结直肠癌组织中CCNA1、CDC20表达水平及临床预后意义

目的探讨结直肠癌(CRC)组织中细胞周期蛋白A1(CCNA1)、细胞分裂周期蛋白20(CDC20)表达水平及与患者临床表现、预后的关系。方法选取2018年11月至2020年12月期间北京市平谷区医院收治的146例CRC患者作为研究对象,将手术取得癌组织标本纳入CRC组(n=146),将相对应的癌旁组织(离癌组织>3 cm)标本纳入癌旁组(n=146)。采用免疫组化法检测组织中CCNA1、CDC20表达情况。通过χ2检验分析CCNA1、CDC20表达与CRC患者临床病理特征的关系,采用多因素Cox回归分析探讨CRC患者预后的相关因素。结果CRC组CCNA1、CDC20的阳性表达率均高于癌旁组,差异有统计学意义(均P<0.05)。分化程度为低分化、TNM分期为Ⅲ期、有神经侵犯的患者CCNA1阳性表达率、CDC20阳性表达率分别高于中/高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无神经侵犯患者,差异有统计学意义(均P<0.05)。分化程度中/高分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无神经侵犯、CCNA1阴性、CDC20阴性患者3年生存率分别高于分化程度低分化、TNM分期Ⅲ期、有神经侵犯、CCNA1阳性、CDC20阳性患者,差异有统计学意义(均P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,低分化(HR=2.125,95%CI:1.406~3.214)、TNM分期Ⅲ期(HR=2.614,95%CI:1.504~4.544)、有神经侵犯(HR=2.337,95%CI:1.498~3.647)、CCNA1阳性(HR=2.765,95%CI:1.758~4.348)、CDC20阳性(HR=3.550,95%CI:2.075~6.074)是CRC患者预后的影响因素(P<0.05)。结论CCNA1、CDC20在CRC患者癌组织中均呈高表达,与肿瘤分期、分化程度密切相关,有望作为辅助评估CRC患者预后的潜在标记物。

cyclinA1基因变异诱导小鼠发生头颈部皮肤病变

目的研究cyclinA1基因变异对活体小鼠动物模型可能产生的影响。方法饲养46只cyclinA1基因变异的小鼠与25只同龄野生型小鼠9～24个月，进行比较观察。对发现病变部位的组织切片和对照标本采用HE染色和免疫组织化学染色方法检查。结果cyclinA1基因变异鼠中，约有24％（11／46）在头颈部发生了深溃疡状的皮肤病变，HE染色结果显示病变及病变周围皮肤过度角化，皮脂腺增生明显。而25只野生型鼠中未见类似改变。以cyclinA1特异性抗体进行免疫组织化学染色结果显示，野生型小鼠的皮脂腺内可以观察到明显的染色，而cyclinA1基因变异小鼠标本中没有染色。结论cyclinA1基因变异是导致本实验中观察到的小鼠发生头颈部皮肤病变的直接或间接原因。

乳腺癌新辅助化疗与Cyclin A1、CyclinD、ki-67表达水平的关系

目的通过研究Cyclin A1、Cyclin D在乳腺癌患者新辅助化疗前后的相关性,探索Cyclin A1、Cyclin D表达及相关性在乳腺癌新辅助化疗中的意义。方法收集河南省肿瘤医院2008年8月—2011年7月收治的行TEC/PEC新辅助化疗的乳腺癌患者的临床及病理学信息,并对对应的石蜡标本进行Cyclin A1、Cyclin D的免疫组化化学染色,采用秩和检验和Spearman相关性分析Cyclin A1、Cyclin D表达的相关性,及预后的影响,并进行亚组分析。结果在204例接受新辅助化疗的患者中,在CR或PR组中,在化疗前后Cyclin A1、Cyclin D的表达具有显著差异,化疗前后Cyclin A1/Ki67、Cyclin D/Ki67具有显著差异,但新辅助患者的生存时间与化疗前后Cyclin A1/Ki67、Cyclin D/Ki67差值无相关性。结论新辅助化疗前后的Cyclin A1、Cyclin D可作为明确乳腺癌新辅助疗效及药物敏感性的参考数据,但与患者生存无关。

CCNA1在甲状腺癌组织中的表达及其与甲状腺癌预后关系的研究

目的探讨细胞周期蛋白A1(Cyclin A1,CCNA1)在甲状腺癌组织中的表达及其与甲状腺癌预后的关系。方法收集本院2016年1月至2017年9月期间收治的,术后确诊为甲状腺癌的104例患者的甲状腺癌组织。采用免疫组织化学染色法,检测患者甲状腺癌组织中CCNA1蛋白的表达情况。根据甲状腺癌组织CCNA1蛋白表达检测结果进行分组,将CCNA1蛋白表达阳性的病例设为阳性组(55例),将CCNA1蛋白表达阴性的病例设为阴性组(49例)。分析CCNA1蛋白表达与甲状腺癌临床病理特征的关系。比较阳性组、阴性组的无进展生存期(progression-free survival,PFS)、总生存期(overall survival,OS)。结果CCNA1蛋白表达情况与甲状腺癌患者的肿瘤直径、TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况密切相关。肿瘤直径≥4 cm、TNM分期为III/IV期、分化程度低、有淋巴结转移的患者,CCNA1蛋白表达阳性的构成比更高(P<0.05)。总体5年生存率为90.38%。CCNA1蛋白表达阴性组、阳性组的中位OS分别为64.61个月、62.86个月,组间差异有统计学意义(χ^(2)=3.906,P=0.048)。CCNA1蛋白表达阴性组、阳性组的中位PFS分别为59.02个月、54.67个月,组间差异有统计学意义(χ^(2)=4.351,P=0.037)。结论CCNA1蛋白表达与甲状腺癌肿瘤直径、TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况等均有密切关系,CCNA1蛋白表达水平高,则甲状腺癌患者预后较差。

肝细胞肝癌中CyclinA1的表达及意义

目的 探讨细胞周期蛋白A1(CyclinA1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及意义。方法 应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot方法,分别检测新鲜HCC及相应癌旁非瘤组织中CyclinA1 mRNA和蛋白的表达水平;应用组织芯片及免疫组织化学方法,检测HCC及相应癌旁非瘤石蜡包埋组织中CyclinA1蛋白的表达情况。结果 新鲜HCC组织中CyclinA1 mRNA和蛋白质的表达均明显高于相应癌旁非瘤组织(t=4.739、12.690,P<0.01);HCC石蜡包埋组织中CyclinA1的表达高于癌旁非瘤组织(z=-16.019,P<0.001)。CyclinA1的表达水平与HCC分化程度、TNM分期、肿瘤是否多发、脉管侵犯、被膜侵犯和肿瘤大小有关(χ^(2)=4.559~15.551,P<0.05)。生存分析表明,CyclinA1低表达HCC病人的术后总体和无病生存时间较高表达者更长(χ^(2)=15.060、12.930,P<0.05)。Cox多因素回归分析表明,CyclinA1、分化程度、肿瘤是否多发、肿瘤大小是影响HCC病人术后总体及无病生存时间的独立预后因素(β=-1.379~1.453,HR(95%CI)=0.252(0.145~0.436)~4.274(2.188~8.350),P<0.05)。结论 CyclinA1可能促进HCC发生,并且促进肿瘤的生长及侵袭转移;CyclinA1高表达提示病人预后不良,可作为判断HCC病人预后的潜在分子标志物及潜在治疗靶点。

细胞周期蛋白A1 mRNA在骨髓增生异常综合症中的表达及其临床意义

本研究探讨骨髓增生异常综合症(MDS)患者中细胞周期蛋白A1(cyclin A1)mRNA表达及其临床意义。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测56例骨髓增生异常综合症患者及10例正常人骨髓细胞中的cyclin A1表达及cdk2、p21cip1的mRNA表达。结果表明:MDS患者中cyclin A1的阳性率及mRNA表达水平(69.64%;0.964±1.879)均较正常人(0%;0.012±0.014)明显增高(p<0.01);在初治MDS患者中,MDS-RAEB组cyclinA1表达水平(1.895±1.769)明显高于MDS-RA组(0.629±1.583)(p<0.01);治疗后MDS患者的cyclin A1表达水平较治疗前明显降低(p<0.01)。结论:MDS患者cyclin A1表达水平较正常人明显增高,其异常表达可能是影响MDS患者预后的指标之一。

细胞周期蛋白A1对SKM-1细胞增殖的影响及其在骨髓异常增生综合征中的作用

目的:通过小干扰RNA(siRNA)下调Cyclin A1的表达,观察其对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系SKM-1细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法:采用阳离子脂质体转染方法,在SKM-1细胞中转染Cyclin A1的siRNA;转染48 h后收集细胞,应用Western blot及RT-PCR测定转染效率;应用CCK-8方法检测细胞增殖,Western blot及RT-PCR检测Cyclin A1基因沉默前后CDK2、RUNX1、SRSF2基因表达的水平。结果:转染Cyclin A1特异性siRNA 48 h后,Cyclin A1蛋白及mRNA表达水平显著下降(P<0.01)。下调Cyclin A1后,SKM-1细胞的增殖受抑,CDK2、RUNX1及SRSF2基因的蛋白及mRNA表达量均下调(P<0.05)。结论:Cyclin A1表达下调后,SKM-1细胞的增殖受到抑制,表明Cyclin A1可能是MDS治疗的潜在靶点之一。

子宫内膜样腺癌中CD74和细胞周期蛋白A1的表达及关联性

目的应用流式细胞术检测子宫内膜样腺癌中CD74和Cyclin A1的半定量表达,分析其临床意义。方法观察组为82例子宫内膜样腺癌术后患者,对照组为34例子宫肌瘤行子宫全切后的子宫内膜组织,均留取术后新鲜组织,应用流式细胞术检测两组中CD74和Cyclin A1的表达,分析二者在不同临床病理特征中的差异。结果两组中CD74和Cyclin A1的表达量差异有统计学意义(P<0.001)。观察组中CD74和Cyclin A1表达与肿瘤浸润深度和增殖指数相关,CD74表达与肿瘤分化程度相关。线性相关分析显示CD74和Cyclin A1二者无明显相关性。结论 CD74和Cyclin A1在子宫内膜样腺癌中表达升高,对促进病变的形成和进展有重要作用。二者不存在明显的协同作用,其作用机制可能是各自独立的通路作用。

CDKN3和FOXA1 mRNA在直肠癌中的表达关系及意义

目的:探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(CDKN3)和叉头框蛋白A1(FOXA1)mRNA在直肠癌中的表达水平及其临床意义。方法:选取2017年11月至2020年3月在唐山市协和医院和解放军陆军第82集团军医院就诊的94例直肠癌患者作为观察组,另选取同时期在医院进行常规体检的健康人群95例,作为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测直肠癌患者血清中的CDKN3和FOXA1 mRNA表达情况;分析高、低级别直肠癌患者血清CDKN3和FOXA1 mRNA的表达水平;分析CDKN3、FOXA1 mRNA水平与直肠癌患者临床病理特征的关系;预测CDKN3和FOXA1 mRNA水平对高、低直肠癌患者的诊断价值。结果:观察组血清中CDKN3与FOXA1 mRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05);高级别直肠癌患者血清中CDKN3、FOXA1 mRNA的表达量明显高于低级别直肠癌患者(P<0.05);直肠癌患者血清中CDKN3、FOXA1 mRNA表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结是否转移有关(P<0.05);CDKN3 mRNA诊断高、低级别直肠癌的ROC曲线下面积为0.839,截断值为5.317,灵敏度为63.8%,特异性为94.4%;FOXA1 mRNA诊断高、低级别直肠癌的ROC曲线下面积为0.853,截断值为0.740,灵敏度为70.7%,特异性为97.2%。结论:直肠癌患者血清中CDKN3、FOXA1 mRNA表达量上升,且高级别直肠癌患者二者表达量显著高于低级别直肠癌患者,CDKN3、FOXA1 mRNA参与直肠癌病情进程与发展,对高、低级别直肠癌诊断具有一定价值。

SPY1和p27^(kip1)在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的:探讨SPY1(Speedy A1)和p27^(kip1)(cyclin-dependent kinase inhibitor 1B,p27)在子宫内膜癌中的表达情况及其临床意义。方法:采用生物医学信息数据库分析子宫内膜癌中SPY1、p27^(kip1) mRNA表达水平;采用免疫组织化学染色法及蛋白质印迹法检测子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中SPY1、p27^(kip1)蛋白的表达水平,并分析其表达与患者临床病理参数、激素受体、癌症基因组图谱分子分型的关系,以及两者之间的相关性。通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线,应用Cox比例风险模型分析影响子宫内膜癌患者的预后因素。结果:SPY1在子宫内膜癌组织中的蛋白质表达水平显著高于不典型增生的子宫内膜及正常子宫内膜组织(P=0.009),p27kip1在子宫内膜癌组织中的蛋白质表达水平显著低于不典型增生的子宫内膜及正常子宫内膜组织(P=0.001);SPY1蛋白表达与肿瘤病理分级(P=0.023)、国际妇产科协会(The International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)癌分期(P=0.003),肌层浸润深度(P=0.010)及淋巴结转移(P<0.001)有关,p27kip1蛋白表达与肿瘤病理分级(P=0.001)、FIGO癌分期(P=0.001)及淋巴结转移(P<0.001)有关;SPY1与p27kip1表达呈负相关(r=−0.563,P<0.001);Kaplan-Meier预后分析表明SPY1高表达患者生存率低于低表达患者(P<0.05),p27kip1高表达患者的生存率高于低表达患者(P<0.05)。Cox单因素及多因素分析表明FIGO癌分期(P=0.023)、病理分级(P<0.001)、淋巴结转移(P<0.001)及p27kip1表达(P<0.001)可作为子宫内膜癌患者的独立预后指标。结论:子宫内膜癌组织中SPY1蛋白呈高表达,p27kip1蛋白呈低表达,且两者之间呈负相关,可用于评估子宫内膜癌的发生和发展。

RNA沉默抑制子p19调控细胞周期相关蛋白表达(英文)

番茄丛矮病毒的P19蛋白不仅是一个重要的病毒致病因子,而且还可作为RNA干扰(RNAi)的抑制子.这种作用是通过限制细胞内的小RNA,比如小干扰RNA(siRNAs)和微RNA(miRNAs)来实现.但是目前对P19蛋白在哺乳动物细胞上的作用还未见报道.构建了一株p19稳定表达的293细胞系,即293-p19.流式细胞仪分析发现在293细胞中过量表达P19蛋白可显著引发细胞周期的G2/M阻滞.细胞增殖实验显示,293-p19细胞的DNA复制及细胞生长均受到显著的抑制.此外,研究还发现p19可使人胚肾293细胞内的细胞周期调控子的表达谱发生改变.其中包括上调cyclinA1,CDK2,CDK4,CDK6,p18,cyclinD2,p19INK4d和E2F1,及下调p15,cyclinA,cyclinB1和cyclinE1的表达.上述研究结果提示,p19有可能靶向多个G2/M调控蛋白从而引发细胞的G2/M阻滞.

细胞周期蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及活性测定

近来发现了一个新的A型细胞周期素基因A1(cyclinA1) ,在人源白血病细胞系及一些肿瘤细胞系中高表达 ,推测它的过量表达可能与肿瘤的发生相关。将cyclinA1和cdk2的基因插入到杆状病毒中 ,在sf9昆虫细胞中进行了表达。蛋白印迹试验结果表明 ,这两种基因可以在该系统中稳定地表达 ;对B myb蛋白的磷酸化和脱磷酸化试验表明 ,杆状病毒表达系统表达的这两种基因的产物具有生物活性。

肺癌细胞株中发现一种细胞周期素A2的异常剪接体

目的检测细胞周期素(cyclinA1和cyclinA2)在4种肿瘤细胞中的表达,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用RT PCR和DNA测序技术观察cyclinA1和cyclinA2的基因表达并进行序列分析。结果cyclinA1在4种肿瘤细胞中均未检测到表达,而cyclinA2在4种肿瘤细胞中均有表达;在肺癌细胞株(LTEP a2)细胞中,发现一种cyclinA2异常的剪接体,其保留了第四内含子,而缺失了第五外显子,其序列编码蛋白质也发生了突变,只保留了5′端194氨基酸。结论细胞周期素表达与肿瘤发生有一定相关性,LTEP a2细胞中存在细胞周期素A2异常表达,其机制与作用有待进一步的研究。

吴茱萸碱对人结肠癌细胞周期阻滞及凋亡的影响

目的探讨吴茱萸碱对人结肠癌细胞周期阻滞及凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人结肠癌HCT-116细胞分别加入吴茱萸碱1.5,3.0,6.0和12μmol·L-1继续培养24,48和72 h,CCK-8法检测吴茱萸碱对HCT-116细胞存活的影响;用流式细胞术检测吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡和细胞周期的影响;倒置显微镜镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜观察Hoechst染色后细胞凋亡的形态学改变;Western蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白A1的表达及凋亡相关蛋白P53,Bax,Bcl-2,激活型胱天蛋白酶3的表达。结果吴茱萸碱1.5,3.0和6.0μmol·L-1作用24,48和72 h后,HCT-116细胞增殖受到抑制(P<0.05),且呈时间(r时间=0.744,P<0.05)和浓度(r浓度=0.953,P<0.01)依赖性。吴茱萸碱作用HCT-116细胞48 h后,S期细胞由正常对照组的(13.9±7.0)%增加至(39.7±11.7)%(P<0.05);细胞凋亡率由正常对照组的(4.2±3.0)%增加至(14.9±5.8)%(P<0.05)。光学显微镜下可见,随着药物浓度的增加,细胞的形态发生改变,胞膜破裂,产生细胞碎片,并出现大量漂浮细胞;Hoechst染色可见部分细胞出现细胞核固缩、核发白、染色质凝集等凋亡变化;P53、Bax和激活型胱天蛋白酶3蛋白表达增加,Bcl-2、细胞周期蛋白A1蛋白表达下降。结论吴茱萸碱能够通过下调细胞周期蛋白A1的表达;激活P53信号通路,下调Bcl-2、上调Bax,破坏Bcl-2/Bax的比例;激活胱天蛋白酶3,共同促进人结肠癌HCT-116细胞的凋亡。

洋地黄毒苷对肺癌NCI-H446与A549细胞增殖和周期的影响

目的:探讨洋地黄毒苷对肺癌NCI-H446与A549细胞增殖和细胞周期的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:体外培养的NCI-H446与A549细胞分别经不同浓度(10、20、40、80、160 nmol/L)的洋地黄毒苷处理24、48和72 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况,应用流式细胞术检测洋地黄毒苷处理细胞48 h后各组细胞周期分布,Western blot检测细胞中Cyclin A和P21蛋白表达水平。结果:与未经洋地黄毒苷处理的对照组相比,不同浓度(10、20、40、80和160 nmol/L)的洋地黄毒苷均可抑制NCI-H446与A549细胞的增殖,均呈剂量和时间依赖性(P<0.05),作用48 h后,洋地黄毒苷对NCI-H446与A549细胞的IC值分别为61.26 nmol/L和50110.73 nmol/L。流式细胞仪分析结果显示,随药物作用浓度增加,G0/G1细胞比例降低,S期细胞比例显著增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot分析结果显示,洋地黄毒苷能剂量依赖性的下调Cyclin A1蛋白表达和上调P21蛋白的表达(P<0.05)。结论:洋地黄毒苷可抑制体外培养的肺癌NCI-H446与A549细胞增殖,诱导细胞发生S期阻滞,其机制可能与细胞周期相关调控蛋白的表达有关。

Torin1调节细胞周期抑制人肝癌HepG2细胞增殖的体外研究

目的研究Torin1对人肝癌Hep G2细胞生长的影响及其可能机制。方法 CCK8法检测不同浓度(0.1,0.5,1.25,2.5,5)μmol·L-1Torin1对Hep G2细胞48h后细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度(1.25,2.5,5)μmol·L-1Torin1处理前后Hep G2细胞周期的变化,Real time PCR和Western blot法检测不同浓度(1.25,2.5,5)μmol·L-1Torin1处理前后Hep G2细胞细胞周期抑制蛋白P27和细胞周期蛋白A1(cyclin A1)mRNA表达水平和蛋白表达水平的变化。结果Torin1作用于Hep G2细胞后,Hep G2细胞增殖明显呈浓度依赖型抑制,1.25,2.5,5μmol·L-1Torin1作用于Hep G2细胞48h后,细胞周期S期明显增多,P27 mRNA和蛋白表达水平呈浓度依赖性增加,cyclin A1 mRNA和蛋白表达水平呈浓度依赖性减少。结论体外应用Torin1可显著抑制人肝癌细胞Hep G2细胞生长,这可能是通过增加抑制细胞周期蛋白P27表达,减少细胞周期蛋白A1的表达来阻碍细胞周期进程。

细胞周期蛋白A1影响肝细胞癌浸润转移及预后

目的探讨细胞周期蛋白(Cyclin)A1对肝细胞癌(HCC)浸润转移及预后的影响。方法免疫组织化学检测Cyclin A1在HCC及其相应癌旁非瘤石蜡组织中的表达情况;Kaplan-Meier法对HCC患者进行生存分析。蛋白质印迹法(WB)检测HCCLM3和QGY-7703细胞中Cyclin A1的表达。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测Cyclin A1过表达对细胞迁移及侵袭能力的影响。WB检测CyclinA1过表达后细胞基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。计量资料比较用t检验、方差分析;计数资料用χ^(2)检验;Log-Rank法进行生存分析。结果复发转移患者HCC组织中Cyclin A1的高表达率高于未复发转移患者(60.42%与46.81%,χ^(2)=4.711,P<0.05);CyclinA1高表达的患者术后总体生存时间(OS)及无病生存时间(DFS)均短于低表达患者(45.9个月与53.1个月;42.9个月与51.3个月,P值均<0.01);CyclinA1高表达的术后复发转移患者术后OS及DFS也均短于低表达的患者(31.7个月与43.9个月;18.0个月与31.5个月,P值均<0.05)。HCCLM3和QGY-7703细胞在Cyclin A1-pEX组中CyclinA1表达水平高于空白载体(Vector)组(1.56±0.06与0.18±0.01,t=18.75,P<0.001;1.31±0.05与0.37±0.02,t=15.17,P<0.001);HCCLM3细胞在Cyclin A1-pEX组与Vector组的迁移距离分别为(536.7±14.5)μm与(327.3±9.3)μm,t=11.84,P<0.05;QGY-7703细胞在2组的迁移距离分别为(916.7±35.3)μm与(320.0±20.8)μm,t=13.54,P<0.01。HCCLM3细胞在CyclinA1-pEX组与Vector组的迁移个数分别为(37.3±2.4)个与(7.0±1.2)个,t=12.67,P<0.001;侵袭细胞数分别为(73.7±4.1)个与(12.6±1.5)个,t=12.36,P<0.001。QGY-7703细胞在2组的迁移个数分别为(153.3±6.0)个与(17.7±3.7)个,t=17.59,P<0.001;侵袭细胞数分别为(45.0±2.9)个与(9.3±1.5)个,t=10.66,P<0.001。HCCLM3和QGY-7703细胞在CyclinA1-pEX组的MMP2、MMP9和VEGF的表达水平明显高于Vector组(P值均<0.05)。结论Cyclin A1在HCC浸润转移中发挥重要作用,高表达Cyclin A1的HCC患者预后不良;Cyclin A1对判断患者预后具有较高的指导意义。

CDK5介导的PPARγ磷酸化在动脉粥样硬化泡沫细胞形成过程中的作用

目的探讨细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)介导的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)磷酸化在动脉粥样硬化中的作用。方法常规培养小鼠Raw264.7巨噬细胞,实验设对照组(C组)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组(O组,50mg/Lox-LDL)、Roscovitine+ox-LDL组(R组,15μmol/LRoscovitine+50mg/Lox-LDL)。待细胞融合至70%左右,R组加入15μmol/LRoscovitine预处理30min,之后O组和R组分别加入50mg/Lox-LDL继续培养24h,使其转化为泡沫细胞;C组不作处理。利用Westernblot检测各组pPPARγ、tPPARγ、p35和CDK5蛋白表达的变化,油红O染色和异丙醇萃取实验分析各组细胞内脂质聚积情况,酶法测定细胞内胆固醇含量,反转录PCR(RT-PCR)检测各组ox-LDL摄取相关基因CD36、SR-A1和胆固醇外流相关基因ABCA1、ABCG1的mRNA表达水平。结果ox-LDL诱导后,O组pPPARγ/tPPARγ比值、p35/CDK5比值、细胞内脂质聚积、总胆固醇含量、游离胆固醇含量、胆固醇酯/总胆固醇比值均较C组明显升高(P<0.05);CDK5抑制剂干预后,R组上述指标均较O组降低(P<0.05)。RTPCR结果显示,ox-LDL诱导后,O组ox-LDL摄取相关基因CD36、SR-A1的mRNA表达水平升高,而胆固醇外流相关基因ABCA1、ABCG1的mRNA表达水平降低(P<0.05);CDK5抑制剂干预后,上述指标变化与O组呈相反趋势(P<0.05)。结论CDK5/pPPARγ途径参与动脉粥样硬化泡沫细胞的形成。

非小细胞肺癌细胞周期调节蛋白A1及乳腺癌易感基因1基因甲基化研究

目的探讨细胞周期调节蛋白A1（细胞周期素A1，CCNA1）及乳腺癌易感基因1（BRCA1）甲基化在非小细胞肺癌（NSCLC）患者中的发生频率。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法检测50例临床上经病理确诊为非小细胞肺癌患者（实验组）和20例良性肺部疾病患者（对照组）CCNA1及BRCA1甲基化的状态，以建立广西非小细胞肺癌相关基因的甲基化谱式。结果在50例非小细胞肺癌患者CCNA1及BRCA1甲基化率分别为70．0％（35／50）和84．0％（42／50）。对照组中20例良性肺部疾病患者这2个基因均为去甲基化。结论检测非小细胞肺癌患者CCNA1及BRCA1基因DNA甲基化状态有助于诊断非小细胞肺癌。

基于ISSR,AFLP分子标记和cyclins基因克隆的异源四倍体鲫鲤进化分析

为了解两性可育、遗传性状稳定的异源四倍体鲫鲤基因组的进化情况,用ISSR,AFLP分子标记及cyclin A1和B1基因克隆的方法,从多倍体基因组和单个基因在多倍体形成前后的变化两个角度对上述问题进行了探讨分析.研究结果表明,异源四倍体鲫鲤经过连续15代培育,仍然保持了原始亲本遗传性状的稳定性,但基因组的遗传相似性及cyclins基因的碱基变异水平都说明异源四倍体鲫鲤具有明显的偏母性遗传特性.ISSR和AFLP分析表明,在异源四倍体鲫鲤基因组中,除了新产生的、原始亲本中没有的DNA条带外,还发生了原始亲本的DNA带纹消失,而且消失的带纹倾向于父本基因组.cyclins基因序列分析表明,在异源四倍体鲫鲤不同于原始亲本的核苷酸变异位点中,由于存在密码子单个碱基的非同义突变导致了异源四倍体鲫鲤新的氨基酸位点的产生.异源四倍体鲫鲤上述基因组的非加性变化,可能是应对杂交和多倍化冲击而使其趋于遗传稳定的一种适应性变化.