靶向人CyclinE1基因RNA干扰真核表达载体的构建及筛选

目的 构建编码细胞周期蛋白（Cyclin）E1 mRNA的短发卡样RNA（shRNA）质粒表达载体,筛选出沉默效果可靠shRNA表达载体.方法 Genebank查出CyclinE1 mRNA编码区,以454～472及708～726位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,分别构建2个shRNA质粒表达载体和1个无关序列作为阴性对照,shRNA两端设计有BamHⅠ及HindⅢ双酶切位点,中间含Sal Ⅰ酶切位点,与含BamH Ⅰ及HindⅢ双酶切位点的空质粒载体连接,重组质粒经聚合酶链反应（PCR）酶切电泳及测序鉴定.质粒转染细胞后经逆转录（RT）-PCR及Western blot检测Cyclin E1 mRNA及蛋白沉默效果.结果 构建重组质粒经Sal Ⅰ酶切后扩增形成条带与理论值一致,插入片段cDNA经测序同基因文库相符.Cyclin E1 mRNA表达率在正常对照组（ACHN）、阴性质粒转染组（pGenesil-HK）分别为：0.91±0.04、0.87±0.02,明显高于稳定转染pGenesil-Cyclin E1-shRNA1组及pGenesil-Cyclin E1-shRNA2组的0.11±0.01和0.16±0.03（P＜0.05）.前两组Cyclin E1蛋白表达分别为：0.89±0.07、0.84±0.03,也显著高于后两组的0.10±0.06和0.14±0.04（P＜0.05）.结论 针对人Cyclin E1基因的shRNA质粒真核表达载体pGenesil-Cyclin E1-shRNA1构建成功且沉默效果满意.

高级别浆液性卵巢癌关键驱动基因的研究进展

高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)的驱动改变主要包括p53突变、乳腺癌易感基因(BRCA)1突变、BRCA2突变和细胞周期蛋白E1(CCNE1)扩增。其中p53突变的比率最高,是HGSOC发生的必要条件。而BRCA1/2突变与CCNE1扩增不同时出现,形成了HGSOC的不同亚群。p53突变+BRCA1/2突变型HGSOC有同源重组修复(HRR)功能缺陷,对铂类药物及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂敏感,预后相对较好;而p53突变+CCNE1扩增型HGSOC的HRR通路过度激活,对化疗药物及靶向药物均不敏感,预后差。针对肿瘤的不同基因亚型进行分群研究和治疗是未来的研究方向,对改善HGSOC的预后有重要作用。