苏云金芽孢杆菌Cry8Ca2蛋白的纯化与活性的研究

cry8 Ca2基因是本实验室自行分离克隆的一种新型苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白基因,其表达130 kDa蛋白对铜绿异丽金龟(Anomala corpulenta)和黄褐异丽金龟(A.exoleta)幼虫具有较高的活性。本研究对Cry8Ca2蛋白原毒素及胰凝乳蛋白酶消化片断的纯化条件及活性进行研究,最适的消化条件为质量比1∶20,37℃,消化1 h。通过阴离子交换层析得到纯的活性毒素蛋白。用原毒素与纯化的毒素对铜绿丽金龟幼虫进行生测,Cry8Ca2原毒素蛋白的LC50为0.47μg/g土,纯化的毒素的LC50为0.08μg/g土,毒素的杀虫活性可以达到原毒素的6倍。

PC-B2对AFB_1致肝细胞DNA损伤及修复影响

目的探讨原花青素B2(PC-B2)对黄曲霉毒素B1(AFB1)所致人胚胎肝细胞(L-02)DNA损伤及修复基因表达影响。方法取对数期生长良好的L-02细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、PC-B2处理组(3、10、30μg/m L)、AFB1染毒组(10、20、30、40μg/m L)和PC-B2干预组(3、10、30μg/m L PC-B2+30μg/m L AFB1),利用噻唑蓝法、酶联免疫吸附法和荧光定量PCR技术分别测定细胞增殖活力、细胞上清液8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)含量及细胞h OGG1基因表达水平。结果 AFB1可明显抑制L-02细胞增殖活力(P<0.05),呈剂量-效应关系;与溶剂对照组比较,30μg/m L AFB1组细胞活力[(69.9±2.46)%]明显降低(P<0.05),细胞上清中8-OHd G含量[(2.779±0.089)ng/m L]明显升高(P<0.05);与30μg/m L AFB1组比较,3、10、30μg/m L PC-B2干预组细胞活力[分别为(70.6±2.67)%、(69.7±1.94)%、(82.4±1.58)%]明显升高(P<0.05),细胞上清中8-OHd G含量[分别为(2.550±0.078)、(2.376±0.109)、(1.873±0.065)ng/m L]明显降低(P<0.05);与溶剂对照组比较,30μg/m L AFB1组L-02细胞h OGG1基因表达减少(P<0.05);与30μg/m L AFB1组比较,PC-B2干预组L-02细胞h OGG1表达明显升高。结论 PC-B2可提高肝细胞增殖活力,抑制AFB1所致肝细胞DNA损伤,其机制可能与调控修复基因h OGG1表达有关。