lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低(P<0.05);与si-NC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);与miR-NC+模型组比较,miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleavedcaspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);lncRNA CTBP1-AS2可负调控miR-205-5p表达;与si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miRNC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论:干扰lncRNA CTBP1-AS2表达可通过促进miR-205-5p表达抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞损伤。

木犀草素调控CTBP1-AS2/miR-493-5p对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨木犀草素对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(hRECs)损伤的影响,分析其保护机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)C-末端结合蛋白-1反义RNA2(CTBP1-AS2)和miR-493-5p表达有关。方法用30 mmol/L葡萄糖处理hRECs 48 h建立细胞损伤模型。将hRECs分为正常糖(NG)组、高糖组(HG)、甘露醇组(MA)、HG+木犀草素低剂量组、HG+木犀草素中剂量组、HG+木犀草素高剂量组。为探讨木犀草素是否调控CTBP1-AS2/miR-493-5p影响高糖诱导的hRECs损伤,将hRECs分为HG+pcDNA组、HG+pcDNA-CTBP1-AS2组、HG+木犀草素+si-CTBP1-AS2组。实时定量PCR检测hRECs中CTBP1-AS2和miR-493-5p表达水平;流式细胞术检测hRECs凋亡率;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。荧光素酶报告实验确定CTBP1-AS2和miR-493-5p靶向关系。结果与NG组比较,HG组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著升高,SOD活性、CTBP1-AS2表达量显著降低(均P<0.05)。与HG组比较,HG+木犀草素低剂量组、HG+木犀草素中剂量组、HG+木犀草素高剂量组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著降低,SOD活性、CTBP1-AS2表达量显著升高(均P<0.05)。与HG+pcDNA组比较,HG+pcDNA-CTBP1-AS2组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著降低,SOD活性显著升高(均P<0.05)。miR-493-5p是CTBP1-AS2的靶基因。与HG+木犀草素高剂量组比较,HG+木犀草素+si-CTBP1-AS2组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著升高,SOD活性显著降低(均P<0.05)。结论木犀草素可减轻高糖诱导的hRECs凋亡和氧化应激损伤,其机制可能是通过上调CTBP1-AS2/miR-493-5p途径实现的。

SOX2和CTBP1相互作用对非小细胞肺癌转移的意义

目的探讨SOX2和CTBP1异常表达在非小细胞肺癌(NSCLC)转移中的作用机制。方法 Western blot检测新鲜NSCLC组织及相应的癌旁组织中SOX2和CTBP1蛋白表达;免疫沉淀法分析SOX2和CTBP1在非小细胞肺癌细胞和组织中有无相互作用;用免疫组织化学染色法(IHC)检测114例NSCLC石蜡标本中SOX2和CTBP1蛋白表达;通过转染质粒分析SOX2-CTBP1相互作用的调节机制及其对非小细胞肺癌转移的影响。结果 SOX2和CTBP1的表达水平在肺癌组织中要明显高于癌旁组织(P<0.05);SOX2-CTBP1能形成复合物,SOX2、CTBP1在NSCLC转移组中的表达水平明显高于非转移组的表达水平(P<0.05)。CTBP1的高表达与肿瘤分期、组织分化程度﹑SOX2表达、Ki-67表达相关(P<0.05)。在细胞水平,干扰CTBP1表达可下调SOX2及其下游靶基因Snail的表达,从而使H1299细胞体外迁移能力受到抑制。结论 SOX2和CTBP1的异常表达可能与NSCLC发生、发展有关,并且SOX2-CTBP1相互作用可能促进了NSCLC的侵袭转移。

CtBP1在上皮性卵巢癌组织中表达及意义

目的探讨CtBP1在上皮性卵巢癌组织中表达及其与临床病理相关因素之间的关系。方法采用Western blot检测5例正常卵巢组织组、10例卵巢良性肿瘤组织及50例上皮性卵巢癌组织中CtBP1蛋白的表达变化,SPSS统计软件分析它们与临床病理参数之间的关系及其相关性。结果卵巢癌组织中CtBP1阳性表达显著高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);CtBP1表达水平与卵巢癌手术病理分期明显相关(P<0.05)。结论上皮性卵巢癌组织CtBP1的过表达与卵巢癌的发生发展密切相关,其有可能成为辅助上皮性卵巢癌组织诊断的重要辅助性指标之一。

GMA诱导16HBE恶性转化细胞中LncRNA CTBP1-AS1的表达及意义

目的探讨LncRNA CTBP1-AS1在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导的16HBE恶性转化细胞中的表达水平及意义。方法收获经8μg/m L GMA诱导的第30代16HBE恶性细胞及同代龄DMSO对照组细胞,应用高通量LncRNA芯片比较两组样本表达谱差异。通过差异倍数、邻近编码基因信息分析等策略筛选出16HBE恶性转化细胞LncRNA CTBP1-AS1及其最可能的蛋白质编码基因CTBP1,采用全基因组表达谱芯片和实时荧光定量PCR(qPCR)验证LncRNA CTBP1-AS1和CTBP1 mRNA的相对表达量。结果LncRNA芯片结果显示,与同代龄DMSO对照组相比,GMA诱导的16HBE恶性转化细胞中CTBP1-AS1上调2.20倍,CTBP1 mRNA上调1.26倍;qPCR结果显示,与同代龄DMSO对照组(26.74±0.23)×10^-5相比,GMA诱导的16HBE恶性转化细胞(91.70±0.70)×10^-5中LncRNA CTBP1-AS1表达明显上调(P<0.05),并与LncRNA芯片结果一致。结论GMA可以诱导16HBE细胞LncRNA CTBP1-AS1表达上调,LncRNA CTBP1-AS1可作为GMA诱导的16HBE恶性转化细胞中相关特异分子标志物。

沉默CtBP1基因逆转人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR^(+/+))的多药耐药性

目的:探讨短发夹式RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰羧基末端结合蛋白1(C-terminal-binding proteins 1,CtBP1)基因表达是否可以逆转多药耐药基因1(multidrug resistant gene 1,MDR1)介导的人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的多药耐药性。方法:采用脂质体转染法将特异性的shRNA1和shRNA2及非特异性的shRNAHK质粒转染入人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中,RT-PCR法检测各组细胞MDR1基因表达水平,Western印迹法检测各组细胞P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,MTT法测定各组细胞对多柔比星的敏感性变化。结果:RT-PCR结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞中MDR1基因被抑制,基因表达抑制率约50%;Western印迹结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞P-gp蛋白的表达水平显著降低;MTT检测发现,shRNA转染48和72h时shRNA1组和shRNA2组细胞对多柔比星的敏感性增加(P<0.01)。结论:沉默CtBP1基因可抑制人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中MDR1基因和P-gp蛋白的表达,降低细胞的耐药性。

新疆哈萨克族及汉族食管鳞状细胞癌组织中CtBP1、CyclinD1的表达及意义

目的探讨新疆哈萨克族及汉族食管鳞状细胞癌组织中CtBP1与CyclinD1蛋白的表达情况及其与临床病理参数的关系。方法应用免疫组化法检测125例食管鳞状细胞癌组织及其癌旁正常组织中CtBP1、Cyclin D1的表达。结果(1)哈萨克族及汉族食管鳞状细胞癌均多见于中老年人,食管鳞状细胞癌好发于中下端。(2)CyclinDl阳性染色细胞主要分布于肿瘤组织细胞核中,CyclinD1在食管鳞状细胞癌组织的阳性表达率(50.4%)显著高于癌旁正常组织的阳性表达率(20%)(P<0.01);而CtBP1在癌旁正常鳞状上皮的阳性表达率(88%)高于食管鳞状细胞癌组织的阳性表达率(66.4%),差异有统计学意义(P<0.01)。(3)哈萨克族食管鳞状细胞癌组织中CyclinDl阳性表达率(65%)高于汉族食管鳞状细胞癌组织的阳性表达率(36.9%),差异有统计学意义(P=0.02);(4)在哈萨克族食管鳞状细胞癌组织中,肿瘤直径≥3 cm和<3 cm者CtBPl的表达差异有统计学意义(P=0.037),同时在不同肿物类型中CtBP1的差异有统计学意义(P=0.02);在汉族食管鳞状细胞癌组织中,CtBP1的阳性表达在不同性别、不同年龄组、肿瘤部位、肿瘤大小、大体类型、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、血管侵犯、神经侵犯等临床指标差异均无统计学意义(P>0.05)。CtBP1和CyclinD1在食管鳞癌组织的表达呈正相关。结论Cyclin D1、CtBP1可能在哈萨克族食管鳞状细胞癌的发展中发挥着重要作用,二者联合检测可能对哈萨克族与汉族食管鳞状细胞癌的诊治具有指导意义。

CtBP1基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果的初步鉴定

目的：构建C-末端结合蛋白-1（CtBP1）基因RNA干扰（RNAi）的真核表达载体,转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,初步鉴定其干扰效果。方法：以人CtBP1基因为靶基因,以pGenesil-1质粒为载体,根据GenBank数据库提供的CtBP1基因核苷酸序列,选择设计两条siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带有绿色荧光蛋白（EGFP）基因、卡那霉素（Kanr）抗性基因及U6启动子的真核表达载体pGenesil-1中,构建针对CtBP1基因的shRNA真核表达载体,转化大肠杆菌DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。确认载体构建成功后,用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒瞬时转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计数转染细胞数,计算转染效率,RT-PCR法检测载体对CtBP1基因的表达抑制效果。结果：构建针对CtBP1基因的pGenesil-1-CtBP1小发夹RNA（pGenesil-1-CtBP1-shRNA）,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞表达绿色荧光蛋白（EGFP）,证实重组质粒己转染入细胞,转染效率达到60%-70%;RT-PCR结果显示B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞中CtBP1基因被特异抑制,基因表达抑制率达40%以上,与转染试剂对照组、空白对照组和阴性序列对照组间的差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。结论：成功构建CtBP1基因的shRNA表达载体,可以有效抑制B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞上CtBP1基因表达。为进一步研究CtBP1基因功能进而逆转肿瘤的多药耐药奠定基础。

非小细胞肺癌组织CtBP1和P16蛋白的表达及意义

目的探讨CtBP1和P16蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其与NSCLC发生、发展的关系。方法采用免疫组化方法分别检测66例肺癌组织及30例癌旁组织中CtBP1和P16蛋白表达,分析其与NSCLC临床病理学参数之间的关系。结果肺癌组织CtBP1和P16蛋白阳性表达率分别为91.0%和47.0%,P16蛋白在癌旁组织中的阳性表达率高于肺癌组织（χ^2=9.196,P〈0.05）,而两者CtBP1蛋白的表达差异无显著性（P=0.662）。肺癌组织CtBP1蛋白与P16蛋白的表达呈负相关性（r=-0.392,P〈0.05）。P16蛋白表达与肺癌的临床分期、有否淋巴结转移和肿瘤分化程度有关（χ2=5.079~9.333,P〈0.05）,而与病理类型无关（P〉0.05）;CtBP1蛋白表达与上述临床病理学参数均无关（P〉0.05）。结论 P16表达缺失与NSCLC的发生、发展密切相关;联合检测CtBP1和P16可作为判定NSCLC恶性程度及评估其侵袭性、转移性的重要方法。

CtBP1在神经胶质瘤组织中表达及意义的研究

目的研究人脑神经胶质瘤组织中CtBP1蛋白的表达,旨在了解其与人脑神经胶质瘤恶性生物学行为之间的关系,并探讨其在人脑胶质瘤中的作用及其临床意义。方法采用免疫组织化学测定50例人脑神经胶质瘤手术切除标本及6例癫痫患者手术切除的正常脑组织标本中CtBP1的表达水平变化。结果 CtBP1蛋白的表达随着人脑胶质瘤级别的升高而逐渐升高,而在正常脑组织中表达水平极低;正常脑组织组、低级别人脑胶质瘤组及高级别组之间表达的差异有明显统计学意义(P<0.05);CtBP1蛋白的表达水平与人脑胶质瘤的病理级别之间呈现正相关(P<0.05)。结论 CtBP1蛋白的高表达可以反映人神经脑胶质瘤的恶性生物学行为,在人脑胶质瘤的发生过程中起着重要作用,它可能是脑胶质瘤抗凋亡、恶性增殖的一个关键性的调控因子。

肝细胞肝癌中转录辅抑制因子CtBP1与其靶基因E-cadherin的表达

目的探讨转录辅抑制因子CtBP1在肝细胞肝癌中的表达状况及对其靶基因E-cadherin表达的影响。方法采用免疫组化方法检测肝细胞肝癌组织芯片中CtBP1及E-cadherin的表达。结果 CtBP1在肝细胞肝癌组织中表达阳性率为79.69%(204/256),其表达与分化程度相关(P=0.049);E-cadherin在肝细胞肝癌组织表达率为20.31%(52/256),与肿瘤分级相关(P=0.027);CtBP1在肝细胞肝癌组织中表达与E-cadherin呈负相关(P=0.036)。结论在肝细胞肝癌组织中,CtBP1和E-cadherin可以作为肿瘤诊断的分子标记;同时转录辅抑制因子CtBP1对其靶基因E-cadherin的表达有抑制作用。

胆管细胞癌中CtBP1、Zeb1、Zeb2与E-cadherin蛋白的表达及临床意义

目的探讨转录抑制因子Zeb1、Zeb2、转录辅抑制因子CtBP1及其靶基因E-cadherin在胆管细胞癌中的表达及CtBP1、Ecadherin的临床意义。方法采用免疫组化法检测胆管细胞癌及癌旁组织芯片中CtBP1、Zeb1、Zeb2和E-cadherin的表达。结果CtBP1在胆管细胞癌及癌旁组织中的阳性率分别为44.44%和17.86%,Zeb2分别为34.92%和10.71%,E-cadherin分别为50.79%和100%,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。Zeb1在胆管细胞癌仅1例表达,而在癌旁组织中不表达。CtBP1与胆管细胞癌的分化程度相关(P<0.05),E-cadherin与胆管细胞癌的分化程度及远处转移有关(P均<0.05)。E-cadherin和CtBP1及Zeb2表达呈负相关(r=-0.034、-0.029,P均<0.001),CtBP1和Zeb2表达呈正相关(r=0.228,P=0.005)。结论胆管细胞癌中CtBP1、Zeb2与E-cadherin均表达异常,CtBP1、Zeb2可能共同参与E-cadherin表达调控。联合检测CtBP1和E-cadherin有望成为评估胆管细胞癌恶性生物学行为的参考指标。

Zeb1、CtBP1与E-cadherin在结肠腺癌中的表达及意义

目的:探讨转录抑制因子Zeb1、转录辅抑制因子CtBP1在结肠腺癌中的表达及与其靶基因Ecadherin的关系。方法:采用免疫组织化学染色方法检测结肠腺癌及癌旁组织中E-cadherin、Zeb1和CtBP1表达。结果:CtBP1在结肠腺癌组织及癌旁组织中表达阳性率分别为96.25%和100%,Zeb1分别为28.75%和0%,E-cadherin分别为32.50%和100%。E-cadherin表达和CtBP1表达不相关,而与Zeb1表达成负相关。结论:结肠腺癌中Zeb1与E-cadherin均表达异常;结肠腺癌中Zeb1异常表达可能是E-cadherin表达下调的机制。

CtBP1、E-cadherin蛋白在胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的对比羧基末端集合蛋白1(CtBP1)与E-钙黏蛋白(E-Cadherin)在胆管细胞癌组织以及正常的癌旁组织中的表达情况,分析其临床意义。方法收集2014年1月至2019年1月平舆县人民医院接受胆管细胞癌治疗并行切除手术的60例患者的癌组织和癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学染色法检测组织中CtBP1和E-Cadherin的表达情况,并分析二者与胆管细胞癌临床病理特征的关系和表达的相关性。结果胆管细胞癌组织CtBP1的阳性率显著高于癌旁正常组织阳性率(P<0.05),E-Cadherin的阳性率显著低于癌旁正常组织阳性率(P<0.05)。胆管细胞癌组织中CtBP1的表达与癌症的分化程度有关(P<0.05),E-Cadherin的表达与癌症分化程度及淋巴结的转移均有关(P<0.05)。胆管细胞癌组织CtBP1和E-Cadherin的表达呈负相关性(P<0.05)。结论CtBP1和E-Cadherin在胆管细胞癌组织中表达异常,二者可能存在调控关系,其联合检测可以为胆管细胞癌的临床诊断提供参考价值。

肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白的表达与临床意义

目的:探究羧基末端结合蛋白1(CtBP1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)在肝癌组织中的表达情况及临床意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测200例肝癌及癌旁组织标本CtBP1和E-钙黏蛋白的表达情况,并分析CtBP1、E-钙黏蛋白表达与肝癌临床病理特征的关系,以及肝癌组织二者表达的相关性。结果:肝癌组织CtBP1的阳性表达率明显高于癌旁组织、E-钙黏蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达与年龄、性别无关(P>0.05),与TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达呈负相关关系(r=-0.102,P<0.05)。结论:肝癌组织CtBP1和E-cadherin均呈异常表达,且二者可能存在调控关系,联合检测CtBP1、E-钙黏蛋白有望成为评估肝癌恶性生物学行为的指标。

结核分枝杆菌ICL抑制CTBP1表达并促进细胞凋亡

异柠檬酸裂合酶(Isocitrate Lyase,ICL)参与乙醛酸循环,是结核分枝杆菌能在宿主体内潜伏的关键因素之一.为了探索ICL在结核菌与宿主相互作用中的地位,首先通过酵母双杂交技术在人淋巴细胞cDNA文库中筛选得到一个新的ICL相互作用蛋白CTBP1(C Terminal Binding Protein 1).然后分别采用GST pull-down和Co-IP实验证实了这两个蛋白在体外和体内与ICL相互作用的特异性.通过使ICL在HEK293T细胞中过表达,发现内源性CTBP1在转录水平和蛋白水平的表达都受到了抑制,同时导致细胞增殖减缓、凋亡加快,并出现G2/M期阻滞等改变.这些结果表明,结核菌ICL在参与介导细胞凋亡、影响宿主细胞活性的过程中起着重要的作用.

Regulation of Neutral Lipid Retention by Rab GTPases and Mono-ADP-Ribosylation of CtBP1/BARS

Aberration of lipid storage in lipid droplets (LD) has been linked with the development and progression of several common metabolic diseases including obesity, type II diabetes,

组织芯片和免疫组化技术在子宫内膜腺癌诊断的应用

目的评价组织芯片和免疫组化技术在子宫内膜腺癌诊断中的应用价值。方法使用组织芯片和免疫组化技术,观察60例子宫内膜腺癌和30例正常子宫内膜的P16、PTEN、E-cadherin和CtBP1表达情况。结果P16、PTEN、E-cadherin在子宫内膜癌的阳性率显著高于正常子宫内膜(P<0.05),而CtBP1的表达差异无统计学意义(P>0.05);4个免疫组化指标在不同分化癌细胞的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论P16、PTEN和E-cadherin与子宫内膜腺癌有关,对于病理诊断有参考价值。使用组织芯片和免疫组化技术能够对批量样本进行快速检测。

莪术醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭能力的影响

目的探讨莪术醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力、侵袭能力的影响。方法利用MTT实验检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖能力;应用基质胶侵袭小室实验检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力;采用real-time PCR法检测经不同浓度的莪术醇药物干预的MDA-MB-231细胞,观察羟基末端结合蛋白1(CtBP1)在不同组中表达的变化。结果不同浓度的莪术醇(100、50、25、12.5μg/mL)处理下,细胞数量呈差异性、阶梯状下降,浓度为100μg/mL的细胞数量减少最为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。同时细胞侵袭能力按药物浓度递减而减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR的结果显示,莪术醇可显著下调MDA-MB-231中CtBP1的表达(P=0.000)。结论莪术醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,对其侵袭能力亦有较强影响,药物浓度越高抑制增殖、侵袭、下调CtBP1表达的效果越明显。