文摘目的探讨低氧诱导因子-2α(HIF-2α)基因表达对胃癌BGC823细胞切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达的影响。方法以人HIF-2α基因为模板,突变两个氨基酸位点(P531A、P405A)来构建HIF-2α突变体(HIF-2α-d PA),获得HIF-2α-d PA慢病毒表达载体重组质粒。通过慢病毒感染,建立稳定表达HIF-2α蛋白的BGC823细胞株,采用QPCR、Western blotting检测HIF-2α和ERCC1 mRNA及蛋白的表达。根据人ERCC1基因启动子序列设计引物,扩增人基因组DNA中的ERCC1启动子,将ERCC1基因启动子插入双酶切p GL3-Basic报告载体后,获得p GL3-Basic-ERCC1-promoter载体重组质粒。重组质粒p GL3-Basic-ERCC1-promoter转染BGC823细胞24 h后,通过荧光素酶检测ERCC1启动子活性。结果成功构建HIF-2α蛋白稳定表达的人胃癌BGC823细胞株(HIF-2α-d PA BGC823稳定株),HIF-2α-d PA BGC823稳定株与空质粒转染BGC823细胞、对照质粒转染BGC823细胞相比,HIF-2αmRNA相对表达量上调[(4.50±0.42)vs.(1.42±0.41)vs.(0.99±0.15),P<0.01],HIF-2α蛋白相对表达量上调[(3.75±0.47)vs.(1.00±0.14)vs.(1.05±0.34),P<0.01],而ERCC1 mRNA和蛋白相对表达量均无明显上调。成功构建p GL3-Basic-ERCC1-promoter报告基因载体重组质粒。质粒转染至BGC823细胞及HIF-2α-d PA BGC823稳定株后,两组ERCC1启动子活性明显高于对照组[(1.01±0.17)vs.(1.25±0.12)vs.(0.02±0.02),P<0.01],HIF-2α-d PA BGC823稳定株较未经HIF-2α突变处理的BGC823细胞的ERCC1启动子活性没有明显增加。结论 HIF-2α高表达的胃癌BGC823细胞没有促进ERCC1表达的显著变化。HIF-2α过表达的BGC823细胞没有引起ERCC1启动子活性显著增加。因此,HIF-2α是否调控ERCC1基因的表达,仍需进一步深入探讨。
