Box-Behnken响应面法优化热毒宁注射液金银花和青蒿(金青)的醇沉工艺研究

目的优化热毒宁注射液金银花和青蒿(金青)的醇沉工艺,并获得关键工艺参数与质量属性的关系方程,为醇沉过程自动化控制提供理论依据。方法以新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、断氧化马钱子苷转移率及醇沉液中固含量为指标,通过单因素试验设计,考察醇沉前液相对密度、醇沉前液温度、醇沉终点乙醇体积分数、醇沉搅拌速度、加醇速度、静置温度、静置时间7个因素对醇沉工艺的影响趋势,同时通过方差分析确定影响醇沉工艺的关键因素。再采用Box-Behnken响应面法对关键因素的参数范围进行进一步的研究与探讨。结果单因素试验结合Box-Behnken响应面法研究得到金青醇沉的最佳工艺参数:搅拌速度为550 r/min、加醇体积流量为4.0 m L/s、醇沉终点乙醇体积分数75%、静置温度30℃、静置时间24 h、醇沉前液相对密度1.10 g/m L(25℃)、醇沉前液温度25℃,在此条件下新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、断氧化马钱子苷转移率分别为94.8%、97.6%、97.4%、97.2%、96.1%,醇沉液中固含量为4.2%。结论采用响应面法优化了热毒宁注射液金青的醇沉工艺,有助于进一步提升金青醇沉工艺的稳定性。

UPLC法同时测定连花清瘟胶囊中5种活性成分的含量

目的：建立同时测定连花清瘟胶囊中绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸含量的方法。方法：采用超高效液相色谱法。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱，流动相为甲醇．乙腈-0．1％磷酸溶液（梯度洗脱），流速为0．4ml／min，柱温为40℃，检测波长为237nm，进样量为5μl。结果：绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸检测质量浓度分别在0．035-0．7、0．011～0．21、0．042-0．83、0．031～0．61、0．009-0．18mg／ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9999、0．9997、0．9999、0．9998）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2．06％；平均加样回收率分别为97．2％、98．2％、98．1％、97．5％、96．5％，RSD分别为1．62％、2．26％、2．22％、2．05％、1．29％（n=6）。结论：该方法简单、快速、准确，可用于快速评价连花清瘟胶囊的质量。

热毒宁注射液青蒿金银花浓缩过程近红外快速定量检测方法的建立

目的建立热毒宁注射液青蒿金银花醇沉浓缩过程主要药效成分的定量校正模型,实现生产过程在线监控。方法采用近红外光谱技术(NIRS)结合偏最小二乘法(PLSR)分别建立新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸的定量校正模型。结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸定量校正模型的决定系数(R^2)分别为0.954 5、0.975 2、0.9691;校正集误差均方根(RMSEC)为0.213、0.676、0.225,交叉验证集误差均方根(RMSECV)分别为0.233、0.692、0.258。采用所建模型进行在线分析,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸的预测值与实测值的决定系数分别为0.984 2、0.983 7、0.9870,预测相对误差(RPD)分别为4.77、5.29、4.37,预测相对偏差(RSEP)分别为3.519%、3.778%、3.895%。结论所建的模型可以用于热毒宁注射液青蒿金银花醇沉浓缩过程中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸的在线定量测定。

HPLC法同时测定草珊瑚中7个活性成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定草珊瑚药材中反丁烯二酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸含量。方法:采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为乙腈-甲醇(1∶9),流动相B为0.5%的甲酸水溶液,梯度洗脱(0～20 min,20%A;20～30 mim,20%A→30%A;30～60 min,30%A),流速为0.8mL·min–1,检测波长为228 nm(检测反丁烯二酸)、344 nm(检测新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸),柱温为40℃。结果:反丁烯二酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸浓度分别在24.12～180.90、1.01～101.00、1.75～175.04、2.19～219.20、1.27～127.20、1.57～157.08、2.93～193.28μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)均在93.92%～103.0%范围内,RSD均小于3.0%。结论:该方法准确,灵敏度高,重复性好,适用于草珊瑚药材中7个有效成分的含量测定。

花红胶囊中咖啡酰奎宁酸类成分的识别和含量测定

目的：分析花红胶囊醇提物中的咖啡酰奎宁酸类成分，并建立同时测定花红胶囊中新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸含量的高效液相色谱法。方法：超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术（UPLC/Q-TOF-MS/MS）：采用Thermo BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm） 色谱柱，以0.1%甲酸乙腈溶液（A）-0.1%甲酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱，流速0.4 μL·min^-1，柱温40 ℃；运用电喷雾离子源（ESI源），负离子模式检测（m/z 100-1500），毛细管电压2.5 kV，锥孔电压40 kV，离子源温度120 ℃，脱溶剂温度450 ℃，碰撞能量15-40 eV，对花红胶囊中的咖啡酰奎宁酸类成分进行快速表征、鉴定。高效液相色谱法：采用Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，4 μm） 色谱柱，以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱（0-7 min，5%A→8%A；7-17 min，8%A→15%A；17-45 min，15%A→30%A；45-55 min，30%A→50%A；55-60 min，50%A→100%A），流速1.0 mL·min^-1，检测波长326 nm，柱温30 ℃。结果：采用UPLC/Q-TOF-MS/MS对该制剂的甲醇提取物进行分析，鉴定了4个咖啡酰奎宁酸类化合物，分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸A。采用HPLC法测定新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸，它们的浓度分别在3.54-176.80 μg·mL^-1（r=0.9999）、6.98-348.80 μg·mL^-1 （r=0.9999）、4.06-202.80 μg·mL^-1 （r =0.9999）范围内与峰面积呈良好的线性关系；方法的平均加样回收率（n =6）为101.5%-102.2%，RSD为1.9%-2.4%。结论：该方法为花红胶囊化学成分的快速鉴定奠定了基础，为花红胶囊的质量控制提供参考依据。

一点红HPLC指纹图谱研究及咖啡酰奎宁酸类成分的含量测定

目的:研究一点红的HPLC指纹图谱,并测定该药材中新绿原酸1、绿原酸2、隐绿原酸3这3个咖啡酰奎宁酸类的含量,为其质量控制提供参考。方法:采用Phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6mm,4μm),0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0m L/min,检测波长326nm,柱温为30℃。对10批不同产地的一点红药材的HPLC图谱进行相似度评价。采用外标法,利用1-3的混合对照品测定其在10批药材中的含量。结果:确定该10批不同产地的一点红药材具有18个共有峰,10批药材的相似度范围为0.851-0.992;测定了10批一点红中的3个咖啡酰奎宁酸类成分的含量,结果显示,不同产地一点红中3个成分的含量差异明显。结论:HPLC指纹图谱方法与3个成分的含量测定方法准确、稳定、简单,可为一点红质量控制提供参考。

一测多评法测定南方菟丝子中7种活性成分的含量

目的建立同时测定南方菟丝子Cuscuta australis中绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、山柰酚的一测多评法,验证该方法在南方菟丝子质量分析中应用的科学性及可行性。方法采用高效液相色谱法,以金丝桃苷为内参物,建立该成分与绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、紫云英苷和山柰酚的相对校正因子,采用相对校正因子来计算各成分的质量分数,同时用外标法测定南方菟丝子及其炮制品中7种活性成分的质量分数,对南方菟丝子一测多评的计算结果与外标法实测值进行比较,评价一测多评法在南方菟丝子中应用的准确性和科学性。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论以金丝桃苷为内标同时测定绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、紫云英苷、山柰酚的一测多评法可用于南方菟丝子的定量分析。