虎杖的化学成分研究

目的对虎杖根及根茎的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱进行分离,通过化学和波谱分析方法鉴定化合物结构。结果从其乙醇提取物的乙醚部分分离得到7个化合物,分别鉴定为大黄素甲醚(Ⅰ)、大黄素(Ⅱ)、黄葵内酯(Ⅲ)、β-谷甾醇(Ⅳ)、齐墩果酸(Ⅴ)、香豆素(Ⅵ)和2-乙氧基-8-乙酰基-1,4-萘醌(Ⅶ)。结论化合物Ⅶ为新化合物,命名为虎杖素A(cuspidatumin A),Ⅲ为首次从虎杖中分得。

虎杖4号对静脉瘀血皮瓣活力影响的实验研究

在显微电视放大500倍条件下,对虎杖4号于大鼠移植岛状皮瓣在静脉阻断6小时再通后微循环变化的影响,借助计算机图像分析系统进行直接动态观察,并结合组织学检查及皮瓣7天成活率的观测。结果表明,虎杖4号可明显提高皮瓣局部血液灌注量、血流速度,增加毛细血管开放面积,减少血栓形成及提高血管内皮细胞对缺血、缺氧损伤的耐受能力,从而提高了皮瓣成活率。实验还表明,术前开始及术后开始用药组效果接近。

虎杖花的化学成分研究

目的研究虎杖Polygonum cuspidatum花的化学成分。方法利用溶剂提取、硅胶柱色谱和Sephadex LH-20反复进行分离纯化,根据波谱数据和理化性质鉴定化合物结构。结果从虎杖花甲醇提取物的乙醚、甲醇萃取部分分离得到16个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、芦荟大黄素(2)、大黄素甲醚(3)、大黄素(4)、胡萝卜苷(5)、大黄酚(6)、槲皮素(7)、山柰酚(8)、蒽醌苷B(9)、大黄酸(10)、芹菜素(11)、橙皮素(12)、4-羟基苯乙酮(13)、芦丁(14)、蔗糖(15)、染料木素(16)。结论化合物2、8、12、13、15、16为首次从虎杖花中分离得到。

HPLC法体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂

目的:建立HPLC体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法。方法:采用HPLC法测定酶促反应体系中底物黄嘌呤在反应前后含量的变化,以此考察待测样品对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。色谱条件:采用Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm"250mm,5#m),以0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(含甲醇1%)为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱温为室温,检测波长254 nm,进样量20#L。结果:在该色谱条件下,酶促反应体系中的黄嘌呤与其他成分分离度良好。利用该方法对14种中药进行了筛选,发现使君子、苏木、虎杖和牡丹皮四味中药的70%乙醇提取物对黄嘌呤氧化酶抑制作用较强,其IC50分别为10.04、8.02、2.06和1.36 mg·mL-1。针对活性较好的苏木,对从其分离得到的24个化合物进行活性筛选,发现化合物7,3',4'-三羟基-3-苄基-2氢-苯并吡喃、3-去氧苏木酮B、苏木查尔酮和原苏木素A具有一定的活性。结论:该方法简单可行,准确性较高,可用于黄嘌呤氧化酶抑制剂的快速筛选。

虎杖苯亚甲基丙酮合酶PcPKS2的表达纯化和晶体生长

植物类型Ⅲ聚酮合酶超家族(PKSs),又称查尔酮合酶(Chalcone synthase,CHS)超家族,催化合成多种植物次生代谢产物的分子骨架。苯亚甲基丙酮合酶(Benzalacetone synthase,BAS)催化4-香豆酰辅酶A与丙二酰辅酶A通过一步脱羧缩合反应生成苯亚甲基丙酮,是一系列具有重要生物学活性苯丁烷类化合物及其衍生物的前体化合物。前期工作从虎杖中分离出苯亚甲基丙酮合酶BAS(PcPKS2)和1个具有CHS和BAS活性的双功能酶(PcPKS1)。两者与超家族其他成员序列经比较,在包括门卫氨基酸Phe215和Phe265在内的重要氨基酸序列存在一定差异。已有蛋白晶体学研究结果表明,PKSs家族不同成员的功能多样性来自于酶催化位点的非常微小的构象变化。为了能够从结构上比较PcPKS2和Pc PKS1双功能酶活性差异可能产生的机制,以确定其高效BAS活性的分子机理,研究利用了大肠杆菌原核表达系统过量表达了C-端融合有His6标签的重组蛋白,经纯化得到了高纯度蛋白。经过对其晶体生长条件进行摸索和优化,得到了能用于X-射线衍射的单晶,为其结构解析、催化机理研究、了解虎杖聚酮类化合物生物合成机制和该类酶在基因工程中的应用提供了基础。