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茶树品种‘安吉白茶’CsDREB-A4b基因的克隆及其对非生物胁迫的响应 被引量:5
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作者 李彤 严雅君 +3 位作者 韩洪润 刘志薇 吴致君 庄静 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期1-9,共9页
采用RT-PCR方法从茶树〔Camellia sinensis(Linn.)O.Ktze.〕品种‘安吉白茶’(‘Anjibaicha’)叶片的c DNA中克隆得到1个编码DREB转录因子的基因,命名为CsDREB-A4b。序列分析结果显示,CsDREB-A4b基因包含长度为873 bp的开放阅读框,编码... 采用RT-PCR方法从茶树〔Camellia sinensis(Linn.)O.Ktze.〕品种‘安吉白茶’(‘Anjibaicha’)叶片的c DNA中克隆得到1个编码DREB转录因子的基因,命名为CsDREB-A4b。序列分析结果显示,CsDREB-A4b基因包含长度为873 bp的开放阅读框,编码290个氨基酸,具有保守的AP2结构域。与拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕AP2/ERF家族转录因子进行同源进化分析,CsDREB-A4b转录因子属于DREB亚族中的A4组。多重比对结果显示:CsDREB-A4b转录因子与蓖麻(Ricinus communis Linn.)等植物的DREB类转录因子保守结构域氨基酸序列的相似性较高。CsDREB-A4b转录因子为亲水性蛋白,理论相对分子质量为31 938.5,理论等电点为p I 5.91,总平均疏水性为-0.603,碱性、酸性、芳香族和脂肪族氨基酸的比例分别为12%、12%、7%和15%。在高温(38℃)胁迫处理前期,CsDREB-A4b基因的相对表达量显著高于胁迫处理前;在低温(4℃)胁迫处理下,CsDREB-A4b基因的相对表达量呈显著升高的趋势;在盐(200 mmol·L-1Na Cl)和干旱(200 g·L-1PEG)胁迫处理下,CsDREB-A4b基因的相对表达量呈先降低后显著升高的趋势。表明CsDREB-A4b基因参与‘安吉白茶’非生物胁迫的响应过程,且在不同胁迫条件下具有表达差异性。 展开更多
关键词 茶树 '安吉白茶’ DREb转录因子 csdreb-a4b基因 非生物胁迫 表达分析
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GP1BA、PTGS1、LTC4S、ITGB3基因多态性检测指导阿司匹林使用
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作者 冯淳 姚杨 +3 位作者 甄拴平 王慧 赵家骏 王华 《检验医学与临床》 CAS 2024年第7期929-933,共5页
目的对陕西宝鸡地区阿司匹林药物相关基因的基因型分布进行回顾性分析,明确与阿司匹林药物相关基因的突变率。方法选取2022年1月至2023年5月在宝鸡市中医医院心内科接受阿司匹林治疗并进行相关基因检测的住院患者475例,采用飞行时间质... 目的对陕西宝鸡地区阿司匹林药物相关基因的基因型分布进行回顾性分析,明确与阿司匹林药物相关基因的突变率。方法选取2022年1月至2023年5月在宝鸡市中医医院心内科接受阿司匹林治疗并进行相关基因检测的住院患者475例,采用飞行时间质谱仪对阿司匹林药物相关的4个基因[血小板膜糖蛋白Ⅰbα多肽(GP1BA)基因、前列腺素内过氧化物合酶1(PTGS1)基因、白三烯C4合酶(LTC4S)基因、糖蛋白Ⅲa(ITGB3)基因]进行检测,然后进行基因多态性分析。结果各基因分布频率符合Hardy-Weinberg平衡定律,GP1BA c.482C>T基因型分布频率CC>CT>TT,ITGB3 c.176T>C基因型分布频率TT>TC>CC,PTGS1 c.-842A>G基因型分布频率AA>AG>GG,LTC4S c.-444A>C基因分布频率AA>AC>CC;不同性别、年龄的各基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论对阿司匹林药物治疗患者进行阿司匹林药物相关基因检测,可以为临床医生对患者制订个体化治疗方案提供辅助性的指导,具有重要的临床价值。 展开更多
关键词 基因多态性 阿司匹林 血小板膜糖蛋白Ⅰbα多肽基因 前列腺素内过氧化物合酶1基因 白三烯C4合酶基因 糖蛋白Ⅲa基因 个体化治疗
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BVDV非结构蛋白NS4B的结构分析及其蛋白表达与鉴定
3
作者 柳凯月 董亚尊 +6 位作者 吴双双 马一瑄 刘鸿雁 王北艳 于立权 宋佰芬 马金柱 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期69-76,共8页
NS4B是牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的非结构蛋白,为研究BVDV在病毒侵染宿主细胞过程中的作用,对ns4b进行了结构分析、表达载体构建及蛋白表达。采用Prot-Param、TExpasy和SignalP-4.1等软件分析NS4B蛋白的氨基... NS4B是牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的非结构蛋白,为研究BVDV在病毒侵染宿主细胞过程中的作用,对ns4b进行了结构分析、表达载体构建及蛋白表达。采用Prot-Param、TExpasy和SignalP-4.1等软件分析NS4B蛋白的氨基酸组成、疏水性和空间结构。根据Genebank上公布的BVDVns4b基因序列设计引物,利用PCR方法获得ns4b基因片段,连接到p3×Flag-CMV10表达载体上,构建重组质粒p3×Flag-CMV10-ns4b,经双酶切与测序鉴定正确后,将p3×FlagCMV10-ns4b转染到HEK-293T细胞中,利用Western blot检测NS4B蛋白的表达。结果表明BVDV NS4B蛋白分子量为38.4 kDa,不存在信号肽,有49个磷酸化位点和6个糖基化位点,是一种主要由α-螺旋和无规则卷曲结构组成的疏水性稳定蛋白。成功构建了重组质粒p3×Flag-CMV10-ns4b,并且p3×Flag-CMV10-ns4b在HEK-293T细胞中成功表达,为今后研究NS4B蛋白在BVDV感染宿主细胞及其免疫逃逸机制奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 ns4b基因 载体构建 蛋白表达
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慢性阻塞性肺疾病患者血清HMGB1、TLR4、sST2及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系
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作者 刘晟 盛美玲 +1 位作者 王红岗 肖远超 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期1587-1590,共4页
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清高迁移率族蛋白(HMG)B1、Toll样受体(TLR)4、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系。方法 选择慢阻肺患者100例,依据病情严重程度分为急性加重组(57... 目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清高迁移率族蛋白(HMG)B1、Toll样受体(TLR)4、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系。方法 选择慢阻肺患者100例,依据病情严重程度分为急性加重组(57例)与稳定组(43例);另选择健康体检者48例作为对照组。运用酶联免疫吸附试验测定血清HMGB1、TLR4、sST2水平及血清白细胞介素(IL)-6、IL-33和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;运用肺功能仪测定第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)和FEV1占预计值百分比(FEV1%)。比较3组血清HMGB1、TLR4、sST2水平,细胞因子水平和肺功能变化;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度相关性;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与肺功能相关性;采用多因素Logistic回归分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与慢阻肺关系。结果 急性加重组和稳定组血清HMGB1、TLR4、sST2水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组血清IL-6、IL-33和TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组FEV1/FVC和FEV1%显著低于对照组(P<0.05);且急性加重组显著低于稳定组(P<0.001);经Pearson分析,血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与病情严重程度呈线性正相关(P<0.001);血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与FEV1/FVC和FEV1%呈线性负相关(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α为慢阻肺影响因素。结论 慢阻肺患者血清HMGB1、TLR4、sST2水平升高,细胞因子IL-6、IL-33和TNF-α水平升高,且血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度呈正相关而与肺功能呈负相关。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 高迁移率族蛋白b1 Toll样受体4 可溶性生长刺激表达基因2蛋白 细胞因子 肺功能
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分子标记选择小麦抗白粉病基因Pm4b、Pm13和Pm21聚合体 被引量:67
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作者 张增艳 陈孝 +2 位作者 张超 辛志勇 陈新民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期789-793,共5页
培育多个抗病基因聚合的小麦品种是提高其抗病广谱性和持久性的有效途径之一。利用小麦抗白粉病基因Pm4、Pm13、Pm2 1的特异PCR标记 ,对含有Pm4b、Pm13、Pm2 1的小麦品系复合杂交F2 代 4 0个植株进行检测 ,从中选择到Pm4b +Pm13+Pm2 13... 培育多个抗病基因聚合的小麦品种是提高其抗病广谱性和持久性的有效途径之一。利用小麦抗白粉病基因Pm4、Pm13、Pm2 1的特异PCR标记 ,对含有Pm4b、Pm13、Pm2 1的小麦品系复合杂交F2 代 4 0个植株进行检测 ,从中选择到Pm4b +Pm13+Pm2 13个基因聚合的抗病植株 11个 ,检测、选择到Pm4b +Pm13、Pm4b +Pm2 1、Pm13+Pm2 12个基因聚合的抗病植株 19个 ,为持久、广谱抗病小麦育种奠定了基础。研究还表明 ,3个独立的显性抗病基因在F2 代分离群体中的分离比例基本符合孟德尔独立分配定律 ,在小麦背景下的遗传稳定性 ,与该基因供体和普通小麦的亲缘关系密切相关 ,亲缘关系越远 ,丢失的概率越大。因此 。 展开更多
关键词 分子标记选择 小麦 抗白粉病基因 Pm4b Pm13 PM21 聚合体
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小鼠B7-H4基因克隆及真核表达载体的构建 被引量:9
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作者 徐军发 袁春雷 +3 位作者 杨衡 赵坤 胡国艳 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期665-667,共3页
目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDN... 目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3·1-hFc真核表达载体中,并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白。结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3·1-hFc载体中,两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc。结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体,它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白。 展开更多
关键词 b7-H4 真核表达 基因克隆 载体构建
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人肝癌相关新基因编码产物LAPTM4B的鉴定及其生物学特性 被引量:14
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作者 刘歆荣 周柔丽 +7 位作者 张青云 张页 邵根泽 金月英 张莎 林明 芮静安 叶大雄 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期340-347,共8页
目的 :鉴定由肝细胞癌 (HCC)相关新基因LAPTM 4B编码的蛋白质并研究其生物学特性。方法 :以Westernblot、免疫组化及双向电泳鉴定新基因的表达产物 ;以免疫共沉淀等方法研究分子间的相互作用。结果 :LAPTM4B基因编码相对分子质量分别为 ... 目的 :鉴定由肝细胞癌 (HCC)相关新基因LAPTM 4B编码的蛋白质并研究其生物学特性。方法 :以Westernblot、免疫组化及双向电泳鉴定新基因的表达产物 ;以免疫共沉淀等方法研究分子间的相互作用。结果 :LAPTM4B基因编码相对分子质量分别为 35× 10 3 和 2 4× 10 3 、等电点分别为 9.0 7和 4 .6 5的两种异型分子。它们在肝癌组织及肝癌细胞系的表达显著上调 ,而相对分子质量为 35× 10 3 者尤为明显 ,并与细胞分化程度相关。LAPTM4B蛋白可与整合素α 6亚单位及表皮生长因子 (EGF)受体形成信号复合物。结论 :LAPTM4B 35蛋白在人肝癌组织及细胞系过表达 ,并可能通过与细胞表面的整合素受体及EGF受体形成复合物而参与细胞外基质成分所启动的信号转导。 展开更多
关键词 肝癌 基因编码产物 LAPTM4b 鉴定 生物学特性 信号复合物
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肝癌中高表达的新基因LAPTM4B对细胞增殖及成瘤性的影响 被引量:13
8
作者 何静 邵根泽 周柔丽 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期348-352,共5页
目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Wester... 目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B基因高表达的单克隆细胞株 ,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果 :与转染空载体的对照组相比 ,转染了LAPTM4BcDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化 ,微绒毛的数量和长度增加 ,多分枝且缠绕成团。转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附 /铺展能力增强。生长曲线显示转染细胞的生长速率增高。流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多 ,而G0 ~G1期细胞数减少。Western杂交显示CyclinE蛋白在转染细胞中的表达显著增加。转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性。结论 :LAPTM 4B基因能影响细胞增殖的调节 ,促进NIH3T3细胞的增殖 ,并使NIH3T3细胞具有成瘤性 ,在肿瘤发生过程中具有重要的作用。 展开更多
关键词 肝癌 表达 基因 LAPTM4b 细胞增殖 成瘤性
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TLR4/MyD88/NF-κB通路基因及相关炎症因子在继发性脊髓损伤患者中的表达 被引量:14
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作者 米爽 吴燕君 +3 位作者 洪正华 王章富 冯兴兵 郑光彬 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期609-616,共8页
目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/NF-κB通路基因及相关炎症因子TNF-α、IL-12、IL-6在继发性脊髓损伤(SSCI)患者中的表达及与预后的相关性。方法:回顾性分析2017年7月至2018年6月浙江省台州医院收治的105例SSCI患者及4... 目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/NF-κB通路基因及相关炎症因子TNF-α、IL-12、IL-6在继发性脊髓损伤(SSCI)患者中的表达及与预后的相关性。方法:回顾性分析2017年7月至2018年6月浙江省台州医院收治的105例SSCI患者及40名健康体检者的临床资料。根据Frankel脊髓损伤分级评估结果将SSCI患者分为完全损伤组和不完全损伤组,根据日本矫形外科学会(JOA)患者神经功能改善率将SSCI患者分为预后优良组和预后不良组。对比SSCI患者与健康体检者、完全损伤组与不完全损伤组、预后优良组与预后不良组外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平;采用Logistic回归分析法分析导致SSCI患者预后不良的危险因素,并采用Pearson相关性分析法分析JOA改善率与上述指标的相关性。结果:SSCI患者PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达量及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均高于健康体检者(均P<0.01),完全损伤组上述指标均高于不完全损伤组,且预后不良组高于预后优良组(均P<0.01)。预后不良组Frankel分级A级、脊髓水肿或出血、脊髓损伤长度超过4 cm患者的比例均高于预后优良组(均P<0.01),且经Logistic回归分析证实Frankel分级、脊髓水肿或出血、脊髓损伤长度及PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量、血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均是导致SSCI患者预后不良的危险因素(P<0.05或P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,JOA改善率与PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量以及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均呈负相关(P<0.05或P<0.01)。结论:TLR4/MyD88/NF-κB通路激活及其相关炎症因子TNF-α、IL-12、IL-6表达上调参与SSCI疾病进展且与神经炎症损伤关系密切,可作为评估SSCI患者预后的参考指标。 展开更多
关键词 TOLL样受体4 核因子Κb 髓样分化因子88 脊髓损伤 基因表达 预后
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猪带绦虫45W-4B基因在家蚕细胞中的表达 被引量:5
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作者 余招锋 才学鹏 +3 位作者 张志芳 于三科 陈寅 林旭瑷 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期527-530,共4页
猪带绦虫45W基因已被认为是预防猪囊虫病的基因工程疫苗候选基因之一。其中4B基因是45W基因家族中高度保守的一个成员(以下称45W-4B)。本试验将重组于pGEM-3Z载体上的4B基因转载到pVL1393转移载体中,通过鉴定获得重组质粒pVL1393-4B,然... 猪带绦虫45W基因已被认为是预防猪囊虫病的基因工程疫苗候选基因之一。其中4B基因是45W基因家族中高度保守的一个成员(以下称45W-4B)。本试验将重组于pGEM-3Z载体上的4B基因转载到pVL1393转移载体中,通过鉴定获得重组质粒pVL1393-4B,然后将重组质粒与BmNPV病毒共转染,筛选出重组BmNPV-4B重组病毒,用该重组病毒感染Bm细胞,收集细胞上清,SDS-PAGE电泳鉴定表达蛋白,并经Westernblot检测表明该蛋白能识别囊虫病人(猪)阳性血清,45W-4B蛋白的成功表达对进一步研究45W蛋白的结构和功能以及开发高效猪囊虫基因工程疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 猪囊虫 45W-4b基因 家蚕 表达
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棉花DELLA蛋白GhGAI4b基因的克隆及功能初步分析 被引量:5
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作者 彭丽军 温玮 +3 位作者 李艳 吕西洋 黄先忠 郑银英 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期405-413,共9页
【目的】DELLA蛋白已在不同的物种中被广泛鉴定,并且功能区高度保守,是GA信号通路中的负调控因子,在棉花纤维细胞起始和发育中起重要的作用。研究棉花中DELLA基因的功能。【方法】从棉花中克隆DELLA蛋白的同源基因GhGAI4b,构建35S:GhGA... 【目的】DELLA蛋白已在不同的物种中被广泛鉴定,并且功能区高度保守,是GA信号通路中的负调控因子,在棉花纤维细胞起始和发育中起重要的作用。研究棉花中DELLA基因的功能。【方法】从棉花中克隆DELLA蛋白的同源基因GhGAI4b,构建35S:GhGAI4b植物过量表达载体,通过农杆菌侵染花序的方法转入野生型拟南芥中,观察转基因植株的表型。【结果】序列分析表明GhGAI4b全长开放阅读框1 617 bp,编码538个氨基酸,具有DELLA蛋白的典型结构域。采用Clustal X将GhGAI4b的氨基酸序列与其他已知的DELLA蛋白氨基酸序列进行相似性比对,发现GhGAI4b氨基酸序列与陆地棉、拟南芥的相似性较高,达到47%以上。转基因株系表现出叶片颜色深绿,叶片缩小且肥厚,叶片细长呈锯齿状;有些株系会出现多重莲座叶,雄蕊发育不全,晚花,株高变矮等赤霉素不敏感突变体的表型。【结论】过表达GhGAI4b能够抑制拟南芥莲座叶的生长和发育,影响转基因拟南芥花器官的发育,严重时引起转基因拟南芥的不育。 展开更多
关键词 棉花DELLA蛋白 GhGAI4b基因 功能分析
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同时表达4-1BBL B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠肝癌细胞系的建立和意义 被引量:3
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作者 李国强 王学浩 +1 位作者 印洁 俞悦 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期1261-1264,共4页
目的:建立同时表达4-1BBL、B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞系。方法:将B7.1和B7.2全长cDNA的质粒酶切,构建pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子,酶切法鉴定。用阳离子脂质体(Lipofectamin... 目的:建立同时表达4-1BBL、B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞系。方法:将B7.1和B7.2全长cDNA的质粒酶切,构建pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子,酶切法鉴定。用阳离子脂质体(LipofectamineReagent)将重组子转染H22,经均霉素(Hygromycin,300!g/ml)筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86+细胞。逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测目的基因在H22-CD80/CD86+变异株的表达。采用同样方法将pCI-neo-4-1BBL质粒转入H22-CD80/CD86+细胞,G418筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86/CD137L+细胞。流式细胞仪检测三种基因在细胞克隆中的表达。结果:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子经酶切鉴定,同时获得B7.1(862bp)和B7.2(984bp)目的基因片段和5.6kbp线性化pcDNA3.1载体片段;重组子测序结果与Genebank中B7.1和B7.2序列相符,证实构建成功。RT-PCR及FCM检测结果显示B7.1、B7.2及4-1BBL基因分别在H22-CD80/CD86+细胞及H22-CD80/CD86/CD137L+细胞中获得稳定、高效联合表达。结论:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子构建正确,H22-CD80/CD86/CD137L+变异株可同时稳定表达B7.1、B7.2和4-1BBL三个共刺激分子基因。 展开更多
关键词 基因重组 癌肝细胞 b7.1 b7.2 4-1bbL
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骨髓增生异常综合征患者p15^(INK4B)基因甲基化与疾病进展的Meta分析 被引量:3
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作者 张耀 宋陆茜 +2 位作者 吴凌云 常春康 李晓 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期525-530,共6页
目的分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者p15INK4B基因甲基化与疾病进展的关系。方法搜索Cochrane Library、Medline、PubMed、Embase、OVID、Springlink、CBMdisc、VIP、万方和CNKI数据库(1979 to 2012),查找报道MDS患者及sAML(MDS转化的... 目的分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者p15INK4B基因甲基化与疾病进展的关系。方法搜索Cochrane Library、Medline、PubMed、Embase、OVID、Springlink、CBMdisc、VIP、万方和CNKI数据库(1979 to 2012),查找报道MDS患者及sAML(MDS转化的白血病)患者p15INK4B基因甲基化发生率的文献,使用RevMan 5.0对数据进行统计分析。结果共有20篇文献检测了MDS患者p15INK4B基因甲基化状态,并报道了患者骨髓原始细胞数;其中9篇文献包括sAML患者(共690名患者)。p15INK4B基因甲基化状态在骨髓原始细胞5%~19%组中高于原始细胞<5%组(RR=0.41,95%CI:0.33~0.50),sAML组高于MDS原始细胞5%~19%组(RR=0.51,95%CI:0.41~0.64)。4篇文献报道了MDS患者疾病的进展(包括179名患者)。p15INK4B基因甲基化阳性组疾病进展率高于甲基化阴性组(RR=3.09,95%CI:2.04~4.68)。结论 p15INK4B基因甲基化与MDS患者疾病进展及白血病转化密切相关。 展开更多
关键词 骨髓增生异常综合征 p15INK4b基因 甲基化
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脑出血术后脑脊液中食管癌相关基因4和S100B蛋白表达水平与GCS评分及Barthel指数的相关性研究 被引量:5
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作者 陈博 朱娜 +2 位作者 徐翠香 黄晓燕 汪玲果 《现代检验医学杂志》 CAS 2021年第2期11-14,共4页
目的探讨脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)患者术后脑脊液(CSF)中食管癌相关基因4(ECRG4)与S100钙结合蛋白B(S100B)表达水平与格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma scale,GCS)和巴氏指数(barthel index,BI)的相关性,及其在脑出血患者术... 目的探讨脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)患者术后脑脊液(CSF)中食管癌相关基因4(ECRG4)与S100钙结合蛋白B(S100B)表达水平与格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma scale,GCS)和巴氏指数(barthel index,BI)的相关性,及其在脑出血患者术后神经功能康复中的临床应用价值。方法选择2017年1月~2019年12月入住陕西省人民医院神经外科治疗的基底节区ICH患者30例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测10例对照组、10例腰大池引流组和10例腰椎穿刺组患者ICH术后ECRG4与S100B蛋白水平,进行GCS和BI评分,并进行相关性分析。结果术后7天时,对照组ECRG4(1.14±0.39pg/ml)低于引流组(15.50±0.28 pg/ml)和穿刺组(10.71±0.89pg/ml),对照组S100B(0.550±0.310ng/ml)水平高于引流组(0.154±0.025ng/ml)与穿刺组(0.192±0.030ng/ml),引流组两者表达水平与穿刺组比较,差异均有统计学意义(t=11.630,28.120,均P<0.05)。术后7天时,引流组与穿刺组GCS(11.62±1.71,10.19±1.41)及BI(43.24±10.05,40.64±10.10)评分均高于对照组(GCS:7.07±1.43,BI:21.73±6.45),差异具有统计学意义(t=7.466,4.180,P<0.05)。结论ECRG4与S100B蛋白在脑出血患者脑脊液中的变化趋势与GCS和BI评分具有相关性,两者联合检测,有助于调整治疗方案,从而降低患者神经功能障碍的发生,改善预后。 展开更多
关键词 脑出血 食管癌相关基因4 S100钙结合蛋白b 脑脊液
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IL-4基因及B7-1基因共转染新型瘤苗的制备及其治疗作用的初步研究 被引量:2
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作者 曹雪涛 于益芝 +1 位作者 雷虹 董虹 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第1期73-74,共2页
近年来,白细胞介素4(IL-4)基因治疗的研究取得了很大进展并已试用于临床治疗晚期肿瘤.我们的实验也曾表明,IL-4基因转染的肿瘤细胞所制备的瘤苗对于实验性肺转移荷瘤小鼠具有一定疗效,该作用可能与IL-4基因的转染与表达对肿瘤细胞免疫... 近年来,白细胞介素4(IL-4)基因治疗的研究取得了很大进展并已试用于临床治疗晚期肿瘤.我们的实验也曾表明,IL-4基因转染的肿瘤细胞所制备的瘤苗对于实验性肺转移荷瘤小鼠具有一定疗效,该作用可能与IL-4基因的转染与表达对肿瘤细胞免疫原性的增强及IL-4对机体抗肿瘤免疫功能尤其是T细胞功能的激发有关; 展开更多
关键词 白细胞介素-4 b7-1基因 瘤苗 肿瘤 基因疗法
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RNA干扰下调bcl11b基因表达对Molt-4细胞增殖和凋亡的影响 被引量:2
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作者 黄欣 陈思 +2 位作者 李扬秋 杨力建 陈少华 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期247-250,共4页
目的分析下调bcl11b基因表达对人T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞增殖和凋亡的影响。方法通过核转技术将bcl11b-siRNA转染Molt-4细胞;在不同时间点分别采用荧光实时定量PCR观察其对bcl11b基因表达的影响;MTT法观察对Molt-4细胞体外增... 目的分析下调bcl11b基因表达对人T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞增殖和凋亡的影响。方法通过核转技术将bcl11b-siRNA转染Molt-4细胞;在不同时间点分别采用荧光实时定量PCR观察其对bcl11b基因表达的影响;MTT法观察对Molt-4细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞术及刘氏染色检测siRNA的诱导凋亡作用。结果转染后24小时开始细胞生存率均显著降低(P<0.01),细胞发生凋亡,bcl11b基因表达下调。结论bcl11b-siRNA可抑制Molt-4细胞中bcl11b基因表达,使肿瘤细胞增殖抑制和发生凋亡。 展开更多
关键词 小干扰RNA bcl11b基因 MOLT-4细胞
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p15^(INK4B)基因甲基化在急性粒细胞白血病和慢性粒细胞白血病中的研究 被引量:2
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作者 郭秀枝 范洪涛 +8 位作者 吴穷 周涛 郭秋野 陈鹏 许敏华 张学莉 罗更新 肖扬 梁实 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期266-270,共5页
为探索 p15 INK4B基因在CpG岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用 ,应用敏感的甲基化特异的MSP PCR的测定方法 ,测定了 p15 INK4B基因在急性粒细胞白血病 (AML)和慢性粒细胞白血病 (CML)中甲基化的表达变化。研究结果表明 ,p15 INK4B... 为探索 p15 INK4B基因在CpG岛高甲基化对白血病发病机制的重要作用 ,应用敏感的甲基化特异的MSP PCR的测定方法 ,测定了 p15 INK4B基因在急性粒细胞白血病 (AML)和慢性粒细胞白血病 (CML)中甲基化的表达变化。研究结果表明 ,p15 INK4B基因操纵区在AML和CML中的甲基化发生率分别为 83.9% (2 6/ 31)和 0 % (0 / 2 8)。结论提示 :甲基化是p15 INK4B基因在AML中主要的失活方式之一 ,并可在病程进展中出现甲基化 ,使病情加重 ;在CML中无甲基化的发生 ,说明p15 展开更多
关键词 p15^INK4b基因 甲基化 急性 粒细胞白血病 慢性
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骨髓增生异常综合征P15^(INK4B)基因甲基化及药物去甲基化作用 被引量:9
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作者 叶雪石 刘霆 +2 位作者 崔旭 孟文彤 席亚明 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期57-59,共3页
目的检测骨髓增生异常综合征(M DS)患者P 15INK 4B基因甲基化状况;探讨5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶(dec itab ine)和三氧化二砷(A s2O3)对M DS患者细胞的去甲基化作用。方法采用限制性内切酶联合PCR方法检测14例M DS患者P 15INK 4B基因甲基化... 目的检测骨髓增生异常综合征(M DS)患者P 15INK 4B基因甲基化状况;探讨5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶(dec itab ine)和三氧化二砷(A s2O3)对M DS患者细胞的去甲基化作用。方法采用限制性内切酶联合PCR方法检测14例M DS患者P 15INK 4B基因甲基化,选择1例由M DS转化为急性白血病患者的外周血单个核细胞,分组分别加入dec itab ine和A s2O3进行处理,分析甲基化程度变化情况。结果低危组M DS患者(RCM D)均未发现P 15INK 4B基因甲基化,4例高危组M DS患者(RAEB)和4例M DS-AL患者发现P 15INK 4B基因甲基化。经dec itab ine和A s2O3处理后,M DS患者细胞的甲基化程度均降低50%左右。结论M DS的发生与P 15INK 4B基因甲基化密切相关,dec itab ine和A s2O3均对M DS患者细胞高度甲基化的P 15INK 4B基因具明显去甲基化作用。 展开更多
关键词 骨髓增生异常综合征 P15^INK4b基因甲基化 5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶 三氧化二砷
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SALL4和DNMT3b在子痫前期胎盘组织中的表达及临床意义
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作者 王晓辉 张彩丽 +3 位作者 刘艳丽 陶玲玲 罗晓华 刘月华 《海南医学》 CAS 2023年第24期3582-3586,共5页
目的探究人类婆罗双树样基因4(SALL4)、DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达水平及其临床意义。方法选取2019年5月至2020年8月于郑州大学第三附属医院行剖宫产的88例PE孕妇作为PE组,按PE孕妇病情将其分为轻度组5... 目的探究人类婆罗双树样基因4(SALL4)、DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达水平及其临床意义。方法选取2019年5月至2020年8月于郑州大学第三附属医院行剖宫产的88例PE孕妇作为PE组,按PE孕妇病情将其分为轻度组51例和重度组37例,另纳入同期行剖宫产的正常妊娠孕妇88例作为对照组。比较三组孕妇的一般资料,收集孕妇分娩后的胎盘组织,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定并比较三组孕妇胎盘组织中SALL4、DNMT3b mRNA表达水平;采用Pearson法分析胎盘组织SALL4、DNMT3b mRNA表达水平与PE孕妇舒张压、24 h尿蛋白、收缩压及新生儿体质量的关系,及SALL4 mRNA表达水平与DNMT3b mRNA的关系。结果轻度组、重度组和对照组孕妇的舒张压[(11.36±1.44)kPa vs(12.36±1.77)kPa vs(9.83±1.31)kPa]、24 h尿蛋白[(2.07±0.68)g/24 h vs(3.21±1.11)g/24 h vs(0.12±0.04)g/24 h]、收缩压[(17.65±1.53)kPa vs(18.77±2.20)kPa vs(15.37±1.53)kPa]、胎盘组织SALL4(1.48±0.49 vs 2.31±0.77 vs 1.04±0.35)、DNMT3b mRNA(1.53±0.51 vs 2.41±0.80 vs 1.01±0.34)表达水平比较,轻度组、重度组明显高于对照组,而新生儿体质量[(3058.61±378.73)g vs(2922.73±356.66)g vs(3412.54±437.36)g]比较,轻度组、重度组明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),而重度组孕妇的舒张压、24 h尿蛋白、收缩压、胎盘组织SALL4、DNMT3b mRNA表达水平明显高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson分析结果显示,胎盘组织SALL4 mRNA表达水平与PE孕妇舒张压、24 h尿蛋白、收缩压水平呈正相关(r=0.552、0.496、0.573,P<0.05),与新生儿体质量呈负相关(r=-0.397,P<0.05);胎盘组织DNMT3b mRNA表达水平与PE孕妇舒张压、24 h尿蛋白、收缩压呈正相关(r=0.478、0.394、0.501,P<0.05),与新生儿体质量呈负相关(r=-0.415,P<0.05)。结论PE孕妇胎盘组织SALL4、DNMT3b mRNA表达水平较高,两者呈正相关,SALL4、DNMT3b可能是治疗PE的靶点。 展开更多
关键词 人类婆罗双树样基因4 子痫前期 DNA甲基转移酶3b 胎盘组织 临床意义
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河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究 被引量:5
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作者 邹建湘 王立东 白永敏 《世界华人消化杂志》 CAS 1999年第3期272-272,共1页
基因丢失导致p16INK4a和(或)p15INK4b对CDK激酶的抑制作用丧失,从而导致细胞增生调节失控[1-3],目前在多种肿瘤中已发现存在p15INK4b和p16INK4a的失活现象[4-6].作者近年对河南食管... 基因丢失导致p16INK4a和(或)p15INK4b对CDK激酶的抑制作用丧失,从而导致细胞增生调节失控[1-3],目前在多种肿瘤中已发现存在p15INK4b和p16INK4a的失活现象[4-6].作者近年对河南食管癌高发区林州市居民的研究证实,肿瘤... 展开更多
关键词 河南 食管癌 p15INK4b基因 p16INK4a基因
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