CryK13V基因对绿色木霉原生质体的转化

将Cry基因的13位赖氨酸（K）突变成缬氨酸（V）的突变基因CryK13V，构建于pCSN43载体。完成绿色木霉转化载体pCSNTCCm的构建．在研究绿色木霉（Trichoderma viride）原生质体形成和再生基础上，初步研究了绿色木霉转化条件．结果表明，绿色木霉原生质体形成的合适条件为：pH6．98磷酸盐缓冲液加入4mg·mL^-1 glucanex。培养24h的菌丝，40r·min^-1振荡条件下30℃酶解4h，原生质体产量达到4．7×10^7个·mg^-1．原生质体在0．3mol·L^-1肌醇和0．3mol·L^-1。KCl的CM培养基上再生率为14．5％．用限制酶XhoⅠ介导将带有潮霉素抗性标记的CryK13V基因转化到绿色木霉中。转化率为每微克DNA得到1～2个转化子，转化子稳定性和PCR鉴定结果表明，外源基因已转入受体菌绿色木霉中．