芝麻Cu/Zn超氧化物歧化酶基因的全基因组鉴定与分析

铜/锌超氧化物岐化酶(Cu/Zn-SOD)是植物体内非常重要的一种活性氧清除酶系统,本研究通过blast的方法,在芝麻全因组水平进行Cu/Zn-SOD的鉴定。结果显示,芝麻中含有4条Cu/Zn-SOD,分别命名为SiCSD1、SiCSD2、SiCSD3、SiCSD4。理化性质分析表明,4种蛋白质均为酸性蛋白质,除SiCSD3外,均为亲水蛋白。结构域分析发现,蛋白质均含有Cu/Zn-SOD特有的结构域和金属离子结合域,但都不具有跨膜结构和信号肽。亚细胞定位预测分析发现,SiCSD1-3均定位于叶绿体,SiCSD4除了叶绿体,也有可能定位于细胞质。进化树分析发现,SiCSD3与拟南芥AtCSD2聚为一支,SiCSD4与拟南芥AtCSD3聚为一支,SiCSD1和SiCSD2与烟草NpSODC、番茄SlSODC1和SlSODC2聚在一个大的分支。以上结果初步表明,SiCSD1-4具有Cu/Zn-SOD共同的理化性质,其序列的鉴定将为后续功能的研究打下基础。

杨梅Cu/Zn超氧化物歧化酶基因(MrSOD1)cDNA的克隆及表达分析

以杨梅叶为材料,利用RT-PCR技术克隆Cu/Zn超氧化物歧化酶基因,并利用半定量RT-PCR方法分析该基因在不同组织中的表达。获得1个杨梅Cu/ZnSOD基因编码区全长cDNA序列,长度为461bp,编码一个由152个氨基酸残基组成的蛋白质。该蛋白质具有Cu/ZnSOD的特征信号序列;序列同源性分析表明,其与GenBank中注册的Cu/ZnSOD序列的同源性均在77%以上。该基因命名为MrSOD1(GenBank登录号:GQ404510)。半定量RT-PCR分析显示,MrSOD1在4种组织中表达量为:果>叶>花>枝条。本试验为进一步研究MrSOD1的时空表达特性、调控途径及杨梅抗氧化伤害的分子机理奠定基础。

盐胁迫下花花柴 miR398 对 Cu/Zn 超氧化物歧化酶基因的调控研究

植物miRNA能够参与盐胁迫下基因表达的调控。在盐胁迫条件下盐生植物花花柴miR398（KcmiR398）呈现显著性差异表达，为了探讨rniR398的靶基因及其对靶基因的调控方式，通过生物信息学分析（http：／／plant—grn．noble．Org／psRNATarget／），预测KcmiR398的靶基因分别为Cu／Zn超氧化物歧化酶（SOD）基因CSDl和CSD2。利用RACE技术从花花柴中克隆到CSDl和CSD2基因全长序列，分别命名为KcCSDl和KcCSD2。qRTPCR结果表明：（1）KcmiR398在盐胁迫的花花柴茎中上调表达，在新叶中下调表达；KcCSDl在盐胁迫的老叶中上调表达，而在老茎和根中下调表达；KcCSD2在盐胁迫的老茎和根中上调表达。（2）300mmol／I，NaCl胁迫24~48h，KcmiR398与对照无显著差异；KcCSDl的表达为对照的3倍以上，而KcCSD2的表达没有显著差异。研究表明，花花柴的KcmiR398和KcCSDl、KcCSD2有组织差异性表达，盐胁迫可以影响KcmiR398和KcCSDl、KcCSD2基因的表达以适应盐胁迫产生的氧化危害。

铜锌超氧化物歧化酶(Cu_2Zn_2SOD)在汞电极上的吸附研究

Adsorption behaviors of Cu2Zn2SOD on mercury electrodes were studied by the electrostatic capillary curve and the relationship between polarographic ultimate current and height of mercury column in the absence of the mediators. The effects of impure and denatured SOD on cyclic voltammogram were investigated, confirming that no denaturation was caused during adsorption on mercury electrodes. Double potential step chronocoulometry has confirmed that SOD adsorption on mercury electrode to be the absorption of monomolecular layer.

Cu^(2+)离子对水丝蚓的急性毒性及超氧化物歧化酶活性的影响

采用急性毒性方法,测定了不同质量分数的Cu2+离子溶液处理后的水丝蚓48h半致死浓度(LC50)为8.640μL/L;用测定酶活性方法检测了中毒后的水丝蚓的超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,与对照组比较,Cu2+离子对动物SOD活性影响显著(P<0.05)。低浓度药物(0.500~5.340)μL/L处理动物,SOD活性呈上升趋势;当浓度增加至11.740μL/L时,SOD活性开始表现为不同程度的降低。说明Cu2+离子对水丝蚓造成胁迫,直至动物个体死亡,间接或直接地影响水生生态系统及以水丝蚓为食物的下一级消费者。

葡萄糖和Cu^(2+)对蛹虫草Cu，Zn超氧化物歧化酶在E．coli中表达的影响

对含有蛹虫草Cu,Zn-超氧化物歧化酶(cm-SOD)基因的重组E．coli培养条件进行了初步优化。结果表明,LB培养基国含有Cu^(2+)可明显提高超氧化物歧化酶比活力；而在菌体培养中补加葡萄糖,可提高重组蛋白表达量和细胞生物量。在含有0．6mmol/L Cu^(2+)、Zn^(2+)的LB培养基中补加22mmol/L葡萄糖,每200ml培养液可获得lg湿细胞,超氧化物歧化酶比活力达到3305u/mg。

hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白的制备、穿膜效应及其抗氧化、抗炎症功效

目的 探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析法、分子筛方法纯化Cu,Zn-SOD、hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白并利用Western blotting法鉴定其正确性;利用免疫荧光法、荧光共定位实验、Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD在细胞中的穿膜效应;利用Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白穿膜时间梯度和浓度梯度效应;利用SOD酶活性测定试剂盒检测hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后的SOD酶活性;利用MTT法检测hPP10对细胞活性的影响。利用H2O2建立HEK293氧化应激细胞模型,通过流式细胞分析术(FCM)分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后细胞凋亡情况;并RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后凋亡相关因子的表达情况;通过ROS检测分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后抗氧化能力。TPA诱导建立小鼠耳部炎症模型(5只/组,共4组),然后RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后,NFκB,IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录情况;Western blotting检测NFκB p65、p-NFκB p65、IL-1β、TNFα基因的表达;免疫组化分析炎性因子p-NFκB p65、TNFα基因的表达。结果 成功构建了重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD,并获得Cu,Zn-SOD蛋白和hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白;免疫荧光试验结果表明5μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD转导HEK293细胞具有明显的穿膜效应;荧光共定位实验显示融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD入胞后定位在细胞膜内,部分蛋白定位在细胞核内;Western blotting实验结果表明hPP10-Cu,Zn-SOD转导Hela(P<0.05),HEK293(P<0.01)细胞具有浓度依赖性,细胞内hPP10-Cu,Zn-SOD存在可持续24 h;5μmol/L的hPP10-Cu,Zn-SOD转导细胞具有较好的抗氧化活性(P<0.01);MTT结果显示高达10μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD对于细胞活力的影响小。在氧化应激模型中,FCM结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞降低了细胞的早期凋亡(P<0.01)和晚期凋亡(P<0.05);RT-qPCR结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞使Bcl2、Mcl1、Deptor等抗凋亡因子升高(P<0.05),降低了Bad、P21、P27等促凋亡因子的表达(P<0.05);ROS结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞显著降低了细胞内的活性氧含量(P<0.01)。在炎症模型中,hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白可显著降低IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录(P<0.05);p-NFκB p65、IL-1β及TNFα的表达都呈现了抑制作用(P<0.05);hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白处理组较Cu,Zn-SOD蛋白处理组,降低了炎性因子p-NFκB p65及TNFα基因的表达(P<0.05)。结论 融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD具有明显的穿膜入胞、抗氧化、抗炎功效,且对细胞毒副作用很小。这些结果为hPP10作为新的递送载体奠定基础,也为hPP10-Cu,Zn-SOD应用于护肤品等提供了理论依据。

蛹虫草菌丝体超氧化物歧化酶的制备

目的 从蛹虫草（Cordyceps militaris）菌丝体中制备Cu，Zn-超氧化物歧化酶。方法 超声破碎、硫酸铵沉淀、离子交换。结果 10g湿菌丝体，最佳超声破碎功率400W，超声时间15min。粗酶液经55％-95％硫酸铵沉淀，DEAE-FF阴离子交换柱，CM-52阳离子交换柱纯化，酶蛋白收率22．4％，比活达到13592．1U·mg（蛋白）^-1，纯化倍数214．1倍。SDS-PAGE电泳分析呈现均一条带。紫外最大吸收峰为266nm。该酶对KCN和H2O2敏感。氨基酸组成和其他来源Cu，Zn-SOD相似。结论 本制备工艺切实可行，能获得理想的电泳纯蛋白。

切花月季Samantha失水胁迫耐性与其超氧化物歧化酶之间的关联

以探讨月季切花失水胁迫耐性与其超氧化物歧化酶(SOD)之间的关联为目的,选用耐失水胁迫品种Samantha,用DDTC(SOD专一性抑制剂)进行12h预处理,之后在20℃、RH35%～40%、80μEm-2·s-1光照(12h/d)条件下进行12～48h的失水胁迫处理,然后进行瓶插观察。结果表明,20mmol·L-1DDTC预处理在显著抑制花瓣SOD活性的同时,明显减弱切花失水胁迫耐性,表现在切花弯颈率明显提高,复水率和水势值明显降低,瓶插寿命显著缩短。在花朵自然开放初期,花瓣MnSOD、FeSOD和Cu/ZnSOD这3种类型都存在。其中,MnSOD有1种,FeSOD有3种,Cu/ZnSOD有2种;迁移率大小依次为Cu/ZnSOD>FeSOD>MnSOD;谱带强弱依次为FeSOD>Cu/ZnSOD>MnSOD。经失水胁迫处理花瓣中诱导产生了3条新的FeSOD(FeSOD4、FeSOD5和FeSOD6)条带,与此同时MnSOD条带消失。DDTC预处理抑制了任何与上述失水胁迫诱导有关的新的条带产生。由此推测,切花月季Samantha失水胁迫耐性与其SOD活性相关,与FeSOD4～6的诱导产生相关联。

夏威夷椰子超氧化物歧化酶基因片段的克隆与序列分析

以热带植物夏威夷椰子(Chamaedoreacostricana)基因组DNA为模板,根据SOD基因保守序列设计特异引物进行PCR扩增,得到特异基因片段.回收该基因片段,与pMD182T载体连接,并转化到感受态大肠杆菌ER2566细胞,获得Cu·ZnSOD基因片段的克隆.序列分析表明夏威夷椰子Cu·ZnSOD基因片段含3个外显子和3个内含子,编码64个氨基酸,与玉米、红薯和白杨相应氨基酸序列的同源性分别为82.81%,81.25%,81.25%和79.69%.

细胞外超氧化物歧化酶的研究进展

超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）是机体内广泛存在的一类金属抗氧化酶．能催化超氧阴离子自由基的歧化反应．清除细胞生命活动中产生的超氧离子。真核细胞内存在两类SOD：Cu／Zn—SOD和Mn—SOD。1982年Marklund等发现了第3种SOD并命名为胞外SOD（extracellular—SOD，EC—SOD），它是细胞外体液．如淋巴液、滑膜液及血浆中最主要的SOD。

大鼠血清和胃窦部粘膜超氧化物歧化酶活力在强噪声刺激后的变化

本文采用亚硝酸法检测经强噪声暴露12h的大白鼠血清及胃窦粘膜组织超氧化物歧化酶类(SODs)的活力,并与对照组对比观察。发现其血清Mn-SOD明显下降,而胃窦粘膜Mn-SOD明显上升。两者均P<0.001,其中Cu/Zn-SOD却无明显变化。提示强噪声作用下机体产生有害的活性氧自由基增多,而此时其清除剂SOD,尤其是Mn-SOD代偿性增加。以发挥其细胞保护作用。

可见光谱法研究铜锌超氧化物歧化酶与精氨酸钴(Ⅱ)的相互作用

采用可见光谱（ＶＩＳ）及酶活性测定等方法，研究铜锌超氧化歧化酶 （Ｃｕ_２Ｚｎ_２ＳＯＤ）与精氨酸钴（Ⅱ）（Ｃｏ（Ａｒｇ）ｎ）的直接相互作用以及外加精氨酸钻（Ⅱ）的量、溶液ｐＨ值对此类相互作用的影响．结果发现：在水溶液中原酶活性中心处的Ｚｎ（Ⅱ）离子可被外加的精氨酸钻（Ⅱ）部分诱导、交换出来，而溶液中外加的 Ｃｏ（Ａｒｇ）ｎ中的 Ｃｏ（ Ⅱ）进入酶的活性中心，形成“Ｃｏ－ＳＯＤ”酶衍生物，并相应影响了酶的催化活性．与此同时，外加精氨酸钴（Ⅱ）的量、溶液ｐＨ值对此类相互作用进行有重要的影响．

牦牛铜锌超氧化物歧化酶基因cDNA克隆测序及其分子进化研究

对牦牛Cu/Zn-SOD cDNA进行克隆测序。所扩增片段长度为842bp,编码区长度为459bp。扩增片段与奶牛Cu/Zn-SOD cDNA序列比较发现有16个碱基存在差异。通过与已知Cu/Zn-SOD cDNA序列的7个物种:人、猪、鼠、大鼠、奶牛以及马的cDNA序列的比较构建了分子进化系统树。对所得序列的ORF分析发现,牦牛Cu/Zn-SOD由152个氨基酸组成,并对氨基酸序列进行了比对分析。

超氧化物歧化酶研究中辩证思想的体现

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,简称SOD),是一种重要的氧自由基(又称活性氧)清除剂。它与人类的健康和疾病的发生发展有着密切的关系,因此,在医药界和生化界引起了人们的广泛研究兴趣。本文试从SOD的发现、发展及研究现状出发,说明人们是如何运用辩证法思想认识问题、解决问题的。

儿童红细胞超氧化物歧化酶活性与血清铜锌分析

超氧化物歧化酶(SOD)是生物细胞内天然的自由基清除剂,其生物学意义已受到医学界的广泛关注。人类红细胞SOD有数种,其主要形式是铜锌SOD(CuZn-SOD)。微量元素Cu、Zn对维持CuZn-SOD的结构及其催化活性起着重要作用,且血清中Cu、Zn水平与CuZn-SOD活性亦存在一定的关系。我们对35例4～6岁学龄前儿童血清Cu、Zn、Cu/Zn比值及红细胞活性进行了测定分析,现报告如下。 1 材料与方法 1.1 研究对象

肝片吸虫含Cu/Zn超氧化物岐化酶(Cu/Zn-SOD)的分子克隆与表达

肝片吸虫是一种引起哺乳动物片吸虫病的肝内吸虫,寄生于胆管,主要进行无氧代谢,通常认为宿主可借助氧自由基杀伤虫体。超氧化物岐化酶(SOD)是一种重要的抗氧化酶,在肝片吸虫抵抗宿主氧自由基介导的杀伤机制中对虫体起保护作用。为进一步阐明其机制,作者从感染肝片吸虫的牛肝内收集成虫,抽提SOD,经纯化后分析其特性,并建立cDNA文库;克隆其基因,在大肠杆菌中表达。

水体Cu^(2+)对三疣梭子蟹主要组织ROS含量和抗氧化能力的影响

为探究水体Cu2+对三疣梭子蟹主要组织氧自由基水平和抗氧化能力的影响,采用生态学单因子梯度试验方法,研究了不同浓度水体Cu2+(0.04、0.4、2、4 mg·L-1)胁迫下三疣梭子蟹鳃、肝胰腺、肌肉组织中的活性氧(ROS)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)的变化。结果表明:与对照组相比,低浓度水体Cu2+(0.04、0.4 mg·L-1)对三疣梭子蟹鳃、肝胰腺和肌肉组织ROS含量没有显著影响,而高浓度水体Cu2+(2、4 mg·L-1)会导致鳃、肝胰腺和肌肉组织ROS含量显著升高,且升高的幅度与Cu2+浓度成正比。低浓度水体Cu2+(0.04、0.4 mg·L-1)对三疣梭子蟹鳃、肝胰腺和肌肉组织的SOD活性和T-AOC均具有诱导作用,随实验时间的延长,SOD活性和T-AOC呈峰值变化;而高浓度水体Cu2+(2、4 mg·L-1)短时间内对梭子蟹的鳃、肝胰腺、肌肉组织的SOD活性及鳃T-AOC具有诱导作用,但对肝胰腺和肌肉T-AOC却有明显的抑制作用,在实验时间内两种组织T-AOC始终低于对照组,并呈逐渐下降趋势。由此说明低于0.4 mg·L-1的水体Cu2+在三疣梭子蟹抗氧化解毒能力的可控范围,但高于2 mg·L-1的水体Cu2+会对三疣梭子蟹主要组织细胞造成损伤,使之抗氧化解毒能力下降。抗氧化酶和非酶抗氧化物在三疣梭子蟹抵御Cu2+胁迫中共同发挥作用,三种组织SOD和T-AOC表现出明显的时间和剂量效应。

猪血Cu,Zn-SOD的分离纯化

用加热变性、盐析和凝胶过滤层析的方法从猪血中提取分离出有多种生理活性的Cu ,Zn SOD ,经过分析得知 ,其比活为 1 0 0 3 5u/mg、分子量为 3 1 70 0u的电泳纯单组分。

过氧化氢酶与Cu(Ⅱ)络合的ESR谱及活性分析

用Cu(Ⅱ )对过氧化氢酶 (CAT)进行修饰 ,制备了Cu(Ⅱ )络合的CAT ,称为Cu(Ⅱ )CAT .Cu(Ⅱ )CAT除了具有CAT的活性外 ,还有SOD样活性 .Cu(Ⅱ )CAT可以抵抗O2