仙茅酒蒸炮制工艺研究

目的:优选酒蒸仙茅最佳工艺。方法:采用正交试验设计法,以加酒量、闷润时间、蒸制时间为考察因素,以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷及醇溶性浸出物含量为考察指标,优化仙茅酒蒸炮制工艺。结果:仙茅酒蒸最佳工艺为取生仙茅饮片适量,置密闭容器内,加入黄酒(每100 kg饮片加入黄酒20 kg)拌匀,闷润1 h,置锅中蒸制1 h,取出放凉,50℃干燥。结论:优化所得酒蒸仙茅炮制工艺稳定可行,仙茅酒蒸后有效成分的含量高于仙茅生品和酒炙品,酒蒸工艺优于传统酒炙工艺。

仙茅盐蒸炮制工艺优选

目的 采用正交试验设计法优选盐蒸仙茅最佳工艺。方法 采用正交试验设计法,以盐水比例、闷润时间、蒸制时间为考察因素,以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷及醇溶性浸出物含量为考察指标,优化盐蒸仙茅炮制工艺。结果 仙茅盐蒸最佳工艺为取生仙茅饮片适量,置于密闭容器内,加入盐水(盐水比例1∶17.5,每100 kg仙茅饮片用2 kg食盐)拌匀,闷润1 h,置于锅中蒸制1 h,取出放凉,50℃干燥,即得。结论 优化所得盐蒸仙茅炮制工艺稳定可行,且仙茅盐蒸后有效成分的含量高于仙茅生品、传统酒炙品和盐炙品,盐蒸工艺优于盐炙工艺。

外源激素对仙茅未成熟种子愈伤组织诱导不定芽分化的影响

为缩短仙茅育苗周期,建立高频再生体系。以未成熟种子为外植体,以MS为基本培养基,添加不同的激素浓度配比诱导产生愈伤组织,再用愈伤组织诱导出不定芽,摸索激素种类、浓度和配比对愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,为仙茅无性繁殖体系的建立奠定基础。结果表明,仙茅未成熟种子的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,出愈率为74%;最佳不定芽分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,平均增殖系数达11.7。该研究可为仙茅组培快繁技术提供一种新方法和途径。

仙茅有效成分含量与土壤因子相关性研究

目的:探索影响仙茅有效成分含量的关键土壤因子。方法:以20个不同居群野生仙茅为材料,对根茎中的仙茅苷、总黄酮和总多酚含量及其11个土壤指标进行测定,应用聚类分析法、灰色关联度分析法和Pearson相关性方法分析影响仙茅有效成分含量的关键土壤因子。结果:不同居群间的仙茅有效成分和土壤因子含量存在显著差异。仙茅生长土壤中有机质、全氮、碱解氮和缓效钾含量丰度较高;全磷、全钾含量丰度中等;有效磷、速效钾含量丰度较低。聚类分析显示,20个不同居群野生仙茅的土壤聚为三大类。灰色关联度分析表明海拔、pH、速效钾、全钾、全磷和交换性钙是影响仙茅有效成分的土壤因子。相关性分析表明仙茅有效成分与全钾、海拔呈正相关,与全磷、有机质、交换性钙呈负相关。结论:生产实践中应重视生态因子和土壤环境对仙茅药材质量的影响,种植过程中可通过适当控制有机质、全磷和交换性钙的含量以及合理增施钾肥等措施促进仙茅有效成分的形成和积累,本研究为仙茅科学种植、品质提升和药用价值保护提供了理论依据。

苔黑酚葡萄糖苷通过抑制糖皮质激素受体入核保护地塞米松诱导成骨细胞损伤作用

目的 考察苔黑酚葡萄糖苷对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导成骨细胞损伤的保护作用,并探讨其调控机制。方法 从新生小鼠颅盖骨提取并培养原代成骨细胞(osteoblast,OB),用DEX(1μmol·L^(-1))诱导成骨细胞损伤为模型。采用CCK-8法测定不同浓度苔黑酚葡萄糖苷及有无DEX干预下对成骨细胞增殖的影响;采用试剂盒进行成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性测定;采用茜素红S染色观察骨矿化结节的形成;采用Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况;采用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察细胞内糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的入核情况;采用Western blot法检测GR在细胞核、细胞质和全细胞中的蛋白表达,以及细胞中成骨特征蛋白CollagenⅠ、Runx2、Osterix(Osx)和Dlx5的表达。结果 与对照组相比,DEX组成骨细胞增殖、分化和矿化均明显降低(P<0.05、0.01),细胞凋亡明显升高(P<0.01);与模型组相比,苔黑酚葡萄糖苷组成骨细胞增殖、分化和矿化均明显升高(P<0.01),细胞凋亡明显降低(P<0.05)。与对照组相比,DEX组成骨细胞中GR在核内的表达明显升高(P<0.01),而GR在全细胞和细胞质中的表达明显降低(P<0.01),同时成骨特征蛋白表达也明显降低(P<0.01);与模型组相比,苔黑酚葡萄糖苷组GR在成骨细胞核内的表达明显降低(P<0.01),而GR在全细胞和细胞质中的表达明显升高(P<0.01),成骨特征蛋白的表达均明显升高(P<0.01),且呈剂量依赖关系。结论 苔黑酚葡萄糖苷能够改善DEX诱导的成骨细胞增殖、分化和矿化的抑制作用,并减少其凋亡,其作用机制与苔黑酚葡萄糖苷抑制GR入核,从而调控成骨相关蛋白表达有关。

仙茅酚苷类成分促进成骨细胞骨形成和抑制破骨细胞骨吸收

目的以新生大鼠颅盖骨成骨细胞和由骨髓单核细胞诱导的破骨细胞为模型，观察仙茅代表性酚苷类成分仙茅苷、仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷的抗骨质疏松作用。方法MTT法测定成骨细胞的增殖；磷酸苯二钠法测定成骨细胞碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）的活性；茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成；TRAP染色测定破骨细胞的数目；罗丹明一鬼笔环肽染色和激光共聚焦显微镜观察成骨细胞细胞骨架和破骨细胞肌动蛋白环的结构和形态；将破骨细胞与骨片共同培养，计算机图像处理测定破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝的面积。结果仙茅苷在1O叫和10邓mol／L的浓度下可促进成骨细胞的增殖（P〈0．05），10^-7 -10^-5mol／L浓度时抑制破骨细胞TRAP的活性（P〈O．05）。仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷可减少破骨细胞的数目，抑制破骨细胞的形成（P〈O．05）。仙茅苷在1010mol／L，仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷在10叫mol／L浓度时均可增加成骨细胞ALP的活性和骨矿化结节的形成（P〈O．01），在一定程度上使1，25-二羟维生素战损伤的成骨细胞细胞骨架的结构得以恢复；减少破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝面积，破坏破骨细胞伪足和F-actin的结构。结论仙茅酚苷类成分仙茅苷、仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷均可促进成骨细胞的骨形成，抑制破骨细胞的骨吸收，具有显著的抗骨质疏松作用。

HS-SPME-GC-MS分析仙茅及酒仙茅的挥发性成分

采用顶空固相微萃取法(HS-SPME)结合气质联用技术(GC-MS)对生仙茅(Curculigo orchioides Gaertn.)及酒仙茅的挥发性成分进行分析鉴定,并计算各成分相对百分含量。结果表明,生仙茅中分离出22个峰,鉴定出16种成分,占挥发性成分的72.73%,其中含量最高的为右旋萜二烯,占总挥发性成分的16.22%;从酒仙茅中分离出28个峰,鉴定出24种成分,占挥发性成分的85.71%,其中含量最高的为壬醛,占总挥发性成分的10.09%。仙茅酒制后部分挥发性成分消失,同时也增加了一些新的挥发性成分,为仙茅药材开发利用和临床运用提供科学依据。

仙茅叶片的组织培养及其细胞学观察

目的通过对仙茅叶片组织培养的研究与细胞学观察,为仙茅的快速繁殖提供技术依据。方法将仙茅幼叶培养在MS培养基,通过设计不同的光照条件,附加不同的激素、水解酪蛋白和活性炭成分,调查出愈率和成苗率。细胞学观察采用石蜡切片法。结果对仙茅叶片的愈伤诱导,黑暗的效果好于光照;在所试验的培养基成分中,适宜的激素配比是2.0mg/L2,4-D或6-BA1.5mg/L+2,4-D2.5mg/L,并且附加300mg/L水解酪蛋白和0.2%活性炭,对于仙茅叶片的离体成苗较好;培养后,愈伤组织主要由叶片的中脉产生,位于中脉上表皮内侧的薄壁细胞首先启动分裂,随后维管束鞘薄壁细胞及其外侧的叶肉细胞也启动分裂,参与愈伤组织的形成。愈伤分化时,芽发生于愈伤组织的表面,根发生于愈伤组织的内部。结论可以通过仙茅幼叶的组织培养进行仙茅的快速繁殖。

仙茅的化学成分研究

从仙茅 (CurculigoorchioidesGaertn .)根茎的乙醇提取物中分离鉴定了 7个己知化合物 ,它们是 :curculigosideⅠ (1) ,orcinolglucoside(2 ) ,3,3′,5 ,5′ tetramethoxy 7,9′:7′ ,9 diepoxy lignan 4 ,4′ di O β D glucopyranoside (3) ,3 hydroxy 5 methyl phenol 1 O [β D glucopyranosyl (1→ 6 ) β D glucopyranoside](4) ,2 ,3,4 ,7 tetramethoxyxanthone(5 ) ,1,3,7 trimethylxanthine(6 ) ,daucosterol(7)。其中化合物 3～ 7均为首次从该植物中分离得到。

仙茅的酚苷和木脂素类成分的分离和鉴定

目的:分离鉴定仙茅Curculigo orchioides Gaertn.的酚苷和木脂素类成分。方法:利用硅胶和Sephadex LH-20凝胶柱层析,以及半制备HPLC方法分离化学成分,通过理化性质和光谱方法确定所分离化合物的结构。结果:仙茅乙醇提取物中得到5个酚苷类成分,1个木脂素类成分,1个甾醇类成分。经鉴定分别为2,6-二甲氧基苯甲酸(1)、仙茅苷(2)、仙茅苷乙(3)、仙茅素A(4)、2,4-二氯-5-羟基-3-甲基苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、3,3′,5,5′-四甲氧基-7,9′:7′,9-二环氧木脂素-4,4′-二-O-β-D-葡萄糖苷(6)、β-谷甾醇(7)。结论:从仙茅乙醇提取物中分离出7个化合物,其中化合物(5)为一新的含氯酚类成分,命名为仙茅素D。

仙茅多糖对阿霉素致小鼠心肌损伤的保护作用

目的探讨仙茅多糖(COP)对阿霉素(ADM)诱导小鼠中毒性心肌损伤的保护作用及其机制。方法选用ADM建立小鼠心肌损伤模型。测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)和一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、心肌SOD、MDA等生化指标,并观察心肌结构变化。结果 ADM可致血清CK、LDH、GOT和NOS活力升高(P<0.01),同时血清和心肌SOD活力下降而MDA含量升高(P<0.01)。COP能降低血清CK、LDH、GOT和NOS活力(P<0.05或P<0.01),增加心肌SOD活力和降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。光镜也证实了COP的保护作用。结论 COP对ADM引起的心肌损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与抗自由基、抑制脂质过氧化作用有关。

仙茅多糖对氟尿嘧啶增效减毒作用

本文探讨了仙茅多糖(COP)对氟尿嘧啶的增效减毒作用。实验中建立小鼠S180实体瘤模型,连续给药10 d,测定小鼠瘤重,体质量、白细胞、红细胞、胸腺指数、脾脏指数以及小鼠脾脏中的超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。同时建立小鼠S180腹水瘤模型,连续给药30 d,记录小鼠存活天数,计算生命延长率。结果显示,仙茅多糖能改善氟尿嘧啶引起的小鼠白细胞减少、胸腺萎缩、脾脏肿大(P<0.05或P<0.01);但联用高剂量组使小鼠脾脏中SOD活力(P<0.01)降低,联用低、中剂量组使MDA含量增加(P<0.05)。COP和5-FU均延长荷瘤小鼠的生存期,(5-FU+COP)联合用药组生命延长率比5-FU单独用药组明显增高,且与联用的COP剂量呈量效关系。从而表明仙茅多糖对氟尿嘧啶具有一定的增效减毒作用,机制可能与其能调节机体免疫力有关,而与过氧化反应无关。

仙茅提取物体外抗氧化活性研究

目的探讨仙茅提取物的抗氧化活性。方法先用80%乙醇,然后用蒸馏水对仙茅进行提取,其中醇提浸膏依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取;水提部分经醇沉,制备仙茅粗多糖。分别观察仙茅各提取物对羟基自由基(.OH)、1,1-二苯基-2-苦基苯肼自由基(DPPH.)的清除率以及对Fe3+还原力。结果与抗坏血酸比较,仙茅提取物对自由基均有较强清除作用,对.OH的清除率乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>粗多糖>总醇提物,IC50值分别为0.247、0.358、0.796和0.871mg/ml;对DPPH.的清除率乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>总醇萃取物>氯仿萃取物>石油醚萃取物>粗多糖,其IC50值分别为0.026、0.055、0.620、0.071、0.122和0.275mg/ml。不同提取物对Fe3+有较强还原能力,还原力大小为:乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>总醇提物>氯仿萃取物>石油醚萃取物>粗多糖。结论仙茅具有明显的抗氧化活性,在抗衰老方面有广泛的应用前景。

高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量

目的：建立反相高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量。方法：样品经甲醇提取，色谱柱为ＡｌｔｉｍａＣ１８（５μｍ，４６ｍｍ×２５０ｍｍ），柱温４０℃，甲醇－异丙醇－水（２０∶５∶７５）为流动相，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２８３ｎｍ。结果：仙茅苷在０２５～２５９μｇ范围内呈良好的线性关系，平均回收率为９９６７％，ＲＳＤ为２６％（ｎ＝４）。结论：本方法简便、可靠，重现性好。

仙茅苷对自由基的清除作用

目的研究仙茅(Curculigo orchioidesGaertn.)主要成分仙茅苷(curcu ligoside)对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除作用。方法分别采用比色法及电子顺磁共振技术(ESR)测定仙茅苷对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除效果。结果仙茅苷对羟自由基和超氧阴离子自由基均有良好的清除作用,其清除率略低于茶多酚。结论仙茅苷对自由基具有明显的清除作用,是一种有效的天然抗氧化剂。

仙茅苯甲酸酯类酚苷对去卵巢骨质疏松大鼠的作用(英文)

目的:评价仙茅苯甲酸酯类酚苷(benzylbenzoate glucosides from Curculigo orchioides,COBG)对去卵巢大鼠的抗骨质疏松作用。方法:70只3月龄的Sprague-Dawley大鼠被随机分为正常对照组和去卵巢组。再将去卵巢大鼠分为6组,连续12周分别灌胃给予蒸馏水,1mg/kg尼尔雌醇,6、18和54mg/kgCOBG,3.0g/kg仙茅乙醇提取物。用双能X线吸收仪测定骨密度,并制备胫骨切片进行骨形态计量分析,采用试剂盒测定血清和尿的生化指标。结果:去卵巢大鼠骨质流失和骨组织结构退化显著,其血清碱性磷酸酶活性升高,尿钙排出增加,血清抗氧化物水平降低(P<0.05,P<0.01)。6、18和54mg/kgCOBG使去卵巢大鼠骨密度显著增加,骨组织微结构得到改善,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的损耗减少,并抑制氧化产物丙二醛的增加,减少尿钙排出(P<0.05,P<0.01)。结论:COBG通过改善去卵巢大鼠的抗氧化状态防止骨丢失,COBG有可能成为防治绝经后骨质疏松的有效药物。

正交试验优选仙茅酚苷类成分的提取方法

目的研究仙茅酚苷类成分的最佳提取方法。方法以苔黑酚葡萄糖苷、仙茅苷、仙茅素3种酚苷类成分的含量为考察指标,以HPLC进行含量测定,采用正交试验确定仙茅酚苷类成分的最佳提取方法。各因素考察水平:乙醇浓度(50%、70%、95%)、提取次数(1、2、3次)、提取时间(1、1.5、2h)、溶剂用量(6、8、10倍量)。结果乙醇浓度、提取时间、提取次数和溶剂用量均影响仙茅酚苷类成分的提取效率,其中以乙醇浓度的影响最为显著。最佳提取方法为10倍量70%乙醇回流提取3次,每次2h。结论采用本研究方法能够充分提取仙茅的酚苷类化学成分。

高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量

目的 :建立中药材仙茅中仙茅苷含量的反相高效液相色谱法。方法 :甲醇为溶剂 ,超声提取 ,Sep PakC18柱净化 ,色谱柱IntertsillODS 3,流动相甲醇 水 冰醋酸 (4 5∶80∶1) ,流速 1.0mL·min-1,检测波长 2 83nm。结果 :平均回收率为 99.2 % ,RSD =1.7% (n =5 ) ,6个不同来源的仙茅药材中仙茅苷的含量在 0 .11%～ 0 .35 %。结论 :可作为仙茅药材的质量控制方法。

薄层光密度法测定仙茅中仙茅甙的含量

本文报道用薄层光密度法测定仙茅中活性成分仙茅甙的含量。所用吸附剂为硅胶GF_(254),展开剂为氯仿-甲醇(4:1),样品以甲醇为溶剂用索氏提取器提取8h,提取液浓缩定容于2ml。采用岛津CS-930型双波长薄层扫描仪测定,测定波长282nm,参比波长340nm,反射法锯齿扫描,SX=3。加样平均回收率98.48％。并用此法对购自5个不同地区的仙茅进行了仙茅甙含量的测定比较,方法简便易行,结果稳定。

仙茅的药理研究

实验表明仙茅醉浸剂具有抗高温,耐缺氧等适应原样作用,以及镇静、抗惊厥、雄性激素样等作用,尚能增强小鼠的免疫功能。