Cyclin D_1反义寡核苷酸对人黑色素瘤细胞周期的影响及对细胞增殖抑制作用的研究

目的 探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法 合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑色素瘤细胞增殖的影响。结果 cyclinD1反义寡核苷酸能增加G1期细胞百分比 ,降低S期细胞百分比 ,且明显抑制人黑色素瘤细胞生长和集落形成。结论 CyclinD1反义寡核苷酸能有效抑制人黑色素瘤细胞的增殖。

膀胱肿瘤患者外周血淋巴细胞p16和cyclin D_1的表达及其临床意义

目的 研究膀胱肿瘤患者外周血中淋巴细胞p16和cyclinD1的表达及其临床意义。方法 应用FCM检测 4 7例膀胱癌及 2 0例对照组的外周血淋巴细胞中 p16和cyclinD1的表达。结果 膀胱癌患者p16和cyclinD1基因蛋白的平均表达率分别为 (2 .4 8± 0 .91) %、(12 .4 8± 9.2 7) %与正常人群的表达率 (7.4 9± 5 .2 2 ) %、(0 .6 6± 0 .5 ) %比较有显著差异 (P <0 .0 1) ;治愈 37例中 p16和cyclinD1的表达率正常 ,而复发者 p16和cyclinD1无一例在正常值以内。结论 外周血淋巴细胞 p16和cyclinD1的异常表达与荷瘤状况有密切关系 ,有望为分子诊断与筛选提供依据 ,并可作为膀胱癌复发的监测指标。

黄芪建中汤对脾气虚肺癌小鼠免疫功能及cyclin D_1基因表达的影响

目的观察黄芪建中汤对脾气虚肺癌小鼠免疫功能及cyclin D1基因表达的影响,探讨黄芪建中汤对脾气虚肺癌小鼠抑瘤作用的可能机制。方法用苦寒泻下法建立小鼠脾气虚模型,并接种Lewis肺癌瘤株。造模小鼠随机分成正常组、肿瘤对照组、模型对照组、黄芪建中汤低、中、高剂量组,用药14 d后,眼球取血,检测血清木糖及胃泌素水平;取肿瘤组织,用RT-PCR方法检测cyclin D1-mRNA表达。结果黄芪建中汤明显改善脾气虚小鼠的整体状况;抑制肿瘤的生长,提高小鼠脾指数、胸腺指数;提高脾气虚小鼠的血清木糖、胃泌素;下调肿瘤组织cyclin D1-mRNA的表达。结论黄芪建中汤可能是通过改善脾气虚肺癌小鼠的免疫水平、下调肿瘤组织cyclin D1-mRNA的表达,达到抑制肿瘤的生长。

慢性胃炎肠化生CD_(44)、CD_(44V6)及Cyclin D_1、Cyclin E的表达和意义

目的探讨慢性胃炎胃粘膜肠化生CD44、CD44V6及cyclin D1、Cyclin E表达的意义。方法利用免疫细胞化学技术对39例伴有肠化生的慢性胃炎和5例正常人胃窦粘膜的活检组织进行检查。结果正常人胃窦粘膜上皮,腺上皮对CD44、CD44V6、Cyclin D1和Cyclin E均为阴性,但在有神经内分泌样细胞的粘膜,CD44V6和cyclin D1为阳性。慢性胃炎肠化生区和不典型增生区除CD44为阴性外,CD44V6、cyclin D1和cyclin E均呈现不同的阳性反应,但未见有阳性的神经内分泌样细胞。间质细胞大都呈阳性反应。结论CD44V6、cyclin D1和cyclin E可能是胃癌前状态的早期事件,而CD44可能为胃癌晚期的标志物。

人细胞周期蛋白cyclin D_1基因RNAi表达载体的构建与鉴定

[目的]构建针对人细胞周期蛋白cyclinD1基因的RNAi真核表达载体,检测其对人卵巢癌HO-8910细胞cyclinD1基因表达的干扰效率。[方法]以cyclinD1为靶向设计,合成的4条互补寡核苷酸链克隆至pSUPER载体中,得到重组质粒pSUPER-C1￣4,行双酶切分析后测序鉴定;运用脂质体介导转染HO-8910细胞,G418筛选;采用RT-PCR检测对cyclinD1基因mRNA表达的干扰,并筛选有效的siRNA干扰序列。[结果]经酶切测序鉴定证实,重组质粒中已插入目的序列;RT-PCR表明有4个重组载体均不同程度抑制目的基因的转录,但以pSUPER-C2的干扰效率最强。[结论]在卵巢癌细胞系筛选出有效干扰cyclinD1基因表达siRNA序列,成功构建针对cyclinD1基因的RNAi真核表达载体有效抑制目的基因的表达。

Cyclin D_1在肝细胞癌中的表达及意义

目的 探讨CyclinD1蛋白表达在肝细胞癌发生、发展中的作用。方法 免疫组化S -P法检测 4 0例肝细胞癌 (HCC)、15例肝硬化组织和 5例正常肝组织石蜡标本CyclinD1蛋白表达。结果 CyclinD1蛋白在HCC、肝硬化、正常肝组织表达阳性率分别为 5 7.5 % (2 3/ 4 0 )、4 6 .6 7% (7/ 4 0 )、4 0 % (2 / 5 ) ,CyclinD1蛋白在HCC中表达与肝硬化和正常肝组织中表达比较无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,CyclinD1表达仅与HCC的组织学分级有统计学差异。结论 CyclinD1与HCC的发生、发展有一定联系 ,在判断患者病情预后方面有较重要的价值。

大鼠混合反流模型中COX-2、PCNA、Cyclin D_1的表达

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)这3项指标在反流性食管炎的发生、发展及癌变过程中的变化情况。方法健康SD大鼠54只,随机分为2组:反流模型组46只,正常对照组8只。分别观察反流模型组术后5、17、28、40周,正常对照组40周时食管黏膜的病理变化,检测COX-2、PCNA、Cyclin D1的表达情况。结果在反流性食管炎的发展过程中,COX-2、PCNA、Cyclin D1从正常→反流性食管炎(RE)→Barrett食管(BE)→食管腺癌(EAC)的阳性表达率分别为0.0%、42.1%、73.7%、100.0%;0.0%、42.1%、63.2%、100.0%;12.5%、42.1%、63.2%、100.0%。COX-2、PCNA、Cyclin D1的表达程度逐渐增强。RE、BE、EAC的表达明显高于正常对照(P<0.05),RE与BE、EAC间有显著性差异(P<0.05),BE和EAC间无统计学差异可能是EAC的例数较少。结论在混合反流造成黏膜损伤形成RE的同时,COX-2、PCNA和Cyclin D1的表达增强,并随病程的发展逐渐增强。说明COX-2、PCNA和Cyclin D1基因的高表达参与了从RE→BE→EAC的发展过程,是BE、EAC发生、发展的早期分子事件。

Cyclin D_1和p16、p27在脑胶质瘤中的表达及其与PCNA的相关性

目的 :检测CyclinD1 和p16、p2 7以及PCNA在脑胶质瘤中的表达状况 ,以探讨不同病理类型脑胶质瘤中各自的表达及其相关性。方法 :应用免疫组化S P法 ,检测 12例正常脑组织、5 8例脑胶质瘤组织中CyclinD1 、p16、p2 7及PCNA表达及其特征。结果 :CyclinD1 在由低度恶性胶质瘤向高度恶性胶质瘤转化中阳性表达逐渐增强 (χ2 检验 ,P <0 0 0 5 ,χ2 =5 1 6 7) ;而p16、p2 7阳性表达却是随着胶质瘤恶性程度的升高而降低 (χ2 检验 ,P值均 <0 0 0 5 ,χ2 分别为 15 4 1和 12 81)。CyclinD1 与PCNA呈正相关 ,rs =0 74 5 ;p16和p2 7与PCNA呈负相关 ,rs分别为 - 0 5 6 6和 - 0 6 12。结论 :脑胶质瘤中CyclinD1的表达程度对胶质瘤的细胞增殖活性起促进作用 ,而p16、p2 7的表达则起抑制作用。

金雀异黄素抑制人胃癌细胞增殖作用的研究—抑制细胞DNA合成与cyclin D_1表达的研究

采用细胞增殖、DNA合成实验观察了金雀异黄素 (Gen)对体外培养的人胃癌SGC 790 1细胞的生长抑制作用 ,并观察了Gen对人胃癌细胞细胞周期素D1 (cyclinD1 )蛋白的表达情况。结果显示 ,Gen对胃癌细胞生长及其DNA合成有抑制作用 ,并降低cyclinD1 蛋白的表达 ,且呈剂量 效应关系。结果证实 ,Gen抑制胃癌细胞增殖作用的机制之一可能是通过抑制DNA合成及抑制cyclinD1 的表达。

人膀胱癌荷瘤鼠中shRNA沉默ΔNp63基因对肿瘤的抑制和cyclin D_1表达的影响

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默ΔNp63基因的表达,研究其对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用,同时检测ΔNp63基因被抑制后对细胞周期素D1(cyclin D1)表达的影响。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植模型,构建ΔNp63基因特异性shRNA(short hairpin)表达质粒,将表达质粒转染荷瘤鼠瘤体。将符合实验条件的15只裸鼠分为3组:ΔNp63-shRNA组、Control-shRNA组与生理盐水组,每组5只。观察各组肿瘤生长情况、瘤组织超微结构的改变,检测ΔNp63基因和蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和cyclin D1蛋白表达的变化。结果转染质粒8周后,ΔNp63-shRNA组与生理盐水组瘤体积有显著性差异(P<0.01),抑瘤率为74.44%,Control-shRNA组与生理盐水组体积无显著性差异(P>0.05)。病理结果显示ΔNp63-shRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞核分裂象减少,可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡、炎症细胞浸润。RT-PCR结果显示ΔNp63-shRNA组ΔNp63基因表达降低。免疫组化结果显示ΔNp63、PCNA、cyc-lin D1蛋白表达均降低。结论ΔNp63特异性shRNA质粒表达载体沉默ΔNp63基因后,可显著抑制人膀胱癌裸鼠肿瘤的生长,ΔNp63可能通过抑制cyclin D的表达而抑制肿瘤的细胞增殖。

和胃降逆法对反流性食管炎患者食管黏膜cyclin D_1、CDK_4表达的影响

目的:通过观察和胃降逆法对反流性食管炎患者食管黏膜cyclin D1(细胞周期蛋白1)、CDK4(细胞周期蛋白依赖性激酶)表达的影响,探讨和胃降逆法治疗反流性食管炎的作用机理。方法:选择120例反流性食管炎患者,分为中药治疗组、西药治疗组。中药治疗组以和胃降逆法治疗,选用和胃降逆方1包;西药治疗组予奥美拉唑胶囊20 mg;两组均1日2次,共8周。两组患者治疗前后均行胃镜检查及食管黏膜病理活检,观察临床疗效及食管黏膜病理学改变,免疫组化法测定食管黏膜cyclin D1、CDK4的表达。结果:和胃降逆法能明显改善反流性食管炎患者的临床症状及组织病理学积分,作用与西药相当;能明显降低反流性食管炎患者食管黏膜组织CDK4、cyclin D1的表达,其CDK4表达治疗后低于西药组,有统计学意义。结论:和胃降逆法能明显降低反流性食管炎患者食管黏膜组织CDK4、cyclin D1的表达,是其治疗反流性食管炎的作用机理之一。

p16和cyclin D_1蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义

目的 探讨鼻咽癌组织中p16和cyclinD1蛋白的表达及其意义。方法 应用免疫组化S P法检测p16和cyclinD1蛋白在 85例鼻咽癌和 18例鼻咽部炎性黏膜组织中的表达。结果 85例鼻咽癌中p16的表达率为 41 2 %(35 / 85 ) ;cyclinD1的过表达率为 6 3 5 % (5 4/ 85 )。 18例鼻咽部炎性黏膜中 ,p16的表达率为 10 0 % ;cyclinD1的表达全部为阴性。高分化鳞癌p16的表达率为 75 0 % (6 / 8) ,低分化鳞癌为 38 2 % (2 6 / 6 8) ,两者差异显著 (P <0 0 5 )。有淋巴结转移的p16表达率为 2 8 6 % (14/ 49) ,无淋巴结转移的为 5 8 3% (2 1/ 36 ) ,两者差异非常显著 (P <0 0 1)。 35例p16 (+)的癌组织中有 2 8例cyclinD1呈过表达 ;5 0例p16 (- )的癌组织中有 2 6例cyclinD1呈过表达。结论 p16的缺失表达和cyclinD1的过表达两者可能单独或共同参与了鼻咽癌的发生发展过程。p16的缺失可能还与鼻咽癌细胞的分化。

尿毒净Ⅱ号对人肾系膜细胞Cyclin D_1及CDK_4表达的影响

目的 :探讨尿毒净Ⅱ号对人肾小球系膜细胞CyclinD1、CDK4的影响。方法 :应用流式细胞术、免疫组化、Westernblot方法 ,在培养的人胚胎肾小球系膜细胞 ,分别检测尿毒净Ⅱ号对系膜细胞CyclinD1、CDK4以及DNA倍体的影响。结果 :尿毒净Ⅱ号明显抑制血清加内皮素 - 1(ET - 1)刺激的系膜细胞CyclinD1、CDK4表达 ,增加G0 /G1期细胞 ,降低S +G2 /M期细胞 (与对照组比较P <0 .0 1) ,呈一定的量效依赖关系。结论 :尿毒净Ⅱ号通过抑制细胞CyclinD1、CDK4,阻止系膜细胞由G1期进入S期 ,延缓了细胞周期进程 ,从而抑制系膜细胞增殖。

Cyclin D_1在增生性子宫内膜及子宫内膜癌中的表达及意义

目的 :探讨细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白在增生性子宫内膜及子宫内膜癌中的表达及意义 .方法 :用免疫组化SP法对 14例正常子宫内膜 ,2 5例增生性子宫内膜及 4 3例子宫内膜癌中CyclinD1表达进行了研究 .结果 :正常子宫内膜、单纯加复合增生、不典型增生及子宫内膜癌中CyclinD1阳性率分别为 14 .3%,4 3.8%,77.8%,72 .1%.增生性子宫内膜、子宫内膜癌与正常内膜有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,不典型增生与单纯加复合增生CyclinD1过表达有显著性差异(P <0 .0 5 ) ;子宫内膜癌CyclinD1过表达阳性率与癌细胞分化程度有关 ,与组织学类型无关 .结论 :CyclinD1异常参与子宫内膜癌的发生 ,其过表达与子宫内膜癌的恶性生物学行为有关 ,对内膜癌CyclinD1蛋白表达的检测有助于估计其进展及预后 .

9-顺维A酸诱导肺癌细胞L78凋亡及其与Rb和Cyclin D_1基因表达的关系

目的 研究 9-顺维 A酸 (9- cis- retinoic acid,9- cis RA)诱导肺鳞癌细胞株 L 78凋亡作用及其与 Rb、Cy-clin D1 基因表达的关系 ,初步探讨其作用机制。 方法 体外培养肺鳞癌细胞株 L78,随机分为两组 ,实验组 :加入浓度为 5 μmol/ L 的 9- cis RA;对照组 :加入浓度为 0 .1%二甲亚砜。两组均培养 4 8小时后用免疫组织化学法检测 L78细胞中 Rb基因表达率 ,用流式细胞仪技术分别检测 Rb、Cyclin D1 基因表达率和肿瘤细胞凋亡率 ,并研究三者之间的相关关系。 结果 实验组肺鳞癌细胞株 L78细胞 Rb基因表达明显增强 ,Cyclin D1 基因表达降低 ,细胞凋亡率增高(P<0 .0 1)。 Rb基因表达率与细胞凋亡发生率呈正相关 (r=0 .85 4 ,P<0 .0 5 ) ,Cyclin D1 基因表达率与细胞凋亡发生率呈负相关 (r=- 0 .812 ,P<0 .0 5 )。 结论 9- cis RA可能通过 Rb基因表达增强和 Cyclin D1 基因表达降低途径 ,使细胞明显阻滞在 G0 / G1 期 ,并诱导肺鳞癌细胞株 L 78细胞凋亡。

Cyclin D_1蛋白在碳酸锂对抗黄曲霉素B1诱导大鼠肝癌过程中的表达及意义

目的与方法 :应用免疫组化法检测碳酸锂 (Li2 CO3)对抗黄曲霉素B1(AFB1)诱导大鼠肝癌过程中癌基因蛋白cyclinD1的表达及意义。结果 :cyclinD1在诱癌早期 (实验第 6周 )即有表达 ,第 10周显著增高 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1)。阳性对照组 (B)组cyclinD1蛋白阳性率最高 ,碳酸锂同时给药组 (C组 )及先期给药组 (D组 )阳性率显著降低 ,C组阳性率略高于D组。结论 :Li2 CO3 可明显对抗AFB1诱导肝癌过程中cyclinD1的表达 ,通过抑制细胞的持续性增殖从而起到抗癌作用。

P16、Cyclin D_1蛋白表达与胰腺癌生物学行为

目的 探讨 P16、Cyclin D1 蛋白表达水平与胰腺癌发生、发展及预后的关系。 方法 应用免疫组织化学 SP法结合微波抗原修复法对 5 3例原发性胰腺癌和 4 2例胰腺良性病变及正常组织中 P16蛋白及 Cyclin D1蛋白进行检测。 结果 胰腺癌组织、胰腺良性病变和正常组织中 P16蛋白的阳性率分别为 6 6 .0 4 %和 85 .71% (P<0 .0 5 ) ;Cyclin D1 表达的阳性率分别为 5 2 .83%和 2 3.81% (P<0 .0 5 ) ,P16及 Cyclin D1 蛋白表达与胰腺癌的组织分化、病理分期及术后生存期密切相关。 结论 P16及 Cyclin D1

Cyclin D_1、p27在肺癌中表达的研究

目的 研究 Cyclin D1 、p2 7基因蛋白在肺癌组织中的表达与肺癌临床病理特征的关系。方法 应用免疫组化 S- P法检测 10 9例手术切除肺癌组织标本中两种基因蛋白的表达。结果 肺癌 Cyclin D1 基因过度表达的总阳性率为 93.6 % (10 2 / 10 9)。其中鳞癌为 98% (5 0 / 5 1) ,腺癌为 97.2 % (35 / 36 ) ,小细胞癌为 77.3% (17/ 2 2 ) ;p2 7基因表达的阳性率为 33% (36 / 10 9) ,其中鳞癌为 39.1% (2 0 / 5 1) ,腺癌为 2 5 % (9/ 36 ) ,小细胞癌 31.8% (7/ 2 2 )。CyclinD1 阳性表达与肺癌的分化程度、TNM分期呈负相关。Cyclin D1 和 p2 7蛋白在肺癌组织中的表达呈负相关。结论 Cyclin D1 和 p2 7基因蛋白表达与肺癌发生。

细胞周期蛋白Cyclin D_1和Cyclin E在子宫颈鳞癌的表达及意义

目的:探讨CyclinD1和CyclinE在正常宫颈上皮、CIN和子宫颈鳞癌中表达状况。方法:收集子宫颈活检及手术标本118例,其中正常鳞状上皮14例,子宫颈上皮内瘤样变(CIN)25例,子宫颈鳞癌79例。采用SP免疫组织化学方法,检测CyclinD1和CyclinE蛋白的表达情况。结果:CyclinD1和CyclinE在正常宫颈上皮、CIN和子宫颈鳞癌的中表达水平存在显著性差异(P<0.05),在不同分化程度的宫颈癌间无显著性差异(P>0.05)。结论:在宫颈癌发生过程中伴有CyclinD1和CyclinE表达水平的增高,检测其含量改变有助于宫颈鳞癌诊断。

p27、Cyclin D_1在膀胱癌中的表达及免疫组织化学研究

目的通过检测p27kipl与Cyclin D_1在膀胱癌中的免疫组织化学研究,以探讨两者在膀胱癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征的关系。方法对70例标本进行SP免疫组织化学方法检测p27kipl,Cyclin D_1的表达水平。其中正常组织28例,膀胱癌组织52例。结果p27kipl,Cyclin D_1在正常膀胱组织中的表达率和在膀胱癌组织中的表达均具有显著性差异(P<0.01)。p27蛋白在低分化组中的表达水平显著低于高分化组(P<0.01)和中分化组(P<0.01),Cyclin D_1表达水平在低分化组中显著高于高分化组(P<0.01),在中低分化组间无显著性差异(P>0.05)。结论p27kipl的表达与临床分期无关而Cyclin D_1的表达与临床分期相关。p27kipl与Cyclin D_1的相互关系呈负相关。