Cx43磷酸化及其与ZO-1、Src相互作用的研究进展

缝隙连接（Gap Junction,GJ）是沟通相邻细胞胞质的细胞间通道,介导缝隙连接细胞间通讯（GJIC）,缝隙连接蛋白（Connexin,Cx）是实现GJIC的结构基础,主要通过对细胞信号的传导来发挥作用。

急性心肌缺血猝死例左室心肌Cx43脱磷酸化的免疫组化研究

目的观察急性心肌缺血所致心性猝死,特别是冠心病猝死者与对照组,左室心肌闰盘上缝隙连接蛋白Cx43磷酸化状态的差异,探讨其在急性心肌缺血心律失常的发生,及其诊断心肌缺血早期病变中的意义。方法应用免疫组化SP技术,检测无明显心肌梗死的冠心病猝死组(组Ⅰ)、其他急性心肌缺血所致心性猝死组(组Ⅱ、Ⅲ)和两对照组(组Ⅳ、Ⅴ,严重颅脑损伤或病理性颅内出血所致急性死亡),共45名死者的左心室局部心肌组织(存档蜡块)中Cx43的磷酸化状态。另选用抗心肌闰盘上粘合连接的主要蛋白Pan-Cadherin的抗体和生物素化菜豆凝集素(PHA-E+L/Bio),分别检测心肌细胞间机械耦联与心肌细胞膜的完整性(后者采用亲和组化技术),以便在实验中与Cx43免疫组化染色结果作比较分析。结果⑴在实验组各例标本的心肌闰盘上磷酸化Cx43明显缺染,少数呈点状弥散于胞浆;但在两对照组中,可见磷酸化Cx43聚集于心肌闰盘处。⑵Pan-Cadherin在各例标本中均表现为心肌闰盘处的强阳性着色。⑶各组标本其心肌细胞膜均显示良好,细胞轮廓清晰可辨。结论急性心肌缺血所致心性猝死者,左室心肌细胞间机械耦联和心肌细胞膜的完整性与对照组相比,无明显改变,但闰盘处主司电耦联的缝隙连接蛋白Cx43却发生了明显的脱磷酸化。这提示,后者可能是急性心肌缺血所?

阿片药物预处理对缺氧/复氧损伤心肌细胞Cx43表达的影响

目的探索吗啡和舒芬太尼对新生SD大鼠原代心肌细胞缺氧/复氧损伤模型细胞增殖情况与缝隙连接蛋白43(Cx43)及其磷酸化的影响。方法原代心肌细胞随机分为正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(I/R组)、吗啡组(MF组)和舒芬太尼组(SF组),MF组和SF组分别用吗啡(0.3μmol·L^(-1))和舒芬太尼(0.0003μmol·L^(-1))分别预处理16min后,除去药物,培养20 min;I/R组、MF组、SF组均缺氧2h、复氧1h。用CCK-8试剂盒检测各组的细胞增殖情况;激光共聚焦显微镜观察各组心肌细胞中Cx43的分布与表达;用Western blot法检测Cx43总蛋白及磷酸化Cx43(p Cx43)的表达。结果与C组相比,I/R组、MF组、SF组细胞增殖减少(P<0.01);与I/R组相比,MF组、SF组细胞增殖均增多(P<0.01);MF组细胞增殖多于SF组(P<0.05)。与C组相比,I/R组、SF组、MF组Cx43荧光分布散乱以及强度减弱、Cx43和p Cx43表达量减少(P<0.01);与I/R组相比,MF组和SF组Cx43荧光分布较连续、荧光强度较高(P<0.01),Cx43总蛋白表达量以及磷酸化水平较高(P<0.01);MF组与SF组比较,Cx43荧光分布较整齐、荧光强度较高(P<0.01),磷酸化Cx43表达量较高(P<0.01)。结论舒芬太尼和吗啡对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞均有保护作用,其作用可能与心肌细胞Cx43表达及其磷酸化水平有关,吗啡的心肌细胞保护作用及其Cx43磷酸化作用强于舒芬太尼。