微小隐孢子虫卵囊DNA提取及用于PCR检测

目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因序列(L16996)设计一对寡核苷酸引物,分别对3种方法制备模板进行PCR扩增分析。Chelex-100提取的DNA也用于观察PCR检测的敏感性。结果3种方法制备的微小隐孢子虫卵囊模板用于PCR检测均获得1条446 bp条带,Chelex-100提取的DNA用于PCR检测的敏感性至少达0.5个卵囊。结论3种方法提取的微小隐孢子虫卵囊DNA均可用于PCR检测,Chelex-100法是一种高效而快速的微量提取DNA方法,适用于对隐孢子虫DNA的检测。

从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进

目的 建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法 在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果 地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论 成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。

病原微生物和水处理

人类许多疾病可通过水来传播,而水传播疾病的爆发会对社会构成很大威胁。饮用水处理的目的正是提供给人们安全无病菌的饮用水。简要介绍了病原微生物的特点、对人类健康的危害性,比较了不同消毒剂对病原微生物的灭活作用,提出了去除病原微生物的工艺。引起疾病的微生物种类很多,包括细菌、病毒和原生动物,后者如隐孢子虫和贾第虫等。为灭活病原微生物,除了优化常规水处理工艺外,可采用臭氧、二氧化氯、紫外线、膜滤法等,当隐孢子虫卵囊的污染严重时,还应考虑附加处理工艺。

广西南部某市周边农场奶牛隐孢子虫感染调查

目的调查广西南部某市奶牛隐孢子虫感染情况，为防治该病提供依据。方法粪样经水醚沉淀法和蔗糖离心浮聚法处理，涂片后用改良Ziehl—Neelsen抗酸染色法染色镜检，计算感染率和感染度。结果在7个奶牛场中检查了429头奶牛，隐孢子虫平均感染率为8．16％，14月龄犊牛和1岁龄以上奶牛感染率分别为7．69％（5／65）和8．24％（30／364）。结论广西奶牛隐孢子虫感染比较常见，居民可因摄入受病牛粪便污染的食品或水而受感染。控制该病的传染源和传播途径十分重要。

隐孢子虫卵囊的检测与去除

隐孢子虫卵囊的主要传播途径是水体,其引起的病即隐孢子虫病到目前为止尚无针对性的治疗方法。该文详细介绍了隐孢子虫卵囊的检测步骤,对评价消毒后隐孢子虫卵囊存活率的方法进行了探讨,并总结了几种新型消毒方法的消毒灭活效果。

新型消毒工艺灭活水中小隐孢子虫卵囊

对臭氧、臭氧/氯气、臭氧/一氯胺、二氧化氯、UV、脉冲白光、γ射线等新型消毒工艺灭活水中小隐孢子虫卵囊的研究进展进行了综述,总结了它们的灭活效果和动力学规律,分析了水质、水温、卵囊数量、消毒剂剂量。

5种分离纯化粪便中隐孢子虫卵囊方法的比较

[目的]比较5种分离纯化粪便中隐孢子虫卵囊的方法。[方法]分别用饱和氯化钠漂浮法、Sheather's蔗糖漂浮法、甲醛-乙醚沉淀法、不连续蔗糖密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法对感染小鼠粪样中的隐孢子虫卵囊进行分离纯化,浓集回收的卵囊利用鼠抗隐孢子虫卵囊壁单克隆抗体间接免疫荧光法检测卵囊数,作定量比较,同时定性比较回收卵囊液的纯度。[结果]Percoll密度梯度回收的卵囊数量最多,而且杂质少;不连续蔗糖密度梯度离心法和Sheather's蔗糖漂浮法次之,但前者回收的卵囊液中杂质较少;饱和氯化钠漂浮法获得的卵囊液中杂质也较少,但卵囊数次之;甲醛-乙醚沉淀法获得的卵囊液中检出的数量最少,且杂质最多。[结论]不连续蔗糖密度梯度离心法是一种经济、有效的卵囊分离纯化方法。

臭氧灭活水中微小隐孢子虫卵囊的效果

目的评价臭氧灭活水中微小隐孢子虫卵囊的效果,为研制饮用水中隐孢子虫的灭活措施提供理论和技术依据。方法利用纯化后的微小隐孢子虫卵囊制成悬液,采用动态通入臭氧方式进行消毒试验。分别观察臭氧浓度、作用时间、水温、pH和色度对卵囊灭活效果的影响。利用DAPI和PI荧光活体染色方法进行活性评价,计算灭活率。结果提高臭氧浓度和作用时间均有利于隐孢子虫卵囊的灭活,0.3 mg/L臭氧消毒60 min,灭活率达到99.81%,3 mg/L臭氧消毒10 min,灭活率达到99.99%。水温、pH和色度均对臭氧灭活隐孢子虫卵囊有一定的影响。结论臭氧灭活微小隐孢子虫卵囊速度快、效果好,是灭活水中隐孢子虫卵囊较理想的消毒剂。

常规水处理厂中小隐孢子虫卵囊的去除效果

介绍了小隐孢子虫卵囊的特点及其对人体的危害,分析了pH、混凝剂种类与投加量、电导率和天然有机物含量等对小隐孢子虫卵囊的Zeta电位的影响,总结了混凝-沉淀-过滤和直接过滤对小隐孢子虫卵囊的去除效果,探讨了水温、水质、混凝剂种类与投加量、滤料层组成和滤速等对去除效果的影响。

隐孢子虫卵囊基因组的提取及以保守基因为靶标的PCR检测

目的探讨提高PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法的特异性和敏感性,为防止隐孢子虫病流行提供检测依据。方法应用BALB/c小鼠感染扩增卵囊,不连续蔗糖密度梯度离心法从粪便中纯化卵囊,通过冻融和超声法破碎卵囊,然后以酚/氯仿/异戊醇法提取基因组DNA作为PCR扩增模板,根据隐孢子虫保守基因18S rRNA,设计一对特异性的引物,扩增约450bp的目的片段。结果超声处理法对隐孢子虫卵囊的破囊率为92%,明显高于冻融法的86%。2个组抽提的DNA作为模板均扩增出目的片段,但超声处理组敏感性高于冻融处理组,分别能检测到卵囊2个/mL和20个/mL。结论超声法对微小隐孢子虫卵囊的破碎效果优于冻融法,经改进的PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有特异性好和敏感性强的特点。

用于评价小球隐孢子虫卵囊感染力的NMRI乳鼠模型(英文)

[目的 ]评价一定数量的小球隐孢子虫卵囊的感染力。 [方法 ]4日龄 NMRI乳鼠经口腔管饲法接种不同数量的卵囊 ,7d后处死乳鼠 ,取消化道幽门至肛门段并匀成悬液 ,取此悬液置载玻片上 ,石碳酸品红染色 ,相差显微镜查见卵囊的为被感染乳鼠。以各组被感染乳鼠百分率评价卵囊的感染力。 [结果 ]接种 15 0 0或 2 0 0 0的乳鼠均被感染 ;接种 10 0 0、 5 0 0、2 5 0、 10 0和 5 0个卵囊的乳鼠 ,感染率分别为 88%、 74%、 5 1%、 2 8%和 9.5 %。 [结论 ]NMRI乳鼠模型接种卵囊数在 15 0 0～5 0范围内 ,其接种量与感染率呈正相关。该模型可用于评价一定数量小球隐孢子虫卵囊的感染力。

微小隐孢子虫卵囊的形态结构与染色观察

目的研究隐孢子虫卵囊的形态与染色特点。方法应用图像分析系统,观察隐孢子虫卵囊的形态与内部结构,并应用Adobe Photoshop CS4软件绘制各种卵囊形态的模拟图。卵囊经改良抗酸染色法、姬姆萨染色法、阿利新蓝染色法和苏木精-伊红染色法染色后观察其染色特点。结果隐孢子虫卵囊呈圆形或椭圆形,外层有一薄的卵囊壁,内部含有0~4个月牙形子孢子和圆点状残留体,个别卵囊呈空泡状。隐孢子虫卵囊经改良抗酸染色、姬姆萨染色、阿利新蓝染色和HE染色后,分别呈现玫瑰红色、蓝色、绿色和红色。结论隐孢子虫卵囊形态和内部结构多样,改良抗酸染色法染色效果较好。

液氮保存微小隐孢子虫卵囊对小鼠感染力的研究

目的观察两种不同保存方法对微小隐孢子虫卵囊感染小鼠能力的影响。方法用PBS稀释纯化的卵囊，加入二甲基亚砜（DMSO），置-40℃3h后，放入液氮中保存；或加入2．5％重铬酸钾中，4℃保存。3个月后取出，观察它们的脱囊率；分别感染用地塞米松免疫抑制后的BALB／c小鼠，计数卵囊排出量，计算平均每克粪便中的卵囊数目，同时记录两组小鼠的死亡时间。分别采用t检验和成组设计的两样本秩和检验进行统计学分析。结果液氮中保存3个月的卵囊能够感染免疫抑制的BALB／c小鼠，其脱囊率为7．2％-49．6％、卵囊排出量为（4．7～7．3）×10^5／g，接种后实验小鼠死亡时间为124～351h，与4℃保存的卵囊差别无统计学意义[8．3％-51．2％，（4．6～6．9）×10^5／g，132～348h，P均〉0．05）]。结论液氮中保存3个月的卵囊与4℃保存的卵囊对免疫抑制的小鼠具有同样的感染力，突破了微小隐孢子虫卵囊只能在4℃保存的传统观念，为隐孢子虫卵囊的长期保存提供了理论和实践依据。

用核酸染色和小鼠感染力方法评估脱囊和热处理后的隐孢子虫卵囊的活力(英文)

温度是影响隐孢子虫活力的重要环境因素之一。对于疾病暴发的风险评估需要有效的方法来准确分析卵囊的活力。本试验应用核酸染色和小鼠感染力2种方法研究了脱囊和热处理后完整卵囊和不完整卵囊的活力,并与新鲜卵囊进行了对比。结果表明,脱囊和中性温度热处理后的完整卵囊保持活力。然而,高温处理后的完整卵囊以及脱囊和热处理后的不完整卵囊完全丧失活力。对于新鲜卵囊,灭活卵囊,以及在脱囊后或在40℃和70℃处理后的完整和非完整卵囊,核酸染色法和小鼠感染力法的结果相对应;但是对于50℃和60℃处理后的完整卵囊这2种方法不对应。