生物芯片高效点样微悬臂梁探针的微细加工

生物芯片技术是 90年代初发展起来的一门新兴技术 ,将给 2 1世纪生命科学和医学研究带来一场革命。其中生物芯片中的微阵列分析最为关键 ,尤其受到人们的关注和研究。微阵列形成主要由各种探针接触式点样而得的。微机电系统(MEMS)的兴起和发展为点样探针的制备提供了简单而有效的微细加工技术。介绍了基于MEMS技术的SiO2 基微悬臂梁探针的设计和制备 ,并用这种探针进行Cy3标记链亲和素点样。结果表明这种微悬臂梁探针可以点样 2～ 3μm的样点 ,并且一次取样可以点样至少 30 0 0个点 ,从而实现高价生物微阵列点样。

靶向VEGF165多模态分子成像探针制备与体内外靶向成像研究

目的构建肿瘤血管内皮生长因子-165(VEGF165)靶向多模态分子探针CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO,观察其体内、外对VEGF165靶向结合能力。方法用N-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺交联剂将USPIO与CY5.5-VEGF165-Aptamer连接;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CY5.5-VEGF165-Aptamer与VEGF165的体外结合能力。建立BEL-7402腋下肝癌荷瘤鼠模型,设计实验组尾静脉注射CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO,对照组注射CY5.5-USPIO,多时间点采集图像,选感兴趣区测量荧光强度,观察两组异同。设计实验组与对照组行MR平扫及多时间点增强扫描,观察两组肿瘤光学及MRI信号强度改变差异。结果 CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO探针理化性质符合对比剂的要求,粒径小于30 nm,饱和磁化强度是35 emu/g左右, Cy5.5发射波峰在707 nm附近。ELISA实验表明CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO仅能与VEGF165结合,而不能与VEGF121结合。荧光图像显示实验组尾静脉给药1 h后出现轻度强化,强化峰值为3 h,6 h强化作用消失。MRI图象表明荷瘤鼠实验组肿瘤在3 h出现明显负性强化,6 h强化作用消失,而对照组相应时间点无强化效应。结论 CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO能在体内、外与VEGF165特异性结合,可望用于VEGF165在体靶向荧光及MRI成像。

基于荧光染料Cy5.5标记的引物延伸法鉴定细菌RNA剪切加工位点

【背景】传统引物延伸法常与放射性标记结合使用,但由于放射性元素半衰期短、危害人体健康及严格的操作要求等限制了其在一般实验室的广泛使用。因此,开发新型非放射性引物延伸法成为当前研究的热点。【目的】建立非放射性的引物延伸法,并利用该方法实现对细菌RNA剪切加工位点的鉴定。【方法】将包含RNA剪切位点的序列克隆至双荧光报告系统,然后利用荧光染料Cy5.5标记的特异性靶向mcherry寡核苷酸引物进行延伸,并辅以Northern blotting、RT-qPCR等技术,确定RNA剪切加工的精确位点。【结果】鉴定了来自解纤维梭菌cip-cel mRNA中的2个剪切加工位点均位于颈环结构下游的单链区域,且在剪切位点附近未发现保守序列。【结论】基于Cy5.5标记的引物延伸法能够精确鉴定RNA剪切加工位点,且与传统的放射性引物延伸法相比,该方法具有更高的安全性和更快的检测速度,能够满足一般实验室的实验要求。