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EXPRESSION OF THE Bacillus thuringiensis SUBSP, KURSTAKI HD-1 δ-ENDOTOXIN GENE IN Escherichia coli
1
作者 陈骐 范云六 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1992年第2期146-149,共4页
In 1987, Vaeck and Fischhoff reported the transformation of the B. thuringiensis (abbreviated to B. t. ) δ-endotoxin gene into tobacco and tomato respectively, and obtained the transgenic plants. Since then, more att... In 1987, Vaeck and Fischhoff reported the transformation of the B. thuringiensis (abbreviated to B. t. ) δ-endotoxin gene into tobacco and tomato respectively, and obtained the transgenic plants. Since then, more attention has been paid to plant resistance to insect attack by plant genetic engineering. 展开更多
关键词 bacillus thuringiensis δ-endotoxin gene expression.
原文传递
Construction of polyhedrin-positive recombinant viruswith expression of truncated δ-endotoxin fromBacillus thuringiensis in insect cell
2
作者 王福山 黄永秀 +2 位作者 齐义鹏 刘子夜 杨远征 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1996年第7期597-603,共7页
Baculoviruses have been widely used as biological agents because of their specificpathogenicity for target insect and harmlessness to mammals, birds and plants as well asadvantages with persistence and epidemics as pe... Baculoviruses have been widely used as biological agents because of their specificpathogenicity for target insect and harmlessness to mammals, birds and plants as well asadvantages with persistence and epidemics as pestcides. A major drawback for morewide-spread use of these viruses is their low virulenee and slow speed of action, which re-stricted their use. No enhancement in pathogenicity of recombinant viruses was observedwith insertion of the Bacillus thuringiensis full-length endotoxin cryIA(c) and cryIA(b) geneinto the AcNOV (Autographa californica nuclear polyhedrosis virus) genome under the con-trol of polyhedrin gene promoter. The reason may be that protoxin, full-length genesproduct of recombinant virus in infected insect cells, which was short of insect gut alkalienvironment, cannot be degraded into active toxic polypeptide. Expression level of 3’ 展开更多
关键词 bacillus thuringiensis δ-endotoxin POLYHEDRIN gene EXPRESSION recombinant virus.
原文传递
苏云金芽孢杆菌4.0718菌株的杀虫晶体蛋白基因分析 被引量:9
3
作者 丁学知 刘全兰 +2 位作者 莫湘涛 高必达 夏立秋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期413-417,共5页
In this study, we rapidly identified Bacillus thuringiensis 4.0718 strain that harbored the known cry1 and cry2 type genes by a PCR strategy. Three pairs of universal oligonucleotide primers were designed to detect al... In this study, we rapidly identified Bacillus thuringiensis 4.0718 strain that harbored the known cry1 and cry2 type genes by a PCR strategy. Three pairs of universal oligonucleotide primers were designed to detect all known cry1, cry2 and cry3 type gene sequences. Then the DNA of the positive strain 4.0718 was probed with a set of specific primers. One feacture of this screening method was that each gene was expected to produce a PCR product having a precise molecular weight. PCR products having different sizes probably represented the gene was a potentially novel gene. Differentiations among these genes was determined on the basis of the electrophoresis patterns of PCR products. Finally, five cry1 type genes (cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1Cb, a novel cry4.5 type genes) and one cry2Ac type gene had been detected from Bacillus thuringiensis 4.0718 strain. 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 4.0718菌株 杀虫晶体蛋白基因 CRY基因 PCR
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中国苏云金芽孢杆菌的分布与cry基因的多样性 被引量:11
4
作者 王津红 吴卫辉 +1 位作者 陈月华 任改新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期50-55,共6页
采集全中国 2 7个省、自治区及 4个直辖市昆虫孳生地粉尘、土壤等样品 1 0 80份 ,在其中的40 6份中分离到苏云金芽孢杆菌 965株。镜检可观察到大菱形、小菱形、方形、长方形、圆形、椭圆形、镶嵌形和不规则形等 8种主要形态的伴孢晶体 ... 采集全中国 2 7个省、自治区及 4个直辖市昆虫孳生地粉尘、土壤等样品 1 0 80份 ,在其中的40 6份中分离到苏云金芽孢杆菌 965株。镜检可观察到大菱形、小菱形、方形、长方形、圆形、椭圆形、镶嵌形和不规则形等 8种主要形态的伴孢晶体 ;采用cryⅠ、cryⅡ、cryⅢ、cryⅣ和cryⅤ基因的通用引物对 2 2 1株Bt分离株进行的PCR检测结果表明 :各类基因的含量依次为cryⅠ >cryⅡ >cryⅤ>cryⅢ基因 ,分别占被检菌株的 75 6%、 67 9%、 58 4%和 1 4 5% ,没有检测到cryⅣ基因 ,共得到1 0种基因组合类型。对其中含有cryⅠ基因的菌株分别以cryIAc、cryIC和cryIE基因的特异性引物进行PCR检测 ,得到 2 0株同时含有cryIAc、cryIC、cryⅡ和cryⅤ优良基因组合的Bt分离株 ,其中菌株Bt 1 5A3对棉铃虫、甜菜夜蛾及小菜蛾均表现出高毒力 ,具有生产开发潜力。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 伴孢晶体形态 PCR CRY基因 多样性
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苏云金芽孢杆菌cry基因研究进展 被引量:24
5
作者 李雪雁 李照会 许维岸 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2003年第1期9-13,共5页
从cry基因的分类、cry基因与转座因子的关系、cry基因的表达调控以及cry基因的作用机理等 4个方面综述了cry基因的研究进展 ,并简要展望了其研究和应用前景。
关键词 苏云金芽孢杆菌 CRY基因 研究进展 杀虫晶体蛋白 基因表达
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TA29-Barnase基因导致抗虫转基因欧洲黑杨雄性不育的研究 被引量:19
6
作者 李玲 齐力旺 +2 位作者 韩一凡 汪迎春 李文彬 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期28-32,共5页
取在1/2MS+ NAA0-02 mg/L 培养基中发育4 ~6 周的欧洲黑杨转Bt 基因植株15n192 试管苗幼叶,在MS+ BA0-2 mg/L+ NAA0-02 mg/L培养基中培养16h ,分别用基因枪法和叶盘法转... 取在1/2MS+ NAA0-02 mg/L 培养基中发育4 ~6 周的欧洲黑杨转Bt 基因植株15n192 试管苗幼叶,在MS+ BA0-2 mg/L+ NAA0-02 mg/L培养基中培养16h ,分别用基因枪法和叶盘法转化TA29Barnase嵌合基因,其Barnase 基因的转化率依次为16-1 % 和23 % ,再生株数分别为175/12 和71/10 。试验表明,选择发育适宜的叶片,利于目的基因转化后的植株再生。进一步用SDS 法提取转基因植株总DNA,经PCR 检测表明:转化植株基因组中扩增出的DNA 片段与Barnase 基因的大小一致;Southern Blot 分析出转化后的欧洲黑杨基因组中携有Barnase 基因片段,进行Dot Blot 检测,转化植株有一明显的杂交斑,并证实为阳性转化植株,并通过试管培养,结合林木常规育种方法,获得了转Barnase 基因的抗虫欧洲黑杨转基因植株。 展开更多
关键词 抗虫转基因 欧洲黑杨 Barnase基因 雄性不育
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苏云金芽胞杆菌含不同质粒和不同基因工程菌的生长代谢热动力学变化 被引量:5
7
作者 刘义 孙明 +3 位作者 喻子牛 林晓燕 高振霆 屈松生 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期769-773,共5页
用微量热法研究了世界上产量最大的微生物杀虫剂苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)野生菌株YBT-1463,无晶体突变株BMB160和无质粒、无晶体突变株BMB171以及含不同杀虫蛋白基因工程菌BMB-304-171-A和BMB-304-171-B的生长代谢热动... 用微量热法研究了世界上产量最大的微生物杀虫剂苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)野生菌株YBT-1463,无晶体突变株BMB160和无质粒、无晶体突变株BMB171以及含不同杀虫蛋白基因工程菌BMB-304-171-A和BMB-304-171-B的生长代谢热动力学变化.结果是,含有14个质粒的野生菌株YBT-1463的生长代谢热比无晶体含6个质粒的突变株BMB160和无晶体、无质粒突变株BMB171低;将杀虫晶体蛋白基因cryⅠAc和cryⅠ C分别转入受体菌BMB171中后,两个工程菌BMB-304-171-A和BMB-304-171-B生长代谢热与受体菌BMB171相比也明显降低;表明质粒形成是一个耗能过程,当受体菌BMB171转入杀虫晶体蛋白基因后,工程菌比受体菌的放热大幅度减少,表明基因编码杀虫晶体蛋白也是一个耗能过程,但是含基因cryⅠAc和cryⅠ C工程菌BMB-304-171-A和BMB-304-171-B之间的生长代谢热没有明显差异.首次报道这些热动力学变化,对杀虫剂发酵生产过程的代谢调控有重要指导意义. 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 微量热法 工程菌 热动力学 质粒 杀虫晶体蛋白基因 微生物杀虫剂 生长代谢
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苏云金芽胞杆菌标记重组菌株的构建与杀虫基因水平转移 被引量:8
8
作者 周琴 孙明 +2 位作者 李林 杨在清 喻子牛 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期142-146,共5页
利用SOE法将构建的绿色荧光蛋白基因gfp和苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因cry1Ac10的嵌合基因克隆到穿梭载体pAD4412上获得重组质粒pBMBZGC10,再通过电转化法导入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株CryB中获得重组菌株CryB(pBMBZGC10).将重... 利用SOE法将构建的绿色荧光蛋白基因gfp和苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因cry1Ac10的嵌合基因克隆到穿梭载体pAD4412上获得重组质粒pBMBZGC10,再通过电转化法导入苏云金芽胞杆菌无质粒突变株CryB中获得重组菌株CryB(pBMBZGC10).将重组菌株CryB(pBMBZGC10)的发酵液按30、60和90ml共3个浓度梯度,菌数约为107~108·ml-1,分次喷洒供试植株小白菜、蕹菜和番茄,结果表明,cry1Ac10基因没有向供试土壤细菌、真菌和放线菌转移,也未在供试植物根、茎和叶中检测到该基因. 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 绿色荧光蛋白基因(gfp) 杀虫晶体蛋白基因 水平转移
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苏云金芽孢杆菌Cry1Ca7蛋白定点突变对甜菜夜蛾杀虫活性的影响 被引量:8
9
作者 任羽 刘华梅 +2 位作者 宋福平 黄大昉 张杰 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期733-738,共6页
苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ca7对重要的农业害虫甜菜夜蛾具有较高毒力。【目的】本文的研究目的是通过定点突变的方法获得毒力发生改变的毒蛋白,为下一步研究工作提供有价值的实验材料。【方法】利用重叠引物PCR技术对cry1Ca7基因... 苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ca7对重要的农业害虫甜菜夜蛾具有较高毒力。【目的】本文的研究目的是通过定点突变的方法获得毒力发生改变的毒蛋白,为下一步研究工作提供有价值的实验材料。【方法】利用重叠引物PCR技术对cry1Ca7基因进行定点突变,获得了10种突变基因,通过生物活性测定的方法确定了各突变基因表达产物对甜菜夜蛾的杀虫活性。【结果】活性降低的突变毒蛋白有G138S,T221D,T221R,N251S,439GGT440,N306R,W376F,R522E和R570G,其中,位于DomainⅡ内的突变的活性依次是439GGT440<N306R<W376F;位于DomainⅢ内的突变R522E<R570G,二者的活性较Cry1Ca7也有明显降低;只有位于结构域Ⅰ中的R148G,产生了活性提高的突变毒蛋白,其毒性较Cry1Ca7提高了6倍,而同样位于DomainⅠ内的突变T221D<T221R<G138S<N251S,尤其是T221D活性完全丧失。研究结果表明,在结构域Ⅰ中的突变更容易产生活性提高的突变蛋白,而结构域Ⅱ和Ⅲ较难获得毒力提高的突变蛋白。【结论】本项研究所获得的这些活性发生不同变化的蛋白为揭示Cry蛋白的杀虫机理提供了基础材料,而活性提高的诱变基因及其表达产物将可作为新的杀虫资源,用于抗虫遗传工程菌和转基因植物的构建。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 杀虫晶体蛋白 定点突变 cry1Ca7基因 甜菜夜蛾
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Bt杀虫基因与Bt转基因抗虫植物研究进展 被引量:47
10
作者 王忠华 舒庆尧 +1 位作者 崔海瑞 夏英武 《植物学通报》 CSCD 1999年第1期51-58,共8页
苏云金杆菌是一类非常重要的昆虫病原体,它能产生特异性的杀虫结晶蛋白,对农业上和生物医学上的许多有害的昆虫有毒杀作用,这些害虫包括鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目、螨类和线虫。近三十年来,以苏云金杆菌为基础的生物杀虫剂已... 苏云金杆菌是一类非常重要的昆虫病原体,它能产生特异性的杀虫结晶蛋白,对农业上和生物医学上的许多有害的昆虫有毒杀作用,这些害虫包括鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目、螨类和线虫。近三十年来,以苏云金杆菌为基础的生物杀虫剂已在世界范围内商业化用于防治重要经济作物的害虫。近年来有关Bt基因的遗传、分子生物学和基因工程已取得显著进展。本文对苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因的分类和杀虫机理及用该类基因构建的工程转基因植物研究状况作一简要综述,同时对Bt基因工程存在的潜在问题和解决途径作了简单的探讨。 展开更多
关键词 苏云金杆菌 抗虫植物 基因工程 BT杀虫基因
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苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因资源的研究进展 被引量:5
11
作者 谭芙蓉 王利刚 +2 位作者 王金斌 蒋玲曦 唐雪明 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期135-139,共5页
介绍了苏云金芽胞杆菌的一般特性、分类鉴定与分布以及其杀虫晶体蛋白基因的分类、在苏云金芽胞杆菌中的定位及鉴定方法,并对苏云金芽胞杆菌及其基因资源的应用前景作了展望。
关键词 苏云金芽胞杆菌 杀虫晶体蛋白基因 分类 鉴定 分布
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转基因抗虫水稻的研究进展 被引量:7
12
作者 杨杰 仲维功 +2 位作者 陈志德 唐晓清 唐华伦 《江西农业学报》 CAS 1999年第3期48-53,共6页
本文综述了转基因抗虫水稻国内外研究的最新进展,阐述了利用生物工程技术进行转基因的程序和技术方法,指出了当前国内外转基因抗虫水稻研究存在的问题,提出了转基因抗虫水稻对人类安全性问题、昆虫产生抗性问题,并从基因构建。
关键词 杀虫晶体蛋白 基因 转基因 水稻
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对植物寄生线虫具有活性的苏云金芽胞杆菌研究进展 被引量:5
13
作者 刘芳 刘晓艳 +1 位作者 杨自文 王开梅 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期430-434,共5页
植物寄生线虫是重要的植物病原物之一,给农业生产带来了巨大的经济损失。长期以来,一直缺乏有效防治植物寄生线虫的手段。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是重要的昆虫病原细菌,广泛应用于鳞翅目、双翅目、鞘翅目害虫等农林... 植物寄生线虫是重要的植物病原物之一,给农业生产带来了巨大的经济损失。长期以来,一直缺乏有效防治植物寄生线虫的手段。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是重要的昆虫病原细菌,广泛应用于鳞翅目、双翅目、鞘翅目害虫等农林及卫生害虫的防治;部分Bt菌株对植物寄生线虫具有很高的活性。本文总结了杀植物寄生线虫Bt菌株筛选的模型与方法的建立、Bt菌株杀植物寄生线虫的作用机理及其相关应用、以及杀植物寄生线虫的伴胞晶体蛋白与相关基因等,可望为杀植物寄生线虫Bt制剂的研究与开发提供借鉴。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 植物寄生线虫 筛选 伴胞晶体蛋白 CRY基因
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苏云金芽胞杆菌YBT-1520杀虫晶体蛋白基因的属性 被引量:6
14
作者 孙明 刘子铎 喻子牛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期365-371,共7页
通过Southern杂交发现高毒力苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)YBT 1 52 0菌株含有两个杀虫晶体蛋白基因片段 ,其 5’ 末端所在HindⅢ片段分别为 6 8kb和 4 6kb ,它们对应的基因分别命名为cry2 1 8和cry4 6。经PCR鉴定 ,该菌含有c... 通过Southern杂交发现高毒力苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)YBT 1 52 0菌株含有两个杀虫晶体蛋白基因片段 ,其 5’ 末端所在HindⅢ片段分别为 6 8kb和 4 6kb ,它们对应的基因分别命名为cry2 1 8和cry4 6。经PCR鉴定 ,该菌含有cry1Aa、cry1Ab和cry1Ac基因 ,以及cry2基因 ,其中cry2 1 8属于cry1Ac。分析了cry2 1 8基因 41 90bp的核苷酸序列 ,在杀虫晶体蛋白基因分类系统中被命名为cry1Ac1 0。结合Southern杂交和PCR结果可判断 3个cry1A基因的拷贝数不同 ,其中cry1Ac拷贝数最高 ,YBT 1 52 0菌株与其它库斯塔克亚种的杀虫晶体蛋白基因所在限制性内切酶位置明显不同。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 杀虫晶体蛋白基因 cry218基因
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苏云金芽胞杆菌cry2Ab、cry9Ea基因的表达及活性分析 被引量:4
15
作者 李玉红 李海涛 +3 位作者 高继国 赵世源 张春鸽 赵灿 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期100-105,共6页
旨在为农业害虫防治提供更多的苏云金芽胞杆菌基因资源,从中国吉林市龙潭山土壤样品中分离得到野生菌株命名为Bt LTS-7,扫描电镜显示该菌株产生晶体形状为双锥体和正方体,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该菌株产生130 kD和71 kD的晶体蛋白,通过... 旨在为农业害虫防治提供更多的苏云金芽胞杆菌基因资源,从中国吉林市龙潭山土壤样品中分离得到野生菌株命名为Bt LTS-7,扫描电镜显示该菌株产生晶体形状为双锥体和正方体,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该菌株产生130 kD和71 kD的晶体蛋白,通过PCR鉴定出该菌株中含有cry2Ab和cry9Ea基因,并成功克隆到了这两个新基因,并被Bt国际命名委员会正式命名为cry2Ab28和cry9Ea9,将两个基因分别在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,并进一步对其表达蛋白进行杀虫活性测定。结果显示,Cry2Ab28蛋白对棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫具有杀虫活性,LC50为32.45μg/mL。Cry9Ea9蛋白对小菜蛾初孵幼虫(Plutella xylostella)具有较高杀虫活性,LC50为0.77μg/mL。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 杀虫晶体蛋白 cry2Ab基因 cry9Ea基因 生物活性
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苏云金芽孢杆菌CPB012菌株的杀虫功能基因鉴定及其对害虫的控制作用 被引量:4
16
作者 陆慧慧 林志强 +5 位作者 谭万忠 罗华东 鲜菲 毕朝位 余洋 杨宇衡 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1112-1121,共10页
【目的】分析并鉴定对马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)具强致病性的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CPB012菌株的杀虫基因型,为充分而有效地利用此生防菌奠定基础。【方法】CPB012菌株在LB培养基上30℃培养2—3 d,用苯... 【目的】分析并鉴定对马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)具强致病性的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CPB012菌株的杀虫基因型,为充分而有效地利用此生防菌奠定基础。【方法】CPB012菌株在LB培养基上30℃培养2—3 d,用苯酚品红进行晶体染色,观察伴孢晶体形态。cry1—cry10杀虫基因的检测选用技术成熟的PCR-RFLP(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)法,即对某一类基因(如cry1、cry2…)保守区序列设计通用引物,并引入限制性内切酶识别序列,将扩增产物用相应的限制性内切酶处理,得到的酶切图谱可以初步判断杀虫基因多态性。同时结合特异性PCR方法对二、三级分类基因(如cry1A、cry2Aa…)设计特异性引物进行扩增,将扩增产物测序比对。cry11—cry40和vip基因通过设计引物进行PCR检测。菌株在LB培养基上培养24、48、72和96 h分别提取晶体蛋白,结合晶体蛋白的SDS-PAGE图谱分析其表达的杀虫蛋白。室内分别测定CPB012对鳞翅目家蚕(Bombyx mori)、鞘翅目马铃薯甲虫和双翅目橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)的杀虫效果;室内和田间测定CPB012与球孢白僵菌(Beauveria bassiana)MJ07菌株对马铃薯甲虫的生物协同防治效果。【结果】通过菌株形态和晶体形态的连续观察,发现CPB012能够产生方形和球形等晶体。基因型检测表明CPB012菌株含有cry1Aa、cry1Ia、cry2Aa、cry2Ab和vip3A,结合蛋白电泳图谱,其可能分别编码了约135、80、70、85—90 k D的大分子杀虫蛋白;同时可能还含有30和50 k D的两种新蛋白。室内生测试验显示,除马铃薯甲虫外,CPB012对家蚕和橘小实蝇也具有很强的毒杀作用,处理7 d后死亡率分别为80.30%和76.72%。将CPB012与球孢白僵菌MJ07菌株按0.5﹕0.5剂量混合后室内接种,处理14 d后2龄马铃薯甲虫的累计死亡率达96.5%,极显著地(P<0.01)高于球孢白僵菌MJ07或苏云金芽孢杆菌CPB012单独处理的累计死亡率90.1%(MJ07)或83.3%(CPB012)。多重线性回归方程计算得出单独接种CPB012的LC50为1.88×107cfu/m L,MJ07的LC50为5.46×107cfu/m L,而二者混用后LC50为1.10×107 cfu/m L,CTC(共毒系数)值为254,增效明显。在田间施用CPB012+MJ07混合剂(0.5﹕0.5)后对1龄和2龄马铃薯甲虫的防治效果分别为47.5%和43.8%,显著高于MJ07、CPB012和Bt药剂对照的防治效果。【结论】苏云金芽孢杆菌CPB012的杀虫功能由cry1Aa、cry1Ia、cry2Aa、cry2Ab和vip3A等基因所决定,这些基因编码135、80、70、85-90 k D的杀虫毒蛋白。该菌的杀虫谱较广,对鞘翅目、鳞翅目和双翅目害虫都具有很强的生物毒性,其与球孢白僵菌MJ07混合施用可显著提高对马铃薯甲虫的防治效果。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌CPB01 2 功能基因 杀虫晶体蛋白 马铃薯甲虫 球孢白僵菌MJ07 生物防治
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两段杨树叶绿体DNA片段的克隆及叶绿体定点转化载体的构建 被引量:3
17
作者 周奕华 石东乔 +6 位作者 侯丙凯 肖宇红 张中林 张丽华 沈桂芳 胡赞民 陈正华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第9期6-12,共7页
利用PCR方法 ,从毛白杨 (PopulustomentosaC .)叶绿体基因组中克隆了 1.7kb和 1.6kb的相邻DNA片段 ,对其进行序列分析表明 ,扩增片段分别具有 176 6个和 16 0 1个核苷酸 ,前者包括 3’rps12 ,rps7基因的编码区及其边界序列 ,后者包含ndh... 利用PCR方法 ,从毛白杨 (PopulustomentosaC .)叶绿体基因组中克隆了 1.7kb和 1.6kb的相邻DNA片段 ,对其进行序列分析表明 ,扩增片段分别具有 176 6个和 16 0 1个核苷酸 ,前者包括 3’rps12 ,rps7基因的编码区及其边界序列 ,后者包含ndhB基因的第一外显子和内含子。本文还构建了杨树这两个片段的限制酶切图谱 ,并以这两个相邻片段为同源重组片段 ,分别将绿色荧光蛋白 (GFP)基因和苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白 (Bt)基因 ,及其原核表达框插入其间 ,构建了杨树叶绿体定点转化载体pPZG和 pPZB。这两个特异性载体将定位整合到杨树叶绿体基因组中反向重复区的rps7和ndhB基因的间隔区 ,并高效表达GFP和Bt基因。迄今为止 ,本文所报道的内容在国内。 展开更多
关键词 杨树 叶绿体定点转化 绿化荧光蛋白基因 苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因 植物基因工程 基因克隆 载体构建 遗传改良
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苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的分类 被引量:15
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作者 鲁松清 孙明 喻子牛 《生物工程进展》 CSCD 1998年第5期57-62,共6页
1989年Hofte和Whiteley根据氨基酸序列的同源性和杀虫谱双重标准将苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因划分为5类14亚类。根据双重标准出现的问题和冲突,给分类带来了困扰,为此1995年,只根据氨基酸序列的同源性... 1989年Hofte和Whiteley根据氨基酸序列的同源性和杀虫谱双重标准将苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因划分为5类14亚类。根据双重标准出现的问题和冲突,给分类带来了困扰,为此1995年,只根据氨基酸序列的同源性进行分类。现已将基因分为21群,44亚群,64类,116个亚类。本文介绍了纳入新系统的条件、分类原则、命名方法、定名步骤和分类中值得注意的问题。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 杀虫晶体蛋白 基因分类 杀虫谱
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5种中国苏云金芽孢杆菌的伴孢晶体蛋白基因分析 被引量:6
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作者 张光美 刘树生 Akhurst Raymond 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期127-133,共7页
利用聚合酶联反应 (PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)技术分析了 5种中国苏云金杆菌制剂菌株的伴孢晶体蛋白及其基因组成。结果发现 ,5种菌株均含有cry1Aa和 /或c和 /或d和 /或b基因 ,只有Bt+Virus菌株含有cry1Ab基因 ,cry1A基因编... 利用聚合酶联反应 (PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)技术分析了 5种中国苏云金杆菌制剂菌株的伴孢晶体蛋白及其基因组成。结果发现 ,5种菌株均含有cry1Aa和 /或c和 /或d和 /或b基因 ,只有Bt+Virus菌株含有cry1Ab基因 ,cry1A基因编码的伴孢晶体蛋白分子量约为 130kD ;仅有JS BtC菌株含有cry1B基因 ,其编码的伴孢晶体蛋白分子量约为 138kD ;除HB BtC菌株外 ,其余 4个菌株均含有cry2Aa和 /或b基因 ,这类基因编码分子量为 70kD的伴孢晶体蛋白 ;所有 5个菌株都含有cry1I基因 ,其编码的伴孢晶体蛋白分子量应为 81 2kD ,但实验中未曾检测到cry1I基因的表达 ; 展开更多
关键词 BT 伴孢晶体蛋白基因 PCR SDS-PAGE 杀虫活性
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小白菜苏云金芽孢杆菌CryIB基因的遗传转化 被引量:9
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作者 秦新民 高成伟 +1 位作者 李春瑶 邓智年 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 1999年第3期77-82,共6页
用限制酶 SphⅠ和 Eco RⅠ消化质粒 p B Y T E Sp101- 1和p B Q X,将p B Q X 上的经改造过的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因 Cry I B取代 p B Y T E Sp101- 1上的 G U S基因,得... 用限制酶 SphⅠ和 Eco RⅠ消化质粒 p B Y T E Sp101- 1和p B Q X,将p B Q X 上的经改造过的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因 Cry I B取代 p B Y T E Sp101- 1上的 G U S基因,得到一个中间克隆p B I W I Q- 1.用限制酶 HindⅢ消化质粒p B I W I Q- 1,回收含 Cry I B基因的51 kb D N A 片段,插入质粒p B I N19的 HindⅢ位点,构建成具卡那霉素抗性的植物表达载体 p B I W I Q- 5.用三亲结合法将质粒 p B I W I Q- 5转入农杆菌 E H A105.通过农杆菌介导的方法将 Cry I B 基因导入小白菜. P C R 扩增、 Southern blot 和 Northern blot分析表明:杀虫晶体蛋白基因 Cry I B已整合到小白菜基因组中。 展开更多
关键词 小白菜 苏云金芽孢杆菌 遗传转化
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