cry1Ab杀虫蛋白的两种转Bt基因抗虫玉米MON810和Bt11为材料,采用ELISA方法研究了玉米散粉时沉积在植株叶腋处Bt玉米花粉中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态,比较了两种Bt玉米花粉中Cry1Ab杀虫蛋白的降解速度.结果表明,Bt玉米花粉中Cry1Ab杀虫蛋白是逐渐降解的,且降解速度逐渐加快.但两种Bt玉米花粉中Cry1Ab杀虫蛋白降解速度不同,MON810中的Bt杀虫蛋白降解较快,而Bt11中的降解较慢.d15时在MON810叶腋处的花粉中已经检测不到Bt杀虫蛋白,而在Bt11花粉中Bt杀虫蛋白到d18才完全降解.两种Bt玉米花粉中杀虫蛋白的初始含量差异显著,且在各个取样时间内Bt杀虫蛋白的残留量存在显著差异.玉米散粉时留在田间的Bt玉米花粉中的Cry1Ab杀虫蛋白不会在自然界累积. 展开更多
关键词 转BT基因玉米 花粉 CRY1ab蛋白 叶腋 降解
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转Bt基因抗虫玉米根茬和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态 被引量:8
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作者 邢珍娟 王振营 +1 位作者 何康来 白树雄 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第23期4970-4976,共7页
【目的】研究转cry1Ab杀虫蛋白基因玉米收获后玉米根茬及其根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解动态,比较两种Bt玉米根茬和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解速度。【方法】以两种表达Cry1Ab杀虫蛋白的Bt抗虫玉米MON810和Bt11为材料,采用ELIS... 【目的】研究转cry1Ab杀虫蛋白基因玉米收获后玉米根茬及其根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解动态,比较两种Bt玉米根茬和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解速度。【方法】以两种表达Cry1Ab杀虫蛋白的Bt抗虫玉米MON810和Bt11为材料,采用ELISA方法测定玉米收获后根茬残体和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态。【结果】转Bt基因玉米根茬残体和根际土壤中杀虫蛋白是逐渐降解的,Bt玉米MON810根茬中Cry1Ab杀虫蛋白含量较高,降解的速度也较慢,收获后8个月时还不能完全降解;Bt玉米Bt11根茬中Cry1Ab杀虫蛋白含量较低,降解速度比MON810根茬中Cry1Ab杀虫蛋白降解速度快,到7个月时已检测不到Cry1Ab杀虫蛋白。Bt玉米MON810根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解较Bt11的慢,MON810和Bt11根际土壤分别在8个月和7个月时检测不到Cry1Ab杀虫蛋白。【结论】种植过Bt11和MON810抗虫玉米的田块,在第二年春播农作物已经出土时,其根茬和根际土壤中残留的Cry1Ab杀虫蛋白尚不能完全降解,还有少量残留。 展开更多
关键词 BT玉米 根茬残体 根际土壤 CRY1ab蛋白 降解
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影响Bt稻离体叶中Cry1Ab杀虫蛋白降解的环境因子研究 被引量:8
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作者 白耀宇 蒋明星 程家安 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期721-727,共7页
目的研究转Bt基因水稻表达的外源Bt杀虫蛋白在土壤中的环境去向,以便进行转BT基因水稻的生态风险性评价。方法室内采用ELISA法,研究转Bt基因水稻克螟稻2号(KMD2)粉碎叶片中Cry1Ab杀虫蛋白在3种水稻土,即青紫泥田、黄筋泥田和黄松田土中... 目的研究转Bt基因水稻表达的外源Bt杀虫蛋白在土壤中的环境去向,以便进行转BT基因水稻的生态风险性评价。方法室内采用ELISA法,研究转Bt基因水稻克螟稻2号(KMD2)粉碎叶片中Cry1Ab杀虫蛋白在3种水稻土,即青紫泥田、黄筋泥田和黄松田土中不同土壤含水量、土壤pH值和温度条件下的降解动态。结果供试叶片粉中Cry1Ab蛋白在3种水稻土中的降解动态均可用一级化学反应动力学指数方程来拟合,降解半消减期t0.5为1.8~4.0d。结论土壤含水量、pH和温度对Cry1Ab蛋白降解速率均有一定影响,但pH和温度的影响更为明显。通常pH较低的酸性土壤和低温不利于土壤中Cry1Ab蛋白的降解,特别是在酸性黄松田中降解最慢。 展开更多
关键词 转BT基因水稻 CRY1ab蛋白 水稻土 降解 影响因子
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取食Cry2Ab蛋白后棉铃虫幼虫中肠组织的病理变化 被引量:3
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作者 高珍 梁革梅 +1 位作者 魏纪珍 张丽丽 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期934-944,共11页
为了明确Cry2Ab杀虫蛋白的作用机制,利用透射电镜观察了棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)3龄末幼虫取食含Cry2Ab蛋白(8μg/g)饲料后中肠的组织病理变化,并与分别取食含Cry1Ac蛋白(0.97μg/g)饲料和正常饲料的棉铃虫进行了比较... 为了明确Cry2Ab杀虫蛋白的作用机制,利用透射电镜观察了棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)3龄末幼虫取食含Cry2Ab蛋白(8μg/g)饲料后中肠的组织病理变化,并与分别取食含Cry1Ac蛋白(0.97μg/g)饲料和正常饲料的棉铃虫进行了比较。结果表明:棉铃虫取食Cry2Ab蛋白后中肠细胞及其细胞器均发生了明显的病变,主要表现为:中肠杯状细胞的杯腔肿胀或拉长,部分柱状细胞被杯状细胞挤压出来,微绒毛脱落,细胞核皱缩,质膜和核膜不清晰,染色质凝聚,线粒体拉伸变形,内质网肿胀断裂;并且随着取食时间的延长病变越来越明显。与取食Cry1Ac蛋白的棉铃虫相比,Cry2Ab引起棉铃虫中肠组织发生病变的速度较慢。本研究可为Cry2Ab作为转基因棉花的重要杀虫蛋白在将来更好地发挥作用提供理论依据。 展开更多
关键词 棉铃 蛋白 cry2ab CRY1AC 中肠组织 病理变化
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Cry1Ab杀虫蛋白对淡足侧沟茧蜂生长发育的影响 被引量:4
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作者 张蕾 蒋善军 +2 位作者 江幸福 杨海霞 罗礼智 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期107-111,共5页
以黏虫[Mythimna separata(Walker)]为寄主,研究了亚致死浓度的Bt杀虫蛋白Cry1Ab对淡足侧沟茧蜂[Microplitis pallidipes(Szepligeti)]生长发育的影响。结果表明,当寄主从淡足侧沟茧蜂寄生后开始取食含Cry1Ab杀虫蛋白浓度为1、2、4μg/g... 以黏虫[Mythimna separata(Walker)]为寄主,研究了亚致死浓度的Bt杀虫蛋白Cry1Ab对淡足侧沟茧蜂[Microplitis pallidipes(Szepligeti)]生长发育的影响。结果表明,当寄主从淡足侧沟茧蜂寄生后开始取食含Cry1Ab杀虫蛋白浓度为1、2、4μg/g和8μg/g的饲料时,淡足侧沟茧蜂卵-幼虫发育历期比以对照黏虫为寄主的显著延长,茧(蛹)重和成虫体重显著下降,但对茧历期及成虫寿命没有显著影响。淡足侧沟茧蜂的卵-幼虫发育历期随着寄主取食Cry1Ab杀虫蛋白浓度的增加而显著延长,茧重和成虫体重则随Bt蛋白浓度的上升而显著下降。因此,尽管Cry1Ab杀虫蛋白对淡足侧沟茧蜂的生长发育具有一定程度的负面影响,但其仍可以在取食Bt毒蛋白的黏虫上完成整个世代发育。 展开更多
关键词 CRY1ab蛋白 淡足侧沟茧蜂 生长发育
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Bt稻Cry1Ab杀虫蛋白在水体中的残留和Bt稻田三类水生昆虫数量调查 被引量:9
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作者 白耀宇 蒋明星 程家安 《四川农业大学学报》 CSCD 2006年第1期25-28,共4页
以转Btcry1Ab基因水稻克螟稻1号(KMD1)和克螟稻2号(KMD2)黄熟期的茎叶为材料,室内测定了其经浸水处理后(28℃,L16∶D8)残体和水体中Cry1Ab杀虫蛋白的含量;测定了KMD1与早籼稻嘉早935培育成的Bt稻华池B6分蘖期稻田水体中Cry1Ab蛋白的含量... 以转Btcry1Ab基因水稻克螟稻1号(KMD1)和克螟稻2号(KMD2)黄熟期的茎叶为材料,室内测定了其经浸水处理后(28℃,L16∶D8)残体和水体中Cry1Ab杀虫蛋白的含量;测定了KMD1与早籼稻嘉早935培育成的Bt稻华池B6分蘖期稻田水体中Cry1Ab蛋白的含量,同时调查了该Bt稻和对照稻嘉早935在分蘖初期、盛期和末期稻田3类水生昆虫的数量。结果表明,KMD1和KMD2茎叶经浸水100d后,水体中残留有Cry1Ab杀虫蛋白。华池B6分蘖期稻田水体中没有检测到Cry1Ab蛋白;除分蘖末期华池B6稻田中的蜉蝣目昆虫个体数量显著高于对照田嘉早935外,其他2类水生昆虫摇蚊(spp.)和鞘翅目甲虫(sp.)在两类稻田间均无显著差异。 展开更多
关键词 转BT基因水稻 CRY1ab蛋白 残留 水生昆
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苏云金芽孢杆菌cry2 Aa操纵元蛋白对杀虫蛋白晶体形成作用的研究 被引量:4
16
作者 姚江 张杰 +5 位作者 陈中义 李长友 黄大旸 宋福平 刘旭光 檀建新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期115-118,共4页
利用重叠PCR的方法 ,通过两次PCR扩增 ,分别获得cry2Aa1 0操纵元的orf1、orf1 +orf2与cry2Ab5基因的融合片段。融合片段经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切与pHT31 5连接 ,分别构建了基因融合片段的原核表达载体pFU(orf1 +2Ab)和pFU(orf1 +orf2 +2A... 利用重叠PCR的方法 ,通过两次PCR扩增 ,分别获得cry2Aa1 0操纵元的orf1、orf1 +orf2与cry2Ab5基因的融合片段。融合片段经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切与pHT31 5连接 ,分别构建了基因融合片段的原核表达载体pFU(orf1 +2Ab)和pFU(orf1 +orf2 +2Ab) ,电转化Bt无晶体突变株 4Q7后 ,扫描电镜下可观察到典型的方形晶体 ,通过SDS PAGE可检测到 6 0kD大小的蛋白表达带。结果表明 ,cry2Ab5可在cry2Aa1 0的启动子帮助下有效转录和表达 。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry2Aa操纵元 蛋白晶体 晶体形成
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Bt抗、感种群亚洲玉米螟幼虫取食Bt玉米后Cry1Ab杀虫蛋白在其体内的组织分布与含量 被引量:2
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作者 徐艳聆 王振营 +1 位作者 何康来 白树雄 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期957-961,共5页
采用ELISA方法检测了实验室汰选的对Cry1Ab产生107倍抗性的亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)种群与敏感种群3龄幼虫取食表达Cry1Ab杀虫蛋白的Bt玉米心叶后,杀虫蛋白在幼虫体内的分布情况。结果表明:Cry1Ab杀虫蛋白在抗性种... 采用ELISA方法检测了实验室汰选的对Cry1Ab产生107倍抗性的亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)种群与敏感种群3龄幼虫取食表达Cry1Ab杀虫蛋白的Bt玉米心叶后,杀虫蛋白在幼虫体内的分布情况。结果表明:Cry1Ab杀虫蛋白在抗性种群幼虫中的组织分布情况与敏感种群相近,主要存在于中肠组织和血淋巴中。抗、感种群中均以含有内含物的中肠组织中含量最高,分别为277.2 ng/g和104.9 ng/g;其次为血淋巴,分别为93.7 ng/g和69.5 ng/g;不含内含物的中肠组织中52.7 ng/g和40.1 ng/g;在丝腺和马氏管组织的含量很低,丝腺中分别为8.5ng/g和11.7ng/g,而马氏管中分别为6.7 ng/g和6.5 ng/g。脂肪体、生殖器官中未检测到杀虫蛋白。抗性种群中肠组织(含有内含物和不含内含物)中Cry1Ab的含量显著高于敏感种群。幼虫期取食过Bt玉米的亚洲玉米螟发育的蛹、成虫及其卵中均不含杀虫蛋白,说明Bt杀虫蛋白不会通过幼虫取食向蛹、成虫及卵传递。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 BT玉米 CRY1ab蛋白 抗性 组织分布 ELISA方法
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苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1Ab16的克隆及表达 被引量:1
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作者 汤慕瑾 谭乐 +2 位作者 余健秀 袁美妗 庞义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期417-423,共7页
通过对已知cry1类基因以及已发表的cry1Ab的序列进行分析 ,分别设计了引物P1、P2、P3和P4,首次从无晶体的芽胞杆菌AC 1 1中扩增到一个苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白(Insecticidalcrystalprotein ,ICP)cry1Ab类基因。测序结果显示该基因与... 通过对已知cry1类基因以及已发表的cry1Ab的序列进行分析 ,分别设计了引物P1、P2、P3和P4,首次从无晶体的芽胞杆菌AC 1 1中扩增到一个苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白(Insecticidalcrystalprotein ,ICP)cry1Ab类基因。测序结果显示该基因与已知的cry1Ab1基因有 8个核苷酸不同 ,编码的蛋白有 7个氨基酸差异。此基因已登录GenBank ,并命名为新亚型基因cry1Ab1 6(Ac .NO .AF375 60 8)。Southern杂交结果进一步证实该基因存在于菌体的质粒上。将cry1Ab1 6基因克隆到Escherichiacoli表达载体pQE30上并转化E .coliM1 5。Western印迹分析表明 ,E .coliM1 5表达了 1 30kD的Cry1Ab1 6蛋白 ,但此蛋白不稳定 ,大部分降解成65kD的蛋白。将表达Cry1Ab1 6蛋白的大肠杆菌用涂布法对三龄小菜蛾 (Plutellaxylostella)毒力测定 ,其LC50 为 2 5 8.3mg L ;对其他夜蛾科害虫的生长发育也有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 晶体蛋白基因 cry1ab16 克隆 表达 微生物
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新型杀虫晶体蛋白Cry7Ab4空间结构的计算机解析 被引量:1
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作者 洪雪梅 林毅 《华侨大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2012年第1期60-64,共5页
采用一级结构分析,二级结构预测及同源比对建模的方法,模拟出新型杀虫晶体蛋白Cry7Ab4的空间结构,并进行动力学优化.结合其杀大猿叶甲活性数据与蛋白结构比对分析,发现Cry7Ab4与Cry7Aa1的活性差异主要归因于α3,α4上疏水性氨基酸的不同.
关键词 苏云金芽孢杆菌 晶体蛋白 Cry7ab4 空间结构 构效关系
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寄生取食Cry1Ab杀虫蛋白的粘虫幼虫对伞裙追寄蝇寄生率及生长发育的影响
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作者 杨海霞 程云霞 +2 位作者 张蕾 牛长缨 罗礼智 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1166-1173,共8页
【目的】研究取食含Cry1Ab杀虫蛋白饲料的粘虫Mythimna separata(Walker)对其寄生天敌伞裙追寄蝇Exorista civilis Rondani的寄生率、生长发育和产卵量的影响。【方法】以取食含不同浓度(0,3.125,6.25,12.5和25μg/g)Cry1Ab杀虫蛋白饲... 【目的】研究取食含Cry1Ab杀虫蛋白饲料的粘虫Mythimna separata(Walker)对其寄生天敌伞裙追寄蝇Exorista civilis Rondani的寄生率、生长发育和产卵量的影响。【方法】以取食含不同浓度(0,3.125,6.25,12.5和25μg/g)Cry1Ab杀虫蛋白饲料的粘虫幼虫为寄主,观察并记录伞裙追寄蝇的寄生和生长发育等指标。【结果】取食过不同浓度Cry1Ab蛋白的粘虫对伞裙追寄蝇寄生率、产卵量没有显著的影响(P≥0.05),即不会影响寄生蝇对寄主的选择。取食这5种浓度杀虫蛋白的粘虫上寄生的伞群追寄蝇发育历期(卵-幼虫、蛹、成虫产卵和世代)、羽化率、性比和产卵量均无显著差异(P≥0.05),但对蝇蛆存活率和蛹重影响显著(P<0.05)。其中,伞裙追寄蝇蝇蛆存活率以寄生在取食3.125μg/g Cry1Ab蛋白的粘虫上的最高(33%),并显著高于对照和其余3个浓度处理(P<0.05),但这4个处理之间的存活率差异不显著(P≥0.05)。伞裙追寄蝇的蛹重随寄主取食Cry1Ab杀虫蛋白含量的增加而显著下降(P<0.05)。其中对照的蛹重为49.8 mg,而寄生于取食6.25和25μg/g蛋白寄主上的蛹重分别只有41.0和36.7 mg。【结论】本实验结果表明寄主粘虫取食Cry1Ab蛋白对伞裙追寄蝇无显著负面影响,为科学评价田间转Bt基因作物对寄生蝇的影响作用提供了重要的科学依据。 展开更多
关键词 伞裙追寄蝇 CRY1ab蛋白 寄生 生长发育 存活率
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