茶树CsbHLH基因启动子的克隆与活性

为探明茶树bHLH(CsbHLH)基因启动子在基因表达过程的调控作用,以"1005"茶树新品系芽为材料,采用染色体步移技术,分离克隆CsbHLH的上游5′端启动子序列,相关生物信息学分析分别运用在线软件Neural Network PromoterPrediction与Plantcare,克隆的启动子同向置换pCAMBIA1301载体上的CaMv35S启动子来构建重组表达质粒,然后分别进行注射烟草叶片瞬时表达实验和转化拟南芥功能验证.分离克隆得到CsbHLH基因启动子片段长度为810 bp,命名为probHLH,该启动子除含有与高转录水平相关的顺式作用元件5′UTR Py-rich stretch,CAAT-Box与TATA-Box核心启动子元件外,也包含多个激素应答元件、逆境响应元件和功能特异或者未知功能的作用元件;probHLH具有启动子驱动活性,转基因拟南芥实验结果显示probHLH启动子驱动的下游GUS基因在整个拟南芥植株都可以表达,而且能响应脱落酸ABA、茉莉酸甲酯MeJA、赤霉素GA3、NaCl、PEG-6000和光等非生物胁迫.本研究表明CsbHLH基因启动子为诱导型启动子特性,可能具有多重因子的诱导活性,CsbHLH基因可能参与ABA、MeJA和GA3多个激素信号转导和非生物胁迫应答过程.