Cullin1蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:研究Cullin1在胃癌细胞及胃癌组织中的表达,并分析Cullin1、临床分期与患者生存率之间的相关性.方法:采用Western blot法检测SGC-7901、BGC-823胃癌细胞与正常胃黏膜上皮细胞GES-1中、胃癌组织与癌旁组织中Cullin1蛋白表达差异.我们利用已经构建的胃癌数据库,采用免疫组织化学法检测792例胃癌组织中Cullin1表达.结果:我们研究发现,SGC-7901、BGC-823胃癌细胞中Cullin1表达水平均高于胃上皮细胞株GES-1(P<0.01).胃癌组织中Cullin1蛋白表达水平均高于癌旁组织(P<0.01).Cullin1过表达与胃癌TNM分期(P=0.011)、浸润深度(P=0.035,T1-T3与T4)及淋巴结转移(P=0.036)显著相关.此外,我们发现Cullin1的高表达与胃癌患者较差的总生存时间及3年生存率明显相关(P=0.042,0.026).Cox回归分析显示,Cullin1表达是胃癌患者3年生存率的一个独立的预后因子(P=0.028).结论:我们的数据表明,Cullin1可作为胃癌淋巴结转移、预后以及潜在治疗的一个重要标志和研究目标.

肺部良恶性病变组织中泛素和cullin-1表达及临床病理意义(英文)

目的:研究肺部良恶性病变组织中泛素( ubiquitin)和cullin-1 ( cul-1 )的表达及其临床病理意义。方法:将80例肺癌和20例肺部良性病变手术切除标本常规制作成石蜡包埋切片,采用免疫组织化学EnVsionTM二步法测定泛素和cul-1的表达。分析泛素和cul-1表达与临床分期、分化程度、有无淋巴结转移间的关系。结果:肺癌组织中泛素和cul-1表达阳性率( 51.3%, 60.0%)明显高于肺良性病变组织(20.0%,30.0%;P<0.05) ,中高分化、Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移肺癌组织中泛素和cul-1表达阳性率均明显低于低分化和未分化、Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移者(P<0.01 ～0.05 )。肺癌组织中泛素与cul-1的表达存在高度一致性(χ2=4.04,P<0.05 )。结论:泛素和cul-1表达可能与肺癌发生、进展、临床生物学行为和预后存在密切关系。

乳腺癌中Cullin-1的表达及其与预后的关系

目的 探讨Cullin-1在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理学特征、预后的关系。方法 应用组织芯片技术、免疫组化EnVision法检测Cullin-1在平均随访10年的150例乳腺癌组织中表达,分析Cullin-1的表达与临床病理特征及预后的关系。结果 乳腺癌组织芯片150例点阵中有效回收标本119例,其中阳性82例,阴性37例,阳性率为68.9%。82例阳性标本中Cullin-1均为核阳性,其在ER阴性（64.3%vs71.4%）、PR阴性（65.4%vs71.6%）、HER-2阳性（63.9%vs71.1%）的患者中表达更低,但差异均无统计学意义。临床1、2、3期生存率分别为90.9%、75.6%、56.0%,晚期生存率明显低于早期（χ2=9.131,P=0.01）。Cullin-1阴性、低表达和高表达患者中位生存时间分别为117.3、134.7、38.3个月,高表达者生存期明显减少（χ2=20.8,P〈0.01）。结论 Cullin-1表达水平与乳腺癌发生、发展及预后密切相关,Cullin-1高表达是乳腺癌患者预后不良的因素,可作为临床预后评估的重要指标及作为开发靶向治疗的潜在靶标。

Cullin蛋白4B在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义和细胞功能分析

目的探讨Cullin蛋白4B(CUL4B)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其对NSCLC细胞生物功能的影响。方法采用免疫组化、实时荧光定量PCR(qPCR)检测77例NSCLC组织及42例癌旁正常组织中的CUL4B表达。qPCR检测常见NSCLC细胞株(H358、H460、H1299、A549和SK-MES-1)中的CUL4B mRNA水平,选取表达最高的细胞株分别转染CUL4B siRNA(CUL4B干扰组)和CUL4B阴性对照siRNA(阴性对照组)的慢病毒载体,qPCR验证转染效率;采用MTT法检测干扰CUL4B表达24、48、72、96 h对细胞增殖的影响,流式细胞术和Transwell法检测干扰CUL4B表达48 h对细胞凋亡及侵袭能力的影响。结果 CUL4B蛋白在NSCLC组织及癌旁正常组织中的高表达率分别为63.6%(49/77)和38.1%(16/42),差异有统计学意义(P<0.05);CUL4B表达与肿瘤直径、淋巴结转移及临床分期均有关(P<0.05),而与性别、年龄、病理分型及组织分级无关(P>0.05);qPCR检测NSCLC组织中CUL4B mRNA相对水平为2.713±0.246,经干扰CUL4B表达,NSCLC细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率增加且侵袭转移能力降低。结论 NSCLC组织及细胞株中CUL4B蛋白表达均明显升高,NSCLC组织CUL4B表达与淋巴结转移、临床分期及细胞分化有关;沉默CUL4B表达可影响NSCLC细胞的增殖、凋亡与侵袭。

胃癌细胞中Cullin1基因表达与肿瘤细胞凋亡的关系

目的:探讨胃癌组织及细胞中Cullin1基因表达水平及其对凋亡的影响及其机制。方法:在TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库下载胃癌数据,分析胃癌组织与正常组织中Cullin1表达差异。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测36例胃癌及正常组织中Cullin1基因表达。合成小干扰RNA(Cullin1-siRNA)转染胃癌细胞系AGS,抑制Cullin1表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的增殖活性;流式细胞仪实验检测细胞凋亡率;qRT-PCR和蛋白印迹(Western blot)检测转染各组细胞Cullin1、Bcl2、Bax和Survivin、Livin基因mRNA和蛋白表达。结果:生物信息学结果显示,Cullin1基因在胃癌组织中表达水平明显高于正常组织(P<0.01);不同T分期的胃癌组织中Cullin1基因表达存在差异(P=0.026)。qRT-PCR结果显示验证结果与生物信息学结果符合。Cullin1-siRNA能有效沉默AGS细胞Cullin1基因的表达;有效抑制AGS细胞Cullin1表达后,转染组细胞的活性明显低于NS-siRNA组和空白对照组;凋亡率在Cullin1-siRNA组明显高于NS-siRNA组、空白对照组。Cullin1-siRNA转染后AGS中Cullin1和Bcl2、Survivin、Livin基因和蛋白表达下调,而Bax基因和蛋白表达上调(P<0.05)。结论:Cullin1基因在胃癌中表达增强且与肿瘤浸润深度有关,该基因可能通过抑制胃癌细胞凋亡而发挥作用。

CyclinD1和Cullin-1在鼻咽癌及癌前病变中表达的研究

目的探讨细胞周期蛋白Cyclin-D1和Cullin-1在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达及意义,同时对比它们在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达水平,比较二者的分布情况,找出其差异性及相关关系。方法应用免疫组化检测CyclinD1和Cullin-1蛋白在40例鼻咽癌和20例鼻咽部癌前病变中的表达。结果 Cyclin-D1在20例分化型鼻咽癌、20例未分化型鼻咽癌和20例鼻咽癌前病变中的平均阳性表达率为75%、73%和47%,平均阳性表达值分别为(2.11±0.43)、(1.81±0.68)、(1.15±0.56);Cullin-1在20例分化型鼻咽癌、20例未分化型鼻咽癌和20例鼻咽癌前病变中的平均阳性表达率分别为76%、77%、54%;阳性表达值分别为(1.63±0.7)、(1.62±0.68)、(1.15±0.64)。两种细胞周期蛋白在鼻咽癌中的表达均高于癌前病变,差异有统计学意义(P<0.05)。对20例分化型鼻咽癌标本CyclinD1、Cullin-1阳性表达值进行相关关系分析,两者显著相关。结论 CyclinD1和Cullin-1均参与了鼻咽癌的发生、发展过程,两种蛋白因子在细胞周期调控中有关系需要进一步验证。

新疆野扁桃自交不亲和基因Cullin1的克隆及生物信息学分析

旨在为今后研究新疆野扁桃的分子调控奠定良好基础。通过利用Rt-PCR技术及生物测序等方法,从新疆野扁桃的幼嫩叶片中,克隆得到了一个全新的新疆野扁桃Cullin1基因全长c DNA,命名为Pet Cullin1。并进一步的利用在线软件分析发现:Petcullin1基因全长为2677 bp,其开放阅读框2217 bp,该基因的氨基酸共有738个编码,预测得出Petcullin1蛋白的分子式为C3887H6064N1028O1133S34,原子总数为12096,相对分子质量为85814.61,理论推导出其半衰期为30 h,带正负电荷的残留的总数分别是108和113,不稳定指数和平均疏水指数分别为40.19、-0.452,该蛋白属于水溶性不稳定蛋白。

Cullin7在肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Cullin7在肺癌中的表达及临床意义。方法收集2014年3月至2016年1月期间被我院收治的54例肺癌患者手术切除的肺癌组织和癌旁组织为实验标本。采用免疫组化、RT-PCR、细胞转染等方法检测组织标本中的Cullin7表达情况。结果肺癌组织、癌旁正常组织中Cullin7 mRNA表达量分别为(13.51±4.30)ng/m L、(6.54±2.14)ng/m L,肺癌组织中Cullin7 mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=4.69,P=0.000,P<0.01)。肺癌组织Cullin7蛋白染色阳性细胞数明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=4.54,P=0.000,P<0.01)。肺癌组织中Cullin7 mRNA表达量与患者年龄、肺癌类型无关。随着肺癌病例病理分期的升高、肿瘤大小的增加、分化程度的降低,肺癌组织中Cullin7 mRNA表达增强;此外,肺癌组织中Cullin7 mRNA表达量与病例是否伴淋巴结转移有关。伴淋巴结转移的肺癌组织,Cullin7 mRNA表达量高于未出现淋巴结转移的肺癌组织(P<0.05)。Cullin7表达受到抑制后,A427、H460、A549和H1299的表达明显减少(均P<0.01)。结论 Cullin7在肺癌组织中的表达高于癌旁正常组织。Cullin7的高表达与肺癌组织的病理分期、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移有关。Cullin7有望成为肺癌靶向治疗的目标基因。

Cullin 3在肿瘤中的研究进展

泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)是蛋白质翻译后调控的重要途径,能够维持机体内蛋白质水平的平衡。Cullin 3(Cul3)作为支架蛋白参与构成泛素连接酶复合物,通过与具有BTB(bric-a-brac,tramtrack,and broad complex)结构域的接头蛋白结合,特异性识别底物并介导底物泛素化,参与胚胎发育、细胞周期调控和血压调节等生理过程。研究发现,Cul3功能失调后导致原癌蛋白积累或过度降解肿瘤抑制蛋白,与肿瘤密切相关。因此,本文将就泛素-蛋白酶体系统、E3泛素连接酶复合物,以及Cul3介导底物蛋白降解从而促进或抑制肿瘤的发生、发展作综述。

Cullinl基因在肾癌细胞增殖及迁移侵袭中的作用

目的应用小干扰RNA（siRNA）干扰肾癌786-0细胞及ACHN细胞Cullinl（Cull）基因的表达，探讨Cull基因在人肾癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法用CullsiRNA和ControlsiRNA转染人肾癌786-0及ACHN细胞，转染24h后行CCK-8细胞增殖实验，转染48h后行迁移与侵袭实验，转染48h后提取蛋白，Westernblot检测Cull蛋白及基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9蛋白的表达。结果转染CullsiRNA后，肾癌786-0及ACHN细胞的Cull表达下降明显，肾癌细胞的增殖能力、迁移能力及侵袭能力下降，MMP-2及MMP-9表达下降。结论干涉Cull基因可以抑制肾癌786-0细胞及ACHN细胞的增殖，并通过降低肾癌细胞内MMP-2和MMP-9的表达来抑制肾癌细胞迁移和侵袭。

Cullinl基因对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的研究Cullinl（Cull）基因对乳腺癌细胞迁移及侵袭的影响，并探讨其具体分子作用机制。方法体外化学合成CullsiRNA和ControlsiRNA（si-Ctrl）序列，转染乳腺癌MDA—MB-231和BT-549细胞，细胞迁移和侵袭实验观察抑制Cull的表达对2种乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响；明胶酶谱实验检测Cull对2种乳腺癌细胞分泌基质金属蛋白酶（MMPs）的影响；Westernblot实验观察Cull对2种乳腺癌细胞中金属蛋白酶组织抑制因子（TIMPs）及MMPs蛋白表达的影响。结果抑制Cull的表达可以明显降低2种乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力；Cull的表达降低可以抑制2种乳腺癌细胞分泌MMP-2；抑制Cull的表达可以通过上调TIMP-2的蛋白表达而抑制MMP-2的蛋白表达。结论抑制Cull的表达可以通过上调TIMP-2的表达从而抑制MMP-2的表达，打破了TIMP-2／MMP-2的平衡，最终抑制了乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

Cullin蛋白在生殖系统中的研究进展

Cullin蛋白是Cullin-Ring E3类泛素连接酶(CRLs家族)的组成部分,可通过参与多种蛋白的泛素化修饰来调节蛋白活性,在多种生物学过程中发挥重要作用,目前在生殖系统中的研究日渐增多,本文总结了Culling家族各成员在配子发生与成熟、胚胎发育、生殖内分泌疾病及妇科肿瘤等生殖系统相关疾病中的作用。

靶向Cullin-RING E3泛素连接酶的抗肿瘤策略及相关药物研发进展

Cullin-RING E3泛素连接酶(CRL)是泛素-蛋白酶体系统的重要组分,参与催化蛋白质的泛素化,促进随后的蛋白质降解,从而影响细胞周期、细胞凋亡、DNA复制、信号转导等多种细胞生理活动,且在多种肿瘤细胞中异常活化。以MLN4924为代表的拟素化抑制剂的成功研发有力地证实了CRL是可行的抗肿瘤靶点,具有很好的药物研发潜力。近年来,不断有新的研究通过高通量筛选、基于计算机辅助的虚拟筛选或基于结构的药物设计技术寻找特异的CRL抑制剂,但由于CRL复合物具有多种亚单位,呈蛋白-蛋白相互作用和多变的蛋白构象,缺乏典型的小分子药物结合位点等特性,其相关药物研发仍面临巨大挑战。截至目前,CRL小分子抑制剂主要以研究最为透彻的SCF泛素连接酶复合体的底物识别亚基F-box蛋白家族为靶点。此外,也发现数个通过靶向UBE2M-DCN1相互作用,特异性阻断CRL3/CRL1拟素化,从而抑制CRL3/CRL1泛素连接酶活性的小分子化合物。另一方面,也有CRL激动剂的报道,主要见于植物生长素吲哚乙酸和免疫调节性酰亚胺类药物。此外,靶蛋白水解嵌合体(PROTAC)是一项靶向蛋白-蛋白相互作用的新技术,其通过特异性小分子抑制剂链接一个CRL E3泛素连接酶来精确降解特定促癌靶蛋白,已成为近年来利用E3泛素连接酶设计抗肿瘤靶向药物的热点。

p130、cullin-1和p53在子宫浆液性腺癌中的表达

目的检测p130、cullin-1和p53在子宫浆液性腺癌(USAC)中的表达,探讨其临床病理意义。方法全面手术病理分期的USACⅠ期病例10例,正常增生期子宫内膜组10例作为对照。检测p130、cullin-1和p53蛋白表达及mRNA水平。结果 USAC病例组与正常增生期子宫内膜组相比,p130蛋白和p130 mRNA在USAC中的表达减少,而cullin-1蛋白和cullin-1 mRNA表达升高。结论 USAC有独特的临床和病理特征,USAC中cullin-1蛋白和cullin-1 mRNA表达增加,以cullin-1为中心的SCF复合体介导的泛素-蛋白酶水解过程失活,可能与上述改变有关。USAC中p53蛋白表达增多,而p130蛋白和p130 mRNA表达减少,可能与USAC患者预后较差有关。

家族性高血钾型高血压Cullin3致病突变体neddylation异常的分子机制研究

目的·探讨Cullin3(CUL3)致病突变体Cullin3Δ9(缺失9号外显子,CUL3Δ9)是否由于与COP9信号体(CSN)结合减弱而导致其类泛素化修饰异常。方法·使用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养HEK293细胞株,采用脂质体转染技术,将CSN5 siRNA与FLAG-CUL3质粒或FLAG-CUL3Δ9质粒共转染HEK293细胞,Western blotting观察CUL3和CUL3Δ9类泛素化修饰程度的变化;转染FLAG-CUL3或FLAG-CUL3Δ9质粒后,以金属蛋白酶抑制剂1,10-菲咯啉进行预孵育,Western blotting观察CUL3和CUL3Δ9类泛素化修饰程度的变化;在转染FLAG-CUL3质粒和FLAG-CUL3Δ9质粒后,以FLAG抗体与Dynabeads Protein G磁珠行免疫共沉淀,Western blotting观察CUL3或CUL3Δ9与CSN5的结合状态。结果·转染CSN5 siRNA后,CUL3的类泛素化修饰程度增加,而CUL3Δ9的类泛素化修饰程度无明显变化;以1,10-菲罗啉预孵育后,CUL3的类泛素化修饰程度增加,而CUL3Δ9的类泛素化修饰程度无明显变化;免疫共沉淀结果显示CUL3与CSN5结合,而CUL3Δ9与CSN5结合减弱。结论·CUL3Δ9与CSN结合减弱导致类泛素化修饰异常。

Cullin7泛素连接酶在恶性肿瘤发生发展中的作用

Cullin7(Cul7)作为核心支架蛋白与ROC1、Skp1和Fbxw8一起构成SCF(Skp1-Cullin-F-box)E3泛素连接酶复合物。Cul7是对人和小鼠生长发育具有重要调控作用的基因。Cul7对细胞转化、p53活性调节、细胞衰老以及细胞凋亡的调控作用,说明其具有癌基因的特征。Cul7在乳腺癌、肺癌、肝细胞癌、胰腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中高表达,通过参与细胞转化和抑制细胞凋亡等机制促进肿瘤的发生发展。

Cullin1基因对乳腺癌细胞血管生成的影响

目的探讨Cullin1（Cul1）基因对乳腺癌细胞血管形成的影响及机制。方法使用阴性对照慢病毒（shCtr1）和Cull干涉慢病毒（shCul1）分别转染MDA—MB-231和BT-549细胞，并分别标记为231shCtr1组、231shCul1组和549shCtr1组、549shCul1组。体外血管生成实验观察2种乳腺癌细胞中Cul1干涉后血管生成能力的变化。Westernblot法检测Cul1、血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达。结果与shCtr1组相比，MDA-MB-231和BT-549两种细胞shCul1组形成的毛细血管数目分别减少了96．90％和95．14％；Cul1蛋白表达量分别减少了93．48％和94．85％；VEGF蛋白表达量分别减少了87．18％和93．88％；HIF-1α蛋白表达量分别减少了88．05％和92．25％。结论在乳腺癌细胞中干涉Cul1基因能够下调VEGF和HIF-1α的表达并抑制乳腺癌细胞血管生成。

应用组织芯片技术研究Cullin1在胶质瘤组织中的表达及意义

目的探讨胶质瘤组织中Cullin1的表达及其与临床病理资料之间的关系。方法采用免疫组化法检测胶质瘤组织芯片（正常脑组织8例、癌旁组织8例、胶质瘤组织191例）中Cullin1的表达量及其与临床病理资料之间的关系。结果Cullin1在胶质瘤中的表达量明显高于正常脑组织和癌旁组织（P〈0．05），但是在Cullin1表达量和相应临床病理资料之间未发现有任何联系。结论Cullin1在胶质瘤中的表达量明显升高，促进了肿瘤的发生和发展。

果蝇Cullin 5基因dsRNA设计及RNAi效率检测

Cullin 5作为Cullin蛋白家族的一员对调控细胞内蛋白降解有着重要意义。为便于深入研究果蝇中Cullin 5基因的功能,对Cullin 5基因的5’UTR区域进行ds RNA设计,并通过PCR和体外转录获得相应的ds RNA。利用RNA干扰以及Realtime PCR检测得到该ds RNA的RNAi效率。结果表明设计及合成的Cullin 5基因的ds RNA可显著降低Cullin 5的转录水平(P<0.01),与对照组相比较,其m RNA水平下降至27%,表明该ds RNA具有RNA干扰效果。该实验将为今后研究果蝇Cullin 5基因的功能提供一定的技术支持。

Cullin7蛋白在原发性肝癌癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨Cullin7蛋白在原发性肝癌癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法海口市人民医院原发性肝癌患者130例,采用酶联免疫吸附法及免疫组化法测定原发性肝癌癌组织(原发性肝癌组)及正常肝脏组织(癌旁组)中Cullin7蛋白的表达水平,分析其与临床病理参数和预后的关系。结果原发性肝癌组Cullin7蛋白表达水平高于癌旁组(t=170.644,P <0.05);原发性肝癌组Cullin7阳性率高于癌旁组(χ~2=115.535,P <0.01);Cullin7蛋白表达与年龄不相关(χ~2=3.211,P>0.05);与浸润深度、淋巴结转移、TMN分期、复发、淋巴血管间隙浸润、病理学分级、肿瘤最大径相关性明显,且浸润深度越深、有淋巴结转移、TMN分期越高、有复发、有淋巴血管间隙浸润、病理学分期越高、肿瘤最大径≥5cm,Cullin7蛋白阳性表达率越高(χ~2=19.238、37.717、20.512、23.662、15.331、20.910、15.455,P <0.01);Cullin7阴性组3年生存率及生存期均明显高于Cullin7阳性组(χ~2=34.592,Z=19.764,P <0.01)。结论 Cullin7在原发性肝癌的发生发展过程中起促进作用;Cullin7蛋白在原发性肝癌癌组织中表达量增加,Cullin7蛋白低表达的原发性肝癌患者能获得较好的预后。