刺孢小克银汉霉9980生物酶法制备D苯丙氨酸

筛选到一株产氨基酰化酶的真菌刺孢小克银汉霉9980,直接利用其菌体细胞拆分N乙酰DL苯丙氨酸,最终制得D苯丙氨酸。最适反应条件为:0.2mol/LN乙酰DL苯丙氨酸(含Co2+5×10-4mol/L),0.04g/mL菌体,在pH值为7.0、50℃条件下反应24h,拆分率达90%以上。产物经JK008阳离子交换树脂分离。N乙酰D苯丙氨酸经6mol/LHCl加热回流4h脱乙酰得D苯丙氨酸。DPhe[α]20D=+34.4°(水溶)。

酶法拆分DL-茶氨酸及其分离纯化

将DL-茶氨酸乙酰化为N-乙酰-DL-茶氨酸,利用本实验室筛选的有较高氨基酰化酶活性的真菌刺孢小克银汉霉9980(Cunnighamella echinulata 9980)对DL-茶氨酸进行拆分并对拆分条件进行摸索。结果表明:反应最适温度50℃,最适pH7.0,底物浓度0.5mol/L,湿菌体量4g/100ml,拆分时间30h,拆分率可达92%。产物经JK008阳离子交换树脂氨性柱分离,L-茶氨酸收率84.3%,[α]2D5=8.1(c=2,H2O),符合JP2000药典。

刺孢小克银汉霉氨基酰化酶拆分DL-丙氨酸的研究

选育了刺孢小克银汉霉(Cunninghamellaechinulata)9980菌株,并对其进行液体培养,比较了3种不同培养基中菌体细胞氨基酰化酶活性,考察了几种因素对菌体细胞拆分反应的影响,并对DL-丙氨酸进行了光学拆分。结果表明:蛋白胨培养基菌体细胞酶活最高,达680u/g。菌体细胞拆分反应最适温度55℃,最适pH7.0,最佳底物浓度为0.2mol·L-1,缓冲体系中的无机离子对拆分反应有抑制作用,10-3～10-4mol·L-1的Co2+对拆分反应有激活作用。用菌体细胞对DL-丙氨酸拆分反应中,D-丙氨酸得率平均达87.1%。

刺孢小克银汉霉菌体氨基酰化酶的性质研究

首次选育出有较高氨基酰化酶活性的菌株刺孢小克银汉霉(Cunninghamella echinulata)9980,并进行液体培养,比较了3种不同培养基中菌体细胞氨基酰化酶活性,考察了几种因素对菌体细胞酶活的影响.结果表明:蛋白胨培养基中菌体细胞酶活最高,达680u/g.菌体细胞酶活最适温度55℃,最适pH7.0,最佳底物浓度为0.2mol/L,缓冲液中的无机离子对酶活有抑制作用,10-3～10-4mol/L的Co2+对酶活有激活作用.